Способ определения тиопентала натрия в крови

1719974Таблица 1 Количество Д - Д холостТН, нгД за 60 сго опыта ЙД) 0 (холостойопыт) 0,040 0,122 0,082 5 мин, После центрифугирования при 3000 об/мин в течение 30 мин отбирают 2 мл хлороформного экстракта и выпаривают на водяной бане при 40 - 60 С5 досуха, В пробирку к сухому экстракту добавляют 2 мл воды, размешивают и отбирают 0,02 мл для определения ТН.В табл. 5 показана характеристика способа экстракции ТН. 1 ОТаким образом, предлагаемый способ экстракции обеспечивает практически полное извлечение ТН, добавленного к плазме крови.Для проверки специфичностиспособа 15 экстракции, проводят экстракцию хлороформом из плазмы крови, не содержащей ТН (табл. 6),В табл. 6 показано определение специфичности экстракции ТН. 20Из данных таблицы видно, что хлороформный экстракт такой плазмы не содержит соединений, способных давать йодо-азидную реакцию.Определение ТН в крови больных во25 время наркоза по данному методу показало, что через 15 мин после внутри- венного введения 600 мг препарата в,.т крови обнаружено 12 мкг/мл ТН, что близко к концентрациям ТН в крови больных, определенных другими методами.В табл. 7 приведены результаты определения концентрации ТН в крови больных. 35 В табл. 8 приведено сравнение флуориметрического и предлагаемого способов определения тиопентала.40П р и м е р. Реактивы: хлороформ (очищен перегонкой)йодо-азидный, реактив содержащий 0,6 И раствор азида натрия, 0,0025 И раствор йода и 0 р 1 И раствор соляной кислоты (Все 45 реактивы приготовлены на бидистиллированной воде). Ход определения.К пробе плазмы крови прибавляют 0,1 И раствор соляной кислоты и хлороформ (соотношение 0,5:О, 1:8,0). Пробу интенсивно встряхивают в колбе с притертой пробкой в течение 5 мин, а затем содержимое центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин, Сухой пипеткой отбирают аликвоту хлороформного экстракта и на водяной бане выпаривают досуха при 40 - 60 С. К сухому экстракту дообавляют 2 мл бидистиллированной воды, встряхивают и отбирают 0,02 мл для анализа. В кювету помещают йодо-азидный реактив в составе, мл: 0,6 М раствор азида натрия О, 15; О, 1 М раствор соляной кислоты О, 1, 0,0025 И раствор йода 0,15.Измерение экстинкции йодо-азидной смеси проводят при 340 нм в кювете объемом 0,5 мл и длиной светового пути 10 мм. После этого к йодо-азидной смеси в кювете добавляют 0,02 мл пробы и через 60 с проводят повторное измерение экстинкции и рассчитывают изменение оптической плотности.При определении тиопентала в пробах плазмы, содержащих нанограммовые количества препарата, соответственно уменьшают количество воды, прибавляемой к сухому экстракту. Формула изобретения Способ определения тиопентала натрия в крови путем экстракции препарата, Обработкн реактивом с последующимизмерением оптической плотности смеси, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения чувствительности способа, экстракт суспендируютв воде, водную суспензию обрабатываютйодо-азидной смесью при их соотношении 1:25 с последующим измерением величины ойтической плотности через1 мин при 340 нм,1719974 Продолжение табл 1 0,136 0,403 0,684 0,176 0,443 0,724 10 100 1000 Таблица 2 Д Статистические параметры 0,171 б =+0,0275 - среднее квадратичное отклонение отдельных результатов О, 161 Х = О, 156 - среднее арифмети- ческое 0,156 Я = 0,00972 - средняя квадратичная ошибка.Таблица 3 0 0 дрол 2 Атрофии Калипсо 00 0 П р и м е ч а н и е. Проба содержит О, 15 мл 0,6 И раствора аэида натрия, О, 1 мл О, 1 И раствора соляной кислоты и О, 15 мл 0,0025 И раствора йода. К пробе прибавляют раствор ТН объемом 0,02 мл (в холостом опыте 0,02 мл воды)фотометрирование проводят в кювете с длиной светового пути, см, при Ъ = 340 нм.1719974 Продолжение табл.3 0,0 200 ДитилинРеланиум 0,0 200 П р и м е ч а н и е, Количество препаратов в 20 раз превьппает количество ТН, вызывающее полное обесцвечивание йодо-азидной смеси. Таблица 4 Объем плазмы, прибав- Изменение о:тиленной к йодо-азидной ческой плотноссмеси ти Д 0,02 0,02 0,02 1Таблица 5 Количество ТН, добавленного к Д иэчетырехизмеренийстандарта Процентэкстракции плазме крови мкг 0,137 99,2 100 1,0 О, 137 97,1 0,157 96,9 500 5,0 5000 50,0 П р и м е ч а н и е, Раствор плазмы, содержащей ТН,готовят следующим образом. К 0,25 мл плазмы крови добавляют 025 мл раствора с известным содержанием ТН ипроводят экстракцию по описанной схеме, Стандартныйраствор сравнения готовят следующим образом. К 0,25 млводы добавляют 0,25 мл раствора ТН той же концентрациии разводят в 100, 500,и 5000 раз. Коэффициент разведения при экстракции и отборе проб для из- мерений 0,138 О, 141 О, 162 1,201.1,152 1, 176 Дс изчетырехизмеренийэкстрактаплазмы1719974 Таблица 6 Количество йлазмыкрови, мл Д опьто вонтро ь у 0,0 0,0 1,0 О,О 1,0 Таблица Проба, взятая на анализ, мл Д Л,Р С, мкг КфС, мкг 0,5 0,542 О, 15 80 О, 15 = 12 0,5 0,5 0,548 П р и м е ч а н и .е. С - концентрация ТН по графику;К - коэфФициент разведения. Т а блица 8 5,0 10,0 100 0 4,02 Х 3,367 П р и м е ч а н и е. Ф, - флуоресценция пробы, Ф - флуоресценция контроля; Д - оптическая плотность пробы,Дк - оптическая плотность контроля. Составитель С.РыбалкинРедактор М,Петрова Техред М,дидык Корректор Л.Пилипенко Заказ 768 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. Гагарина, 101 0,537 0,541 Количество тиопентала в пробе,нг Точность определения при р