Способ получения 5 -нуклеотидов

") 4 В 77 ОЗ Союз Советских Социалистических Реснублик) 1886517/23-4 51) М. Кл. С 070 51,/50 киприсоединением Государственный комит Совета Министров ССС иоритет убликовано 25,01.75. Бюллетень3 53) УДК 547,963.32.0(088,8) лам изобретенм открытий Дата опубликования описания 04,03.7 2) Авторы изобретени В. П. Варламов, Д. Г,-А, Вальковский, С. В. Рогож Р. И. Татарская и Т, Н, Львова 71) Заявит дена Ленина Институт элементоорганических соединен) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 5-НУКЛЕОТИ му спонаходят ства в аратов Изобретение относится к улучшенн собу получения соединений, которые применение как промежуточные ве синтезе различных лекарственных пр и витаминов. Известен способ получения 5-нуклеотидов путем ферментативного расщепления нуклеиновых кислот ферментом - экзонуклеазой Аактиномицетов.Такой способ характеризуется неустойчивостью фермента к нагреванию и невозможность его повторного использования при проведении процесса в растворе, Это ограничивает выход 5-нуклеотидов на единицу активности фермента. Кроме того, целевой продукт получается загрязненным и требуется дополнительная очистка.Предлагаемый способ позволяет увеличить выход целевого продукта на единицу активности фермента за счет перевода фермента в водонерастворимое состояние. При этом фермент становится термостабильным, его можно использовать многократно,Сущность предлагаемого способа заключается в том, что раствор нуклеиновых кислот в буфере с рН 9 подвергают ферментативному гидролизу водонерастворимым ферментом экзонуклеазой Аактиномицетов, ковалентно связанным с органическим или неорганическим носителем, например модифицированными хромосорбом Р, полиакриламидом или диазотированной м-аминобензилоксиметилцел люлозой. При этом сохраняется 30 - 90% исходной активности фермента (в зависимости от типа носителя и молекулярного веса субстрата). Так как фермент переведен в водонерастворимое состояние, то при осуществлении 10 предлагаемого способа получают 5-нуклеотиды путем многократного использования связанного фермента в виде суспензии, во взвешенном слое, в проточной колонне в качестве насадки и т. п. В течение месяца нуклеазная 15 активность такого фермента снижается лишьна 5 - 25%.Пример 1, Твердый носитель для газожцдкостной хроматографии - хромосорб Р кипятят в 0,1 - 0,2% -ном растворе у-амино пропилтриэтоксисилана в органическом растворителе в течение 24 час. Полученное при этом промежуточное производное обрабатывают 1 - 2%-ным водным раствором глутарового альдегида при 0 - 5 С в течение 0,5 - 25 2 час и затем перемешивают с 0,1 - 2%-нымраствором фермента - экзонуклеазой актиномицетов от 4 до 24 час при 4 С. Полученный водонера створ имый ковалентно связанный с хромосорбом Р фермент обладает нуклеазной 30 активностью.Заказ 442/17 Изд. Юо 319 Тираж 529 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж.35, Раушская наб., д. 475Типография, пр. Сапунова, 2 Ферментолиз нуклеиновых кислот. Проточную колонну, термостатированную при температуре 37 С, заполняют водонерастворимым ферментом,на носителе - хромосорбе Р. На колонку подают 1 - 10/о-ный раствор нуклеиновых кислот в буфере с рН 9 со скоростью 10300 мл/час. Нуклеиновые кислоты разлагаются до 5-нуклеотидов неизменно,в течение месяца непрерывной работы. Водонерастворимый фермент теряет при этом 10 - 15/о первоначальной активности, 5-Нуклеотиды разделяют ла ионообменной колонне, идентифицируют с помощью бумажной и тонкослойной хроматографии, а также 5-нуклеотидазы и по Уф-спектрам. 4Предмет изобретенияСпособ получения 5-нуклеотидов путем ферментативного гидролиза раствора нуклеиновых кислот в буфере с рН 9 ферментом - экзонуклеазой Аактиномицетов с последующим выделением целевого продукта известным способом, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта на единицу активности фермента, процесс проводят с водонерастворимым ферментом, ковалентно связанным с органическим или неорганическим носителем, например модифици. рованным хромосорбом Р, полиакриламидом или диазотированной м-аминобензилоксиметилцеллюлозой,