Способ получения иммобилизованного дигитонина

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВ 10 РСКОМУ СВИ Е 1 ЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 130779 (21) 2804495/23-04с присоединением заявки Нов(51) М Кл.з С 07 Ю 21/00 Государствеииый комитет СССР ио делам изобретеиий и открытий(72) Авторыизобретения И.В. Березин, А.М. Егоров и А.В. Ананичев,Московский ордена Ленина и ордена Трудового КрасногоЗнамени государственный университет имени М.В. Ломоносова(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОГО ДИГИТОНИНА Изобретение относится к способу получения иммобилизованного дигитонина, который является одним из наиболее распространенных представителей класса стероидных сапонинов.Известно, что дигитонин является аналитическим реактивом на свободный холестерин, с которым он образует нерастворимый осадок 11 .Дигитонин, иммобилизованный химическим путем на нерастворимом носителе, может быть использован для специфической сорбции холестерина из биологических жидкостей, в частности для удаления избыточного холестерина 15 из плазмы крови.Получение иммобилизованных стероидных сапонинов, в частности дигитонина, в литературе не описано.Известны способы иммобилизации фер"20 ментов на твердых носителях на оснО- ве двуокиси кремния 21.Цель изобретения - получение иммобилизованного дигитонина, который мож" но было бы испольэовать в качестве 25 сорбента для удаления холестерина.Указанная цель достигается описываемьхи способом, заключающимся в том, что дигитонин, предварительно окисленный периодатом натрия, обрабатывают 30ф силохромом или силикагелем, содержащими свободные 3-аминопропильные группы.Связывание дигитонина с носителем происходит за счет взаимодействия альгидных групп окисленной Формы дигитонина с амнногруппами носителя с образованиеМ ковалентных связей типа оснований Шиффа. Наличие химической связи между дигитонином и носителем обеспечивает прочное удерживание дигитонина на поверхности носителя при перфузии через него плазмы крови. Выбранные носители отличаются инертностью по отношению к компонентам крови.Способ 6 существляют следующим образом.Дигитонин окисляют периодатом натрия., как правило, в темноте при перемешивании в течение 3 ч при температуре 18-20 оС. Более длительный срок инкубации или повьыение температуры нежелательнй, так как это приводит к более глубокому окислению дигитоиина. К полученному раствору, содержащему окисленный дигитонин, добавляют предпочтительно макропористый аминированный 3-аминопропилтриэтоксисиланом силикагель или силохром и перемешивают857144 формула изобретения Составитель Ю. ХроповРедактор Н. Лазаренко Техред Л, Пекарь КорректорМ. щароши Заказ 7136/37. Тираж 397 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5филиал ППП фПатент 1, г. ужгород, ул. Проектная, 4 в течение 6 ч при комнатной температуре. На 1 г носителя обычно связывается 15-20 мг дигитонина.П р и м е р 11 г дигитонина растворяют в 200 ьщ воды при нагревании, прй этом образуется коллоядный раствор. К полученному раствору после охлаждения его до комнатной температуры добавляют 0,5 г периодата натрия.Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в темноте в течение 3 ч. К полученному раствору, 1 ф содержащему окисленный дигитонин, добавляют 10 г макропористого силохрома с размером нор 700-1000 2, аминированного 3-аминопропилтриэтоксисиланом, и перемешивают в течение 6 ч пои 15 комнатной температуре. Полученный препарат иммобилизованного дигитонина отделяют на стеклянном фильтре и тщательно отмывают 40 В-ным раствором спирта от несвязавшегося дигитонина до отрицательной реакции с холестерином. Н а 1 г носителя связывается 18 мг дигитонина.П р и м е р 2. Способ осуществляют согласно примеру 1, однако в качестве носителя используют макропористый аминированный 3-аминопропилтриэтоксисиланом силикагель с размером пор 800-1200 а. На 1 г носителя связывается 17 мг дигитонина,Дигитонин, иммобилизованный нааминированном силикагеле или силохраме предлагаемым способом, в опытахпо освобождению крови от избыточногохолестерина, в отличие от применявшегося ранее активированного угля,действует строго селективно и связывает свободный холестерин в нерастворимый комплекс,Способ получения иммобилизованного дигитонина, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что дигитонин окисляютпериодатом натрия, затем обрабатываютсилохромом или силикагелем, содержашими свободные 3-аминопропильныегруппы.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Робертс Дж. Основы органическойхимии. М., "Химияф, 1978, т. 2,с. 571.2. Иммобилизованные ферментыПод ред. И. В. Березина, И., ИГУ,1978, с. 105-.126.