Способ определения 6-(феноксиацетамидо)-пенициллановой кислоты и динатриевой соли 6-( -карбоксифенилацетамидо) пенициллановой кислоты

(46) 30.12.90, Бюл, Р (71) Курский государс дицинский институт (72) Н.КЛорманов и Е (53) 543.42.063 (088,8 енный.П, Дурицын8) В П р р 1, Определение 6-(Фео)-пенициллановой кисксиаце там ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ПНТ СССР . К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) ОГГдя М., Ма 1 аГ Ч, Ехггагспеяре 1 сгойогошегг 1 с 1 са яг.апоуеп 1 чеГлгщасечг 11 са апа 1 уяе117.Иоуа ехггас 1 спе яре 1 ггоГогошег 1 ска яапочеп 1 реп 1 с 1111 пц а охуеггасу 1 с 1 дпи. - Сея. Вагш., 1986,35, " 3, 1. 99-121,Фурсов А.Ф. Фотоколориметрическое определение Аеноксиметилпенициллина (пенициллина ФАУ). - Аптечное дело, 1962, Р 3, с. 63.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ 6-(ФЕНОК АЦЕТАМИДО)-ПЕНИЦИЛАНОВОЙ КИСЛОТ И ДИНАТРИЕВОЙ СОЛИ 6-(КгКАРБОКСИ Изобретение относится к аналитической химии, в частности к анализу б-(феноксиацетамидо)-пенициллановой кислоты и динатриевой соли 6-(К-кар боксифенилацетамидо)-пенициллановой кислоты и может быть применено в заводских контрольно-аналитических лабораториях, центральных заводских лабораториях химических предприятий.Цель изобретения - повышение точ ности, селективности определения и сокращение времени проведения спосо ба. 2ФЕНИЛАЦЕТАМИДО) -ПЕШ ПИЛЛАНОВОЙ КИСЛОТЫ(57) Изобретение относится к аналитической химии, в частности к определению 6-(Аеноксиацетамидо)-пенициллановой кислоты и динатриевой соли 6- -(К-карбоксифенилацетамидо) в пенициллановой кислоты, Цель - повышение точности, селективности определения и сокращение времени проведения способа. Получение ведут путем обработки анализируемой пробы раствором нитрата калия в конц. Н БО, разбавления реакционной смеси водой. Процесс ведут с последующей обработкой полученной смеси рас",вором 2,3,5-трифенилтетразолия при рН 9, окрашенный продукт экстрагируют трихлорметаном и Аотометрируют, Способ в 1,5- 2 раза сокращает время проведения анализа и повышает точность определения (относительная ошибка уменьшается с 4 до 1,86 Е). 3 табл,лоты.1. Качественное определение, Около 2 мг 6-(Аеноксиацетамидо)- -пенициллановой кислоты помещают в выпарительную чашку, вносят 0,5 мл 10 Х-ного раствора нитрата калия в концентрированной серной кислоте и перемешивают содержимое чашки до полного растворения прореагировавшей 6-(еноксиацетамидо)-пенициллановой кислоты. К полученному раствору прибавляют при перемешивании15 мп води и порциями 10%-ный раствор гидроксида натрия, перенося содержимое чашки в стеклянный стаканчик и одновременно таким образом нейтра 5 лизуя кислую реакцию раствора до нейтральных или слабощелочных значений рН. Затеи прибавляют 5 мл универсального буфера, доводя реакцию среды до рН 9, и 4 мл 0,15%-ного раствора 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида. Образующийся продукт экстра; гируют 10 мл трихлорметана. Слой трихлорметана окрашивается в желтый цвет. Чувствительность реакции2,5 мкг/мл.2. Количественное определение.Методом изомолярных серий и насыщения установлено, что 6-(феноксиацетамидо)-пенициллановая кислота и 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид ,реагируют в молярном отношении 1:1. :Максимумы поглощения продукта реакции (раствор в трихлорметане) нахо- ,дятся при 374 и 415 нм. 25Построение калибровочного графика.В шесть выпарительных чашек помещают 0,25; 0,50; 1,00; 1,50; 2,00 и 2,50 мл 0,05%-ного ацетонового раствора 6-(феноксиацетамидо)-пенициллановой кислоты и испаряют раствори- тель до получения сухих остатков. В каждую чашку вносят 0,5 мл 10%-ного раствора нитрата калия в концентриро,ванной серной кислоте и перемешивают содержимое чашек до полного растворения прореагировавшей 6-(феноксиацетамидо)-пенициллановой кислоты, К полученным растворам прибавляютпри перемешивании 1 мл воды и пор циями 10%-ный раствор гидроксида натрия, перенося содержимое чашек встеклянные стаканчики .и одновременнотаким образом нейтрализуя кислую реакцию раствора до нейтральных илислабощелочных значений рН, Затем прибавляют 5 мл универсального буфера(доводят реакцию среды до рН 9) и4 мл 0,15%-ного раствора 2, 3,5-триенилтетразолия хлорида, Образую 50бийся продукт экстрагируют трихлорметаном дважды по 10 мл. ЭкстрактыОбъединяют в мерной колбе емкостью25 мл и доводят трихлорметаном доМетки. Оптическую плотность окрашенных растворов измеряют на,фото 55электроколориметре КФКпри длиневолны 400 нм (светофильтр В 3) вкювете с толщиной рабочего слоя 50 мм. Раствором для сравнения служит экстракт, полученный в контрольном опыте. По результатам измерений строят калибровочный график. Светопоглощение окрашенных растворовподчиняется закону Бугера-ЛамбертаБера в интервале концентраций 550 мкг/мл, Методом наименьших квадратов расчитываот уравнение калибровочного графика, которое в данномслучае имеет вид: П = 0,01596 С ++ 0,01901, где П - оптическая ппотность, С - концентрация анализируемого вещества в фотометрируемом растворе, мкг/млМетодика количественного определения,Около 0,05 г (точная навеска)6-(феноксиацетамидо)-пенициллановойкислоты растворяют в мерной колбеемкостью 50 мл в ацетоне, 0,75 млполученного раствора вносят в выпарительную чашку и дальнейшие операции осуществляют по схеме, описаннойдля построения калибровочного графика. Определение количественного содержания 6-(феноксиацетамидо)-пенициллановой кислоты проводят по уравнению калибровочного графика и пересчитывают на навеску. Результаты определения и метрологические характеристики представлены в табл. 1.П р и м е р 2, Определение динатриевой соли 6-(-карбоксифенилацетамидо)-пенициллановой кислоты.1. Качественное определение,Околб 2 мг динатриевой соли 6-(р-карбоксифенилацетачидо)-пенициллановой кислоты помещают в выпарительную чашку, вносят 0,5 мл 10%-ногораствора нитрата калия в концентрированной серной кислоте и перемешиваютсодержимое чашки до полного растворения прореагировавшей динатриевой соли6-Я-карбоксифенилацетамидо)-пенициллановой кислоты, К полученному раствору прибавляют при перемешивании1 мл воды и порциями 10%-ный растворгидроксида натрия, перенося содержимое чашки в стеклянный стаканчик иодновременно таким образом нейтрали,зуя кислую реакцию раствора до нейтральных или слабощелочных значенийрН, Затем прибавляют 5 мл универсального буфера, доводя реакцию среды дорН 9, и 4 мл 0,15%-ного раствора2,3,5-трифенилтетразолия хлорида. Образующийся продукт экстрагнруют 10 мл16173 трихлорметана. Слой трихлорметана окрашивается в желтый цвет, Чувствительность реакции 0,8 мкг/мл,2, Количественное определение,Методом изомолярных серий и насыщения установлено, что динатриеваясоль бкарбоксифенилацетамидо) --пенициллановой кислоты и 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид реагируют вмолярном отношении 2;1. Максимумпоглощения продукта реакции (раствор в трихлорметане) находится при375 нм.Построение калибровочного графика. 15В пять выпарительных чашек вносят0,25 0,50; 1,00 1,50 и 2,00 млстандартного (0,025 .-ного) этанольного раствора динатриевой соли 6-(0(,-карбоксифенилацетамидо)-пенициллановой кислоты и испаряют растворительдо получения сухих остатков. В каждую чашку вносят 0,5 мл 10%-ного растраствора нитрата калия в концентрированной серной кислоте и перемешивают содержимое чашек до полного растворения прореагировавшей динатриевойсоли б-(0-карбоксифенилацетамидо)-пенициллановой кислоты. К полученным растворам прибавляют при перемешивании 1 мл воды и порциями 10 -ныйраствор гидроксида натрия, перенося содержимое чашек в стекляннь 1 е стаканчики и одновременно таким образомнейтрализуя кислую реакцию растворадо нейтральных или слабощелочныхзначений рН, Затем прибавляют 5 млуниверсального буфера, доводя реакциюсреды до рН 9, и 4 мл 0,15 ,-ногораствора 2, 3,5-трифенилтетразолия хлорида. Образующийся продукт экстрагируют трихлорметано:1 дважды по 10 мл.Экстракты объединяют в мерной колбеемкостью 25 мл и доводят трихлорметаном до метки. Оптическую плотность 45окрашенных растворов измеряют на фотоэлектроколориметре КФКпри длиневолны 400 нм (светофильтр В 3) вкювете с толщиной рабочего слоя 50 мм.Раствором для сравнения служит экстракт, полученный в контрольном опыте.По результатам измерений строят калибровочный график. Светопоглощениеокрашенных растворов подчиняетсязакону Бугера-Ламберта-Вера в интер 55вале концентраций 2,5-20,0 мкг/мл.Методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение калибровочного графика, которое в данном случае имеет 366вид Л = 0,01873 С + 0,09732, где Э - оптическая плотность, С - концентрация анализируемого вещества в фотометрируемом растворе, мкг/мл.Методика количественного определения.Около 0,025 г (точная навеска) динатриевой соли 6-(с в карбоксифенилацетамидо)-пенипиллановой кислоты растворяют в этаноле в мерной колбе емкостью 50 мл 0,5 мл полученного раствора внося: в выпарительную чашку, Этанол испаряют и дальнейшие операции осуществляют по схеме, описанной для построения калиб ровочного графика. Определение количественного содержания динатриевой соли 6-(М;карбоксифенилацетамидо)- -пенициллановой кислоты проводят по уравнению калибровочного графика и пересчитывают на навеску. Результаты определения и метрологические характеристики представлены в табл,2,Предлагаемый способ по сравнению с известным повышает селективность определения. В отличие от известного он позволяет анализировать 6-(феноксиацетамидо)-пенициллановую кислоту и динатриевую соль 6-(с,-карбоксифенилацетамидо)-пенициллановой кислоты в присутствии бензола, алкилбензолов, галогенбензолов, производных бензойной кислоты, не содержащих нитрогрупп рибофлавина, Определению не мешает ряд веществ, содержащих в своей структуре одну или несколько нитрогрупп (О-(трео-п-нитрофенил"дихлорацетиляминопропандиол- -1,3; 2,4-динитрохлорбензол; 3,5 в динитро-хлорбензойная кислота), а также различные неорганические соединения, обладающие собственной окраской.Предлагаемый способ в 1,5-2 раза сокращает время проведения анализа и повышает точность определения (относительная ошибка уменьшается с 4 до 1,86%), Сравнительная характеристика предлагаемого и известного способов представлена в табл.3,Формула изобретенияСпособ определения 6- (феноксиацетамидо)-пенициллановой кислоты и динатриевой соли 6-(М;карбокснфенилацетамидо) -пенициллановой кислоты,шения точности, селективности определения и сокращения времени осуществления способа, в качестве цветореагента используют раствор 2 3 5 Ф У-трифенилтетразолия, обработку цветореагентом ведут при рН 9, перед фо- тометрированием окрашенный продукт экстрагируют трихлорметаном. путем обработки анализируемой пробы раствором нитрата калия в концентр рованной серной кислоте, разбавл ния реакционной смеси водой, обраб тки цветореагентом в щелочной сред с последующим фотометрированиемп лученного раствора, о т л и ч а ющи й с я тем, что, с целью повы 1 О Таблица 1 Результаты количественного определения б-(феноксиацетамидо)-пенициллановой кислоты Найдено Метрологическиехарактеристики Взято, г г Е 98,06 100,29 97,45 101,49 101,57 98,72Таблица 2 Результаты количественного определения динатриевой соли 6-(-карбоксифенилацетамидо)-пенициллановой кислоты Метрологические характеристики Найдено Взято, г гт гЕ 0,05040 0,04855 0,05050 0,04880 0,05030 0,05070 0,02545 0,02470 0,02585 0,02175 0,02480 0,02410 0,04942 0,04869 0,0492 1 0,04953 О, 05109 0,05005 0,02545 0,02412 0,02625 0,02171 0,02505 0,02438 100,00 97,64 101,56 99,84 101,01 101,18 Х. = 99,60 6 =, 1,77 (7 к = 0,72 ( ос= 1,85 А = 1,86 Ы = 99,601,86 Х = 100,21С = 1,431617336 1 О Таблица 3 Сравнительная характеристика предлагаемого и известного способов Ср ав нив аемыепар аме тры Известный способ Предлагаемый способ Способ не позволяет Селектив ность Продолжительность одного определения Относительная ошибка (характеристика точности), Х 15-18 мин 30-35 мин+1,85 Составитель С.ХованскаяТехред М.дидык Корректор С.Черни Редактор А. Огар Эаказ 4115 Тираж 510 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 Способ позволяет селективно определять 6-(феноксиацетамидо)-пенициллановую кислоту идинатриевую соль 6-(с(-карбоксифенилацетамидо)-пенициллановой кислоты в присутствии бензола, алкилбензолов, галогенбензолов, производных бензойной кислоты,не содержащих нитрогрупп, рибофлавина, Определению не мешает ряднитросоединений: Э-(-)-трео-п-нитрофенил-дихлорацетиламинопропандиол,3; 2,4-динитрохлорбензол; 3,5-динитро-хлорбензойнаякислота, а также различные неорганические вещества, обладающие собственной окраской селективно определять6-(феноксиацетамидо)-пенициллановую кислоту и динатриевуюсоль 6-(К-карбоксифенилацетамидо)-пенициллановой кислотыв присутствии бензола, алкилбензолов,галогенбензолов, некоторых производныхбензойной кислоты, несодержащих нитрогрупп,рибофлавина. Определению мешает ряд нитросоединений: П-(-)-трео-и-нитрофенил-дихлорацетиламинопропандиол,3; 2,4-динитрохлорбензол; 3,5-динитро-хлорбензойная кислота, а также различные неорганические вещества, обладающие собственной окраской