Способ получения биологически активных дрожжевых автолизатов

; 552953 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических Республикло делам изобретени и открытий7 ата опубликования описания 2) Авторы изобретения В. М, Бели В, Князько ков, Т. Л,ва, В. А. и Ленина инсти1) Заявител элементоорганичесАН СССР е х соединен 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДРОЖЖЕВЫХ АВТОЛИЗАТОВ2 о Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способам получения биологически активных веществ из микробной биомассы, а именно смеси 1.-аминокислот и пептидов, предназначенной для использования в пищевой промышленности, в качестве вкусовых приправ в различные пищевые продукты, например в производстве вина, сыра, мясных изделий, хлебопечении, в медицине - для парентерального питания организма больного человека и др. отраслях промышленности.Известен способ приготовления биологически активных дрожжевых автолизатов, согласно которому дрожжи обрабатывают раствором соляной кислоты в соотношении 10: 1 при 30 С в течение 2 - 3 дней 11.Известен также способ получения ферментного препарата из микроорганизмов, по которому дрожжевой материал разрушают автолизом при 30 С в присутствии плазмолизатора - этилацстата (21.Однако автолизаты, полученные с помощью этилацетата, быстро загнивают, Это свидетельствует о том, что сам по себе этилацетат является плохим антисептиком, не обеспечивающим стерильность на протяжении даже 15 - 20 ч автолиза.Цель изобретения - разработать способ абаян, В. К. Латов, С, Г, Харатьян, ыряпкин, В. А, Сергеев, А. С. Коган,В. В. Андрианов получения автолизата, позволяющий одновременно обеспечить как стерильность процесса, так и высокий выход целевого продукта - смеси 1.-аминокислот и пептидов.Цель достигается тем, что автолиз дрожжей проводят в присутствии химических добавок, обладающих плазмолизирующими и антисептическими свойствами, при этом в качестве таких добавок используют смесь этилацетата и карбоновой кислоты в соотношении 0,1 - 1,5 - :0,1 - 1.Этилацетат в данном случае играет роль только лизирующего агента, а стерильность среды обеспечивает карбоновая кислота. В качестве карбоновой кислоты можно использовать пропионовую кислоту,Пропионовая кислота широко используется в мировой консервной промышленности, и примснспие ее не связано какими- либо ограничениями, так как она, вернее ее соли, катализируют Ко фермент А, участвуют в цикле Кребса в качестве метаболита и легко выводятся из организма. Сама пропионовая кислота оказывает также и лизирующее действие на микробную клетку, о чем свидетельствует увеличение выхода аминного азота в автолизате по мере увеличения концентрации пропионо3 4п е ела от клетки иропноновой кислоты и этилацетавой кислоты до определенного р д ( - , та15 - 20 бсутствие в реакционной смй смеси как пропио- цесс за - чр лиза посторонней микрофлорои.новой кислоты, так и этил ца етата резко толиза5 Пол ченный автолизат подвергают центувеличивает концентрацию ааминного азота олученл. 1) что го- рифугировф . анию после чего из прозрачногои выход аминокислот (см. табл. ),э екте найденной фнльтрата выдсляют смесь 1.-аминокислотворит о сннсргическом эффекте на",птидов путем последовательного ирокомпозиции, оосспечивающей ркак стернль- и иептидрез колонку с ионообменнойавтолиза. пускания чеИА Нбла ает и ук смолои-аниАналогичными своиствами о д уекающий раствор аминокислот ио обно пропио- затем вытекасусная кислота, которая подо рсажают на смолу - сильнокисновой является также рактивато ом Ко пептидов саикле К ебса, лотныи катиоатионит КУ 2(8 в Н-форме. Элюфермента А и участвует в цикле раминокислот с катионита провои свойствами ирование а5 1 - 1 5 о/- обладает и ряд других к ра боновых кислот, 1 дятолученный раствор упариваютвкоторых качест у Ре ско ителей затем иметаболизма не известно, как например, вакуумном иси иловая, бензой- ния аммиака.каприловая кислота, салициловПолученный светлый порошок, представная и т. д.и име ами. 20 ляющий смесь аминокислот и пептидов,Изобретение появляется пррами " досуха и подвергают полномУПример 1. В стерильно чисть ф Р нализу (см. табл. 2) натые фе - высушивают дооколо 3 л, вносят аминокислотному анаментеры, емкостью около л, ваминокислотном анализаторе К 1.А-ЗВ фирЫм мы Хючи точностью 3/х п ессованных пекарских аминоко5 П 2 П амет оцесса ж 207 -ным содержанием сухого щве ества, 2 римеово ы отношение вводидо авб ляют 300 мл дистиллированной д мых компонентов такиел концент и- же, как в примере 1 однако вместо про 19 5 мл этилацетата, и 6,3 мл концентр)лоты. Аппарат пионовои в фермефе ментер добавляют одинакорованной пропионовои кислот . ро ледяной уксусной кислоты,ывают. Автолиз идет ири вое количество- тоянном пе- ЗО Результаты приведены в табл. 1,темиерагур 5 - 55 С р постоянном иеремешивании.жжевой массы и реакционную смесь вводят концентрироПосле Разжижения дрожжевои осы Рпрекращения пенообразования ф риз фе мен- ванную капают и обы в сте- количестве, как вв примере 1. Все остальтера периодически отбирают раметры автолиза также воспроизрильные пробирки по 20 мл. р. П обы цент- ные парам точной жидкости водят по прим еру 1. Результаты приведенырифугируют, а в надосадочной дб.1.определяют аминныи азот и ди вы еляют из в та л.пти ов. Авто- Пр имерП 4, В качестве субстрата бенее смес 1.- минокислот епт дв ю с спензию подвер- рут дрожжи40( пиртовые)Пет- В однолитровые стерильно чисты гьлогическим испыта-яп 1 сфениям, для чего ее высеивают в чашки Петжают по 500 г указанныхри на нейтральный сусло-агар уи с сло-агар ментеры загружом, После 24 ч дрожжеи, м120 мл дистиллированной воды,25 ой04 б о) 78инкувых колоний в том 45 кислоты (, о . о7 ) Процесс ведут 33 40 ч в геслучае если автолиз не пр ошел до концаЭии имелись не- метично закрьетых ферментерах при посто)и следовательно, в суспензиис тствие клеток янном перемеешивании и температуреразрушенные клетки. Отсутстом что к мо+.1 О(на сусле свидетельствует о1 йет елых живых 50 К ли анализы, максим альньКак показаменту высева в суспензии нет цго азота приводится на 20 -клеток, т. е. их автолиз прош дел о конца. выход аминноо есса. Таким образом, выделениеНа мясо-пептонном аг ра е можно наблю ч процесса.аминокислот целесообразно прп оводать развитие посторонней м р ф рмик офлоры, и смеси аминиз 20 - 22-часовых автолизатов. Ми. Мике 55 робиологические испытания показало наличии или от- дить изстесутстт р ф Р РКак свидетельствуют микробиологиче- рильность сск ие испытания, автолиз дрож ", ржей п ово- процесса.о ной иро- ПримерП 5. Процесс проводят на стендя щийся в присутствии только д " рсте ильно, прн довои установкке в столитровом ферментере,пионовой кислоты, шел стерый предварительно стерилизуют остота был неудовлет которыйэтом выход аминного азотение процесса рыми кг свеж хжванны ыыа скихт Р У Ру щобеспечивало дрожжеи зта -- этилацетата, не всегда обеате. И только бавляют м250 мл концентрированнои пропи 2 лст рерильность среды в аппарат .на ожжевые 65 новои кисислоты 780 мл этилацетата и 1совместное воздействие на дрь С 4 СО СО ь СЧ ь С ь СЧ о с 1С С соь с 1 с СЧ ь ь ь с СО ОЪ СО Оэь с с ьь С Ь" ь С СЪ ь"ОЪ СО ь" ь ь ц х х о х хь СЧ СЧ СО С С СсСЧо1цхЮ ОоХ Оох Фхоа552953 Таблица 2Динамика аминокнслотного состава автолизатов дрожжей Яассйагогпусез сегеиз 1 ае Содержание аминокислоты, г на 16 г общего азота (О) при продолжительности анализа, ч1,-аминокнслота 10 15 20 25 ИзолейцинЛейцннЛизинфеннлаланин Тн розинМетионин ЦистинТреонинТриптофанВалин Н-общее содержание незаменимыхАланин АргннннАсп. кислота Глут. к ис лотаГлнцинГистндннОрнитинПролинСеринОтношение Н/ОН в о, к общему содржаниюаминокислот 2,16 4,59 4,15 56,46 3,87 5, 16 4,35 58,33 4,04 5,65 4,01 57,80 4,27 6,10 4,32 58,17 лизаты, особенно 20-часовой, содержат все как зам нимые, так и незаменимые аминокислоты в соотношениях, характерных для высоко питательных белков и аминокислот ных см сей. Формула изобр етени яСпособ получения биологически активных дрожжевых автолизатов путем нагре 10 вания дрожжей в присутствии химическихдобавок, обладающих плазмолизирующими и антисептическими свойствами, отл ич а ю щ н й с я тем, что, с целью полученияпродукта с высоким содержанием 1.-амино 15 кислот и пептидов, в качестве химическихдобавок используют смесь этилацетата икарбоновой кислоты при их соотношении0,1 - 1,5 - : 0,1 - 1.Источники информации,20 принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССРМа 292 б 88, кл, А 23 1/18, 1971.2. Авторское свидетельство СССРМа 174588, кл. С 120 1310, 19 б 5,Корректор Е, Хмелева Техрсд В, Рыбакова Редактор Е, Месропова Подписное Тираж 575 Изд.600 Заказ 2352/3 Типография, пр. Сапунова, 2 7,62 11,52 11,47 7,67 5,42 2,80 6,07 6,35 0,83 7,95 67,70 9,05 6,37 7,15 9,22 3,52 3,00 дистиллированной воды. Автолиз идет при 45 - 55 С в течение 20 - 22 ч при постоянном перемешивании. По окончании процесса автолизованную суспензию сепарируют, отделяя прозрачный жидкий автолизат от твердого остатка. Из жидкого автолизата выделяют на ионообменных смолах целевой продукт - смесь 1.-аминокислот и пептидов известным способом. Микробиологические испытания подтвердили отсутствие посторонней микрофлоры в ферментере,Как видно из табл. 1, наибольший эффект даст соотношение пропионовая кислота: этилацетат соответственно 0,4: 1 об. %. При этом выход аминокислот на 15 г автолизата составляет 1,1949 г, что на 17, выше, чем при применении только одного плазмолизатора-этилацетата (1,0204 г на 15 г автолизата). Причем, в последнем случае зараженность посторонней микрофлорой отмечена на протяжении всего процесса, что является крайне нежелательным,Амннокислотный состав, приведенный в табл. 2, показывают, что полученные авто 7,78 13,01 12,08 6,71 4,51 2,18 6,19 4,13 0,87 6,72 64,17 11,65 5,44 7,89 7,61 3,74 1,80 6,87 11,15 10,24 7,26 5,56 3,01 8,51 7,73 0,94 8,3 69,58 10,89 5,52 9,30 8,94 3,29 1,42 8,67 12,97 10,59 7,43 5,63 3,19 4,38 5,58 0,97 0,05 66,36 11,42 6,23 9,47 9,76 4,31 2,22