Способ получения 7-замещенных 9а-метоксимитозана

СО 1 ОЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК сю 4 С 07 Р 487 14 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ ц Н 2ю-с-овоц,2ВЗЯЛА-С= ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(21) 3607001/23-04 (22) 03.06.83 (31) 385149 (32) 04.06.82 (33) П 3 (46) 15.08.86. Бюл. У 30 (71 ) Бристоль-Мейерз Компани (11 Я) (72) Долатрай Моханлал Виас (СА), Такуси Канеко (ЮР) и Терренс Вильям Дойле (СА) (53) 547.759.5.07(088.8) (56) Патент С 1 ПА 11 3121084, кл. 260-268, 1964.АЬдц 11 а К.Р. ег а 11. ТЬе СЬеп 1- зггу оГ ГогшащЫе Асеа 1 з. ГеггеЬейгоп, 1979, ч. 35, р. 1720-24. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 7-ЗАМЕЩЕННКХ 9 а-МЕТОКСИМИТОЗАНА общей формулы ОО СИ 2 ОС-В АОСН 3 де А - амико, метокси или группабщей формулы гВКЪ-С=М -В или оба А и В - амидиноваппа общей формулыВгВ 3 В 4 ч-с=Ив 8051806 А 3 Б водород формил или метилдород или метил: Б и Б - каждый в отдельности метил 3 4или изопропкп, или вместес атомом азота, к которомуони присоединены, образуютпиперидин или морфолин, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что митомицин С, или митомицин А, или их М -низший алкил производное подвергают взаимодействию с амидоацеталем обвей формулы где В В и Б вр 4 еют указанные зна 2 3чения;В - метил или этил,3в безводной совместимой с реакцией жидкой органической реакционной среде, выбранной иэ хлороформа, метанола, хлористого метилена или смеси хлороформа и метанола, при 50-65 С до получения соединения, где В или оба А и В представляют собой амиди новую группу общей формулы де Б 2, В и В имеют укаэанные значения.251806 10 15 25 30 Эта методика дает соединениеюЧ - 7-амино-М -диметиламинометилен,1 о-9 а-метокси-М -метилмитозан - в качестве побочного продукта с 307-ным5 выходом; ТСХ: В=0,40 (хлористый метилен/метанол 9:1).Вычислено, 7.: С 56,53; Н 6,20; М 17,38С 11 ОНайдено, 7.: С 54,68; Н 6,13; Н 16,59.П р и м е р 4. 9 а-Метокси-1(в -пиперидиниламино)метилен)амино-И (1-пиперидинилметилен)митозан (сое 45 динение Ч 1).М-(Диэтоксиметил)пиперидин (3 мл) и митомицин С (200 мг) взаимодействуют при 60 С в течение 2,5 ч в хлороформе(3 мл), Продукт получают с50 27,67.-ным выходом, ТСХ: ВГ=0,20 (хлористый метилец/метанол 20:1). 3 1 смеси хлористый метцлен/метанол 20:1 в качестве элюецта.Вычислено, 7: С 62,55; Н 7,91;1 15,О29 14 6 5Найдено, 7: С 62,08; Н 7,80;И 14,60.П р и м е р 3. 7-Е(Диметиламино)ометилен 7 амино-И -(диметиламино)метиолена-метокси-метилмитозац (соединение 1 Ч).1 аПорфиромицин (И -метилмитомицин С 130 мг, 0,37 мМ) замещают в качестве исходного соединения в реакции с 0,8 мл (1,5 мМ) 11,И-диметилформамиддиметилацеталя, используя 10 мл хлороформа и 2 мл метанола в качестве реакционного растворителя, время реакции 50 мин при 50 С. Соединение 1 Ч получают в виде сиропа после выпаривания реакционного растворителя. Это соединение затем очищают хроматографией мгновенного испарения, используя 20 г силикагеля и смесь хлористый метилен/метанол 20:1 в качестве элюента.Вычислено, 7: С 57,60; Н 6,55; И 18,33Найдено, 7,: С 57,11; Н 6,11;М 7,99чИ -Формил-производцое предыдущего вещества.1 ч11 -Формила-метокси- (1 -пи 1(пер идициламицо ) ме тилец-амццо- ч(1-пиперидицилметилец)митозац получают в качестве основного компонента: выход 437; ТСХ: НГ=-0,25 (хлорцстый метилец/метацол 20:1),Вычислено, 7.; С 60,08; Н 6,32.И 15,21СН, 10,р зв в бНайдено, ь: С 59,09; Н 6,17;И 5,07П р и м е р 5.,9 а-Метокси(вморфолицо)метииецамицо"-( 1-морфолицо)метилец мптозан (соединениеч 11) .Перемешцваемую суспецзцю митомицица С (200 мг, 0,6 мМ) в хлороформеО (10 мл) и 1-диэтоксиметцлморфолица4 мл) нагревают при 53 С в течение42 ч. Реакционную смесь концентрируют до консистенции сиропа под высоким вакуумом. С помощью сыройхроматограФии мгновенцого испарения(хлористый метилец/метацол 25;1)отделяют зеленые компоненты от избытка реагентов. Объединенные зеленые реагенты растворяют н 20 млэтилацетата и промывают водой (3ф 20 мл). Объединенные промывки реэкстрагируют этилацетатом (3"15 мл).Все этилацетатные фракции объединяют, сушат (Ив. ЛГ ) и выпаривают дотемно-зеленого сиропа; ТСХ (хлорцстьй метилен/метанол 10:1) которогосвидетельствует о наличии отдельного компонента с В 1=0,33 и нескольких зеленых примесей (К 1 0,35-0,40).С помощью хроматограФии мгновенногоиспарения компонент с ВГ=О,ЗЗ выделяют (130 мг, 56,8 Е) в виде темнозеленого аморфного твердого вещества,которое характеризуется как соединение Ч 11,Вычислено, 7: С 56,78; Н 6,06;Б 15,90Найдено, 7: С 53,07; Н 6,03;11 1 5 , 3 7,1 еП р и м е р 6, 7-Амицо-. -диметиламцнометилена-метоксимцтозац55 Вычислено, 7.: С 61,79; Н 6,87;Б 6,02Си Ны 1 Яа( 5Найдено, 7: С 61,01; Н 6,85;М 15,34. Митомицин С (200 мг, 0,6 мМ) растворяют в 10 мл хлороформа ц 2 мл метанола, добавляют И,Г:-дцметилформамиддиметилацеталь (0,64 мл, 4,8 мМ) и раствор перемешивают црц " 50 С в10 Найдено, 7: С 56,51; Н 5,92;Б 13,71.аИ -Формил-проиэнодное соединения 1 Х получают в ниде соединения ТХао-7,9 а-диметокси-И -диметиламинометилен-И -формипмитоэана с выходом 6,5 . ТСХ ВГ=О,Ь (хлористый метилен/метанол 9:1),П р и м е р 8. 7-.1-(Диметилами 10но)этилиден)амино- в 1-(диметиламнно)этилиден 1-9 а-метоксимитозан (соединение Х).Суспензию (600 мг, 1,79 ммоль) итомицина С в 2 мл метанола обратечение 50 мин, Тонкослойная хромато рафия (хлористый метилен/метанол 90:10) показынает следы непрореагировавшего митомицина С (ВГ=0,22) и два новых компонента (ВГ=0,42 и 0,33 соответственно). Раствор концентрируют при пониженном давлении до консистенции сиропа, который подвергают хроматографии мгновенного испарения (25 г силикагеля), используя смесь хлористый метилен/метанол 30;1 в качестве элюента.Быстрый компонент (ВГ=0,42) вьщеляют в виде зеленого аморфного твер дого вещества (60 мг, 22,57.) и идентифицируют как соединение 1 с помощью его ЯМР-спектра (пиридин Й ).Основной синий компонент (ВГ=О,ЗЗ) вьщеляют в виде аморфного твердого 2 О вещества (48 мг, 63,37) и характеризуют как соединение ЧТТТ. Аналитический образец получают осаждением иэ хлористого метилена и н-пентана.Вычислено, 7.: С 55,48; Н 5,91; 25 И 11,98Найдено, 7: С 54,70; Н 6,4; И 17,95Л р и м е р 7. 7,9 а-Диметокси,о-1 -диметиламинометиленмитозан (соединение 1 Х),Вместо митомицина С примера 1 берут митомицин А (170 мг) и подвергают взаимодействию с Н Й-диметилформамидЭ35 диметилацеталем (О,Ь мл) в растворе хлороформ/метанол 10: при 50 С в течение 1 ч. Целеной продукт получают с выходом 48%; ТСХ: ВГ=0,50 (смесь хлористый метилен/метанол 9:1).Вычислено, 7: С 56,39; Н 5,94;13,85 батывают 3 мл 11,1-диметилацетамиддиметилацеталя. Затем суспенэию нагревают до 75-80 С и перемешивают в течение 2 ч. На этой стадии ТСХ (хлористый метилен/метанол 10:1) показывает, что почти весь митомицин С израсходован в процессе реакции, На хроматограмме полученный продукт проявляется в виде зеленой полосы. Растворитель и летучие нещества удаляют концентрированием реакционной смеси досуха при пониженном давлении с получением сиропа, который растворяют и хлористом метилене и наносят на колонку с 40 г силикагеля, после чего колонку элюируют 200 мл 17-ного метанола н хлористом метилене, 200 мл 27-ного метанола в хлористом метилене, и 400 мл 57.-ного метанола в хлористом метилене. Фракции, содержащие зеленую полосу, представляющую собой продукт, объединяют и концентрируют до аморфного твердого вещества весом 110 мг, выход 137,. Это вещество растворяют в 2 мл ацетона и осаждают из раствора добавлением гексана. Продукт собирают фильтрацией.Вычислено, 7.: С 58,46; Н 6,83; И 17,19;СНОНайдено, 7.: С 58,89; Н 6,89; И 17,64.П р и м е р 9. 7-Окси-Б -диметиламинометилена-метоксимитозан.К раствору 20 мг 7-оксиа-метоксимитозана в 3 мл хлористого метилена добавляют 1 мл диметилформамиддиметилацеталя и раствор перемешивают при 65"С в течение 30 мин. Ход реакции контролируют ТСХ (хлорис тый метилен/метанол 1 О:1), Продукт возвращают концентрированием смеси при пониженном давлении и остаток хроматографируют на силикагеле с получением целевого соединения.Противоопухолевая активность поотношению к РМцгпе лейкемии.В табл. 1 приведены результатылабораторных исследований на СБГ мышахх-амкахх, которым ннутрибрюшинно имплантировали опухолевый прививочный материал, содержащий 1 О асцитных клеток РМигпе лейкемии и1которым вводили различные дозы тестируемого соединения формулы 1 или митомицина С.15 20 25 30 35 40 45 50 55 В табл, 2 представлены результаты исследования противоопухолевой активности при заражении мышей В 16 меланомой коричневой. Эксперименты Соединения вводили путем внутрибрюшинной инъекции. На каждую дозубрали группу из шести мышей, которыеполучали одну дозу .оединения в первый после заражения день. Б каждуюсерию экспериментов включали группуиз десяти мьппей, которым вводили физиологический раствор. Группы, обработанные митомицином С были включены)в качестве положительного контроля.Для каждой грунпы мышей в течение30 дн отмечали время выживания вднях, а в конце 30-дневного периодарегистрировали число выживших особей.Мышей взвешивали перед введениемпрепарата и повторно на 6-й день. Изменение веса было принято в качествемеры токсичности вещества, В эксперимент брали мьпвей весом 20 г каждаяи потерю веса до 2 г не считали чрезмерной. Результаты выражали в процентном отношении Т/С (1,ген),с 1/соп 1 го 1 которое представляет собойотношение времени выживания группы)обработанной препаратом, к временивыживания контрольной группы, обработанной физиологическим раствором,которое было принято эа 1007. Животные, которым вводили физиологический раствор, обычно погибали не позднее девятого дня.Максимальный эффект в приведенной ниже таблице выражен в процентном отношении Т/С; рядом дана доза,которая этот дефект вызывает, Цифрыв круглых скобках представляют собойзначения, полученные при введениимитомицина С в качестве положительного контропя в том же эксперименте.Таким образом, может быть вычисленаотносительная активность соединенийнастоящего изобретения по сравнениюс митомицином С. Минимальным эффектом считали 1257. Т/С. Минимальноэффективной дозой, приведенной втаблице, является доза, вызывающаяминимальный эффект (1257. Т/С). Двецифры, данные в каждом экспериментев графесреднее изменение весапредставляют собой соответственносреднее изменение веса мьппи при максимально эффективной и минимальноэффективной дозах (1-6 день),проводили на ВРГ, мышах, которым внутрибрюшинно инокулировали опухолевый имплантант. Протяженность эксперимента 60 дн. На каждую дозу тестируемого соединения брали группу из 10 мьппей и для каждой группы определяли время выживания. У контрольных животных, инокулированных так же, как и опытные животные) и инъекцированных растворителем беэ препарата, время выживания составляло 21 день. Отношение времени выживания опытных животных к времени выживания контрольных (Т/С) испольэовали в качестве меры эффективности и для каждого тестируемого соединения определяли максимально эффективную и минимально эффективную дозы. За минимально эффективную дозу принимели такую дозу, которая вызывала эффект 1257. Т/С, Для каждой дозы опытным животным внутрибрюшинно вводили тестируемое соединение на 1-й, 5-й и 9-й день. Среднее изменение веса в день, отмеченное при максимально эффективной и минимально эффективной дозах, использовали в качестве меры токсичности, Потеря веса в 2 г не считалась чрезмерной. Соединения исследовали на противоопухолевую активность по отношению к В 16 Мцгпе меланоме при подкожном введении опухолевого имплантанта и внутривенном введении препарата. Гра" фиК введения препарата и значения времени вьпкивания (исследования про" водили в течение 40 дн) определяли, как указано вьппе. На 12-й день определяли изменение веса. Максимально эффективная доза соединения быламг/кг. Эта доза вызывала эффект 1567 Т/С и прирост веса 1,5 г. В группы брали по шесть животных, и при этой дозе три мьппи выживали в течение всех 40 дней. Минимально эффективная доза была 0,25 мг/кг, при этой дозе на 12-й день изменение веса составило 1,0 г. Минимально эффективную дозу мгтомицина С не определяли.В кратком токсикологическом исследовании группам из пяти белых ВИ; мышей внутрибрюшинно вводили однократную дозу соединения. В результате при оптимально эффективной дозе вводимого соединения не наблюдалось значительного уменьшения чис1251806 ла лимфоцитов. При этой дозе также не отмечалось значительного повышения азота мочевины крови (Бцп) или сывороточной глютаматфосфотрансфераэы (БОРТ), что указывает на отсутствие неблагоприятного воздействия на функцию почек или печени, а также на то, что препарат не подавляет активности лимфоцитов.Ввиду высокой противоопухолевой активности, выявленной в эксперименПодавление РМцг 1 пе Среднееизменение Минимальноэффек тивнаядоза,мг/кгвеса Максимальный эффект Соединениепример) Т/С, Б Доза,мг/кгвеса веса, г 6,4(3,2)(5) 295(198) 2,0(3,0) с 2,0,4 -0,4(6) е ч а н и е : цифры в скобках представляют собой значения контроля с митомицином С. 141 (224) 233(272) 144(272) 165(224) 300(224) тах на животных, а также пониженной токсичности в сравнении в митомицином С возможно использование соединений общей формулыдля подавления опухолевого роста у млекопитающихВ этих целях они применяются системно (по всему организму) у млекопитающих имеющих опухоли, в 10 основном в нетоксичных противоопухолевых эффективных дозах.Таблица 1лейкемии