Способ определения -аминоизовалериановой кислоты

(54) СПОСОБ ОПРЕД ЗОВАЛЕРИАНОВОЙ ЕНИЯ а-АМИНСЛОТЫ лени (вали ке 3 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ВТОРСКОМУ СВИДЕ(46) 15.02.92. Бюл, 3 Ф 6(71) Курский государственный медицинский институт(56) Коренман И. М. Фотометрический анализ. Методы определения органических соединений, М;: Химия, 1975, с. 167 - 169.Ионушене 3. Ю., Денис Г. Й., Степановичус Ю. Ю. Определение аминогрупп в белках и пептидах при помощи 2,46-тринитробензолсульфокислоты, Журнал аналитической химии, 1988, т, 43, М 3, с, 536-540. Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам опредея а -аминоизовалериановой кислоты на), и может быть применено в практиаводских контрольно-аналитических лабораторий, центральных заводских лабораторий химических предприятий, при био- химических исследованиях, Способ относится к числу массовых,Известен способ определения аминокислот путем обработки нингидрином в среде органического растворителя с последующим фотометрированием образующегося окрашенного раствора,Способ характеризуется малой селективностью, и трудоемкостью процесса определения.Наиболее близким по техническому решению и достигаемым результатам к предлагаемому является способ определения аминокислот, в том числе и а-аминоизовалериановой кислоты, заключающийся в об(57) Изобретение относится к аналитической химии, в частности к определенИю ааминоизовалериановой кислоты. Цель изобретения - повышение селективности и упрощение способа. Определение ведут путем растворения анализируемой пробы в этаноле и обработки этанольным раствором 2-метил,6-динитрофенола с последующим фотометрированием образующегося окрашенного раствора, 2 табл. работке анализируемой пробы водным раствором 2,4,6-тринитробензолсул ьфокислоты в присутствии боратного буфера (рН 9,3). последующем термостатировании при 30 С в течение 30 мин, обработке раствором формалина и определении оптической плотности образующегося окрашенного раствора.Способ неселективен в отношении ааминоизовалериановой кислоты, так как подобным образом могут быть определены и другие аминокислоты, характеризуется трудоемкостью и значительными затратами времени на его выполнение.Цель изобретения - повышение селективности определения и упрощение способа.Поставленная цель достигается с помощью предлагаемого способа, который заключается в том, что анализируемую пробу растворяют в этаноле и обрабатывают этанольным раствором 2-метил,б-динитрофе, 1712841 55 нола с последующим фотометрированием образующегося окрашенного раствора.Способ осуществляется следующим образом.Анализируемую пробу растворяют в этаноле обрабатывают этанольным раствором 2-метил,6-динитрофенола и фотометрируют образующийся окрашенный раствор.П р и м е р 1. Качественное определение а -аминоизовалериановой кислоты.Около 2 мг а-аминоизовалериановой кислоты вносят в пробирку и прибавляют 3 мл этанола. Содержимое пробирки встряхивают 5 мин обрабатывают 0,5 мл 0,02%-го раствора 2-метил,6-динитрофенола в этаноле. Появляется желтое окрашивание. Чувствительность реакции 2 мкг/мл.П р и м е р 2. Количественное определение а -аминоизовалериановой кислоты. Построение калибровочного графика.В пять пробирок вносят 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 и 2.5 мл 0,004/-го раствора а-аминоизовалериановой кислоты в этаноле и соответственно 3,0. 2,5, 2,0, 1,5, 1,0 мл этанола. В каждую пробирку прибавляют по 0,5 мл 0,02 -ного, раствора 2-метил,6-динитрофенола в этаноле и через 15 мин измеряют оптическую плотность образующихся окрашенных растворов на спектрофотометре СФпри длине волны 412 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм, В качестве раствора сравнения используют раствор, полученный в контрольном опыте. По результатам измерений строят калибровочный графикСветопоглощение окрашенных растворов подчиняется закону БугераЛамберта-Бера в интервале концентраций 5-25 мкг/мл. Методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение калибровочного графика, которое в данном случае имеет видО= 0,00898 С + 0,00430,где О - оптическая плотность;С - концентрация анализируемого вещества в фотометрируемом растворе, мкг/мл.Методика определения. Около 0,02 г (точная навеска) а -аминоизовалериановой кислоты растворяют в смеси 10 мл воды и 10 - 15 мл этанола в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят общий объем до метки этанолом раствора А). 5 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 25 мли доводят содержимое колбы до метки этанолом (раствор Б), 2 мл раствора Б помещают в пробирку, прибавляют 1,5 мл5 этанола, 0,5 мл 0,02%-го раствора 2-метил 4,6-динитрофенола в этаноле и дальнейшие операции осуществляют по схеме,указанной для построения калибровочного графика. Количественное содержание10 а-аминоизовалериановой кислоты опреде- .ляют по уравнению калибровочного графика и пересчитывают на навеску. Результатыопределения и метрологические характеристики представлены в таблице 1.15 Предлагаемый способ по сравнению спрототипом характеризуется более высокойселективностью. Так, в отличие от прототипа он позволяет определять а -аминоизовалериановую кислоту в присутствии20 других а -аминокислот: а.-амина- ф -(и-оксифенил)-пропионовой кислоты, а -амино-метилвалериановой кислоты, а-амино-оксипропионовой кислоты, а-аминоглутаровой кислоты, у;амида глутамино 25 вой кислоты, а-аминопропионовойкислоты, а -амино -фенилпропионовойкислоты, а, Е-диаминокапроновой кислоты,а-амино-у-метилмеркаптомасляной кислоты, пирролидин- а-карбоновой кислоты,По сравнению с прототипом предлагаемый способ в два раза сокращает и родолжительность определения (с 40 до 18 - 20 мин),не содержит трудоемких операций и уменьшает общее число аналитических операций35 с 8 до 4Сравнительная характеристика предлагаемого и известного способов приведена втабл, 2,40 Формула изобретения Способ определения а-аминоизовалериановой кислоты путем растворения анализируемой пробы в растворителе и 45 обработки цветореагентом с последующимфотометрированием образующегося окрашенного раствора, отл ич а ю щи й с я тем, что, с целью повышения селективности и упрощения способа, в качестве растворителя применяют этанол, а в качестве цветореагента - этанольный раствор 2-метил,6-динитрофенола,1712841 Таблица 1 Результаты количественного определения а-аминоизовалериановой кислоты бли ца 2 Сравнительная характеристика предлагаем Сравнительные па- раметры . вестный спосо едлагаемыи спос ктивность взя Й (взятие навески, растворение, обработка цветореагентом, фотометрирование) Число аналитических операций ие навески, растворе работка цветореагенрмостатирование, охе реакционного растбработка раствором на, фотометрирование ние, о том, т лажден вора, формал Наличие трудоемкиопера ций тсутству Термостатированиес вом 30 мин при 30 и 18-2 Продолжительност одного определен мин 3 Составитель Техред М,Мо ктор И, Касарда Корректо ал Л Тираж Подписноеосударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Заказ 531 ВНИИГагарина, 101 ьский комбинат "Патент", г, Ужгор Производственно-и Позволяет селективно определять ц -аминоизовалериановую кислоту в присутствии других К-аминокислот; с-амино-,Р-(п-оксифенил)-пропионовой кислоты, с-амино-метилвалериановой кислоты(-амино-Я-оксипропионовой кислоты, с( -аминоглутаровой кислоты, ) -амида глутаминовойкислоты, Ы -аминопропионовой кислоты, с(-амино- Л -фенилпропионовой кислоты,о( -с-диаминокапроновой кислоты, о.-амино-З=метилмеркаптомасля ной кислоты, пирролидин-о(-карбоновой кислоты Не позволяет селективноопределять А-аминоизовалериановую кислоту в при"сутствии других о(-аминокислот: с( -амино-Я-(и-оксифенил) "пропионовой кислоты, о( -амино-/3-метилвалериановой кислоты, о -амино-,13-оксипропионовой кислоты,с( -аминоглутаровой кислоты, 3 -амида глутаминовой кислоты, К-аминопропионовой кислоты, о-амино-Л-фенилпропионовой кис"лоты,й,с-диаминокапроновойкислоты, с( -амино-метилмеркаптомасляной кислоты,пирролидин-К-карбоновойкислоты