Способ получения циклогексиламмониевой соли трифосфоинозитида

Союз Советских Социалистических Республик(51)М, Кл.С 07 С 69/18 С 07 С 43/02// А 61 К 29/00,с присоединением заявки %в Государственный комитет СССР по дедам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения В.Н.Крылова, Н.П.Горнаева,В,И.Швец и Р.П.Евстигнеева Московский ордена Трудового Красного Знамени институт тонкой химической технологии им.М.В,Ломоносова(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦИКЛОГЕКСИЛАММОНИЕВОЙ СОЛИ ТРИФОСФОИНОЗИТИДА Изобретение относится к новому химическому методу получения трифосфоиноэитида формулы 1 Я Н оОк,ОВ 6 Я 6 ООбб 1 тн в ОЪО И 1 ооббпнзвпринадлежащего к классу природныхбиологически активных соединений,ответственных эа происхождение целого ряда важнейших биологических процессов в клеточных мембранах,Известен способ получения трифосфоинозитида выделением из головногомозга млекопитающих путем зкстракци"онных и хроматографических методов(1).Недостатком известного метода получения трифосфоинозитида являетсядлительность процесса (многократныеэкстракции, отделение от балластныхпримесей и хроматография) и получение целевого продукта в виде смеситрифосфоинозитидов с различными жирными кислотами.Целью изобретения является упрощение процесса и улучшение качества целевого продукта (получение индивидуального целевого продукта) .Цель достигается разработкой ново. го химического метода получения трифосфоинозитида формулы 1, заключающегоСц в том, что 1(3),2-0-циклогексилиден 3(1), 6(4)-ди-бензилэп-миоиноэит общей формулы 11 15 Ои обрабатывают восьмикратным избытком дианилидохлорфосфата в пиридине с последующим нагреванием с 80-ной 20 уксусной кислотой при 90-100 С,о двойной избыток полученного 1(3),4 (6) -ди-О-бензил, 6 (4) -ди-дианилидофосфорил-зп-миоинозита вводят во взаимодействие с 1,2-ди-О-стеаро ил-0-фосфорилглицерином в присутствии тройного избытка 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида в пиридине с последующим удалением защитных групп действием тридцатикратного из- ЗО бытка иэоаьилнитрита в смеси пиридинуксусная кислота (1:) и гидрогенолизом в присутствии палладиевой черни. Выход целевого продукта 6,9 Ъ.П р и и е р, К Охлажденному до-100 С раствору 4,1 г 1(3),2-0-циклогексилиден-З(1),6(4) -ди-бензил-зпмиоиноэита (П) в 25 мл пиридина прикапывают при перемешивании раствор35 г дианилидохлорфосфата в 130 мл пиридина. Перемешивание продолжают при18-20 С в течение 2 сут затем добавляют 240 мл 5"ного раствора уксу-снокислого калия к через 30 мин экстрагируют полученное вещество хлороформом, промывают 20-ным раствором кислого сернокислого натрия и водой,сушат, удаляют растворитель и остаток разделяют .хроматографией на силикагеле. Выход 1(З),2-0-циклогексилиден(1), 6 (4) -ди-О-бензил(6), 5-ди 10-дианилидофосфорил-Бп -мионозита ( Й6,87 г (82,0), т.пл.126-127 С (иэ2 Оспирта) В 0,73 (силикагель, бензолацетон, 7: 3) . ИК-спектр (см ): 3100(Н),(111) в 54 мл 80 уксусной кислотыи перемешивают в течение 2 ч при 90100 С, уксусную кислоту удаляют ввакууме, остаток разделяют хроматографией на силикагеле. Выхоц 1(3),4(6)-ди-О-бензил-б(4),5-ди-О-дианилидофосфорил-зп-миоинозита (1 Ч) 0,83 г(50,3), т.пл.182-183 С (из спирта),В=0,28 (силикагель, бенэол - ацетон7:3), К 0,55 (силикагель, хлороформ -ацетон - метанол, 17:2:3 (ИК-спектрсм )у 3300 (ОН), 3200, 1710, 1670,1550(БН), 3100, 3060, 3040, 16101505 (бензольные кольца) 1420 (Р-И), 451220 (Р=О), 1070-1080, 1010 (С-О-С,С-ОН, С-О-Р),890,860(Р),Найдено,Ъ: С 61,78, Н 5,88,Н 6,55, Р 7,32.ЗОВычислено, Ъ". С 51,87, Н 5,88И 6,55, Р 7,24,Вслед за тем, растворяют в 25 млсухого пиридина, свежеперегнанногонад натрием, 0,82 г соединения (1 Ч),высушенного в вакууме, добавляют0,457 г 2,46-трииэопропилбенэолсульфохлорида и перемешивают 40 мнн при18-20 С. Добавляют 0,322 г 1,2-дистеароил-0-фосфорилглицерина (Ч) иреакцию оставляют на 2 сут при 18- 20 СЙОПосле этого приливают 40 мл сухогохлороформа и перемешивают 1 ч. Удаляютрастворитель в вакууме, остаток разделяют хроматографией на силикагеле.Выход 1(3) -0-(1, 2-ди-стеароилглице. 65ро-0 -Фосфорил) - 3 (1), 6 (4) -ди.О-бензил(6), 5-ди-ди анилидофосфорилвп-миоинозита (Ч 1) 0,38 г 52,0, считая на вступивший в реакцию исхОдный спирт),Н 0,38 (силикагель, хлороформ - ацетон - метанол, 17:2:3), Е0,66 (силикагель, хлороформ в . мета- Ае, нол - вода, 65".25:4), ИК-спектр (см )(НН), 1750" 1730 (С=О в СООР), 1610, 1510 (бензольные, кольца), 1345(-С-А), 1275 (Р=О), 890, 860 (Р-И) .Найдено,Ъ: С 65,43; Н 8,57;1 3,61, Р 5,83,0 . Р, ВВычислено,Ъ: С 66,11; Н 8,88; И 3,71; Р 6,16Далее растворяют 0,28 г соединения И ) в 7 мл смеси пиридин-уксусная кислота (1:1) и добавляют 2,8 мл изоамилнитрита. Перемешивают 24 ч при 18-20 С, отгоняют растворитель и изоамилнитрит в вакууме, добавляя гиридин. Обрабатывают остаток ацетоном и полученный осадок без дополнительной очистки гндрируют в 20 мл смеси метилового спирта и хлорофоро ма (4;1) при 18-20 С, Катализатор отфильтровывают, Переводят вещество в циклогексиламмониевую соль, обрабатывают раствор смолой Рожек(508, 200-400 меш в Н-Форме) и доводят рН до 8,5 циклогексиламином, Выход циклогексиламмониевой соли трифосфоинозитида (1) 0,07 г (32,0), т.пл.165-168 С (из ацетона),Я 0,51 силикагель, н-пропанолн-аммиак), 1 0,28 (обработанная Формальдегидом бумага, верхняя фаза смеси н-бутанол:ледяная уксусная кислота, вода = 4."1:5). ИК-спектр (сьев") : 2860 (ИН) (1/30 (С=О в СООР), 1195 (Р: О), 1070-1050 (С-О-С, С-ОН,С-О-Р) .Найдено,: С 53,72; Н 10,54; Н 3,87; Р 6,66. С9 Н,),) 0И 4 РЛ 0 ВычисленоуЪ С 54 09 Н 10 р 06; И 3,90; Р 6,06.Формула изобретения1. Способ получения циклогексиламмониевой соли трифосфоинозитида общей формулы Т ОН ОН- О - Р- Оя-2 ОРОз О- НбООббдИОРО Нрб 00 бб НзьОК о т л и ч а ю щ и й с я тем, что с целью упрощения процесса. и улучшения качества целевого продукта 1(3),2-0- циклогексилиден(1),6(4) -ди-бензил-Бь-ьиоинозит Общей формулы )140749 Составитель Л.НикулинаРедактор Л.Емельянова Техред Н,Бабурка . Корректор С,Шекмар Заказ 3143/27 тираж 495 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д.4/5 Филиал ППП Патент, г,ужгород, ул.Проектная,4 обрабатывают восьмикратным избыткомдианилидохлорФосФата в пиридине споследующим нагреванием с 80-нойуксусной кислотой при 90-100 С,двойной избыток полученного. 1(3),4(6)-ди-О-бензил,6(4)-ди-О-днанилидофосФорил-Бю -миоинозитавводят во взаимодействие с 1,2-ди-О-стеароил-0-Фосфорилглицерином вприсутствии тройного избытка 2,4,6 триизопропилбензолсульФохлорида впиридине с последующим удалением защитных групп действием тридцатикратного избытка изоамилнитрита всмеси пиридин - уксусная кислота(1:1) и гидрогенолизом в присутСтвиипалладиевой черни. Источники инФормации,принятые во внимание при экспертизе1,Дворкин В,Я.,Киселев Г.В. Фракционирование и характеристика осоинозитидов головного мозга.Биохимия, 34,1245, 1969 (прототип)