Штамм бактерий мyсовастеriuм fоrтuiтuм, используемый для изготовления аллергена

1747482 А 1 СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9 у( % ТЕН ОБ МУ СВИДЕТЕЛЬ АВТО РСК етеринары РСФСРомирова,, 1972, с. Озе УСОВАСТЕЯ МЫЙ ДЛЯ ИЗГ ГОСУДАР СТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ МРОВТОТОМ, ИСПОЛЬЗУЕТОВЛЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиологии, представляет собой новый штамм МусоЬас 1 егШщ фойоШе, характеризующийся активным ро- стом на синтетической среде и туберкулиногенностью, и может быть использовано для изготовления аллергена,Целью изобретения является штамм МусоЬасегЦа 1 огтвтцпз ГИСК ч. 35, используемый для изготовления аллергена.Штамм выделен из мокроты человека с микобактериозом легких и обладает всеми свойствами, характерными для рода МусоЬасйег 1 цв,Морфологические признаки, Палочки длиной 2,0-3,0 мкм, грамположительные, по Цилю-Нильсену окрашиваются в красный цвет.Культуральные признаки, На платной яичной среде образуют мелкие сухие, шероховатые колонии кремового цвета. В жидких питательных средах не вызывает помутне)5 С 12 Й 1/20, А 61 К 39(57) Использование. ветеринарная микробиология, серологическал диагностика туберкулеза, получение аллергена. Сущность изобретения; штамм МусоЬассегцгп огто 1 ут ГИСК М 35 засевают на жидкую синтетическую среду Линникавай-Могилев-.ского, Выращивают в термостате при 37 С в течение 5-6 недель. Колбы с культуры стерилизуют в автаклаве при 120 С в течение 30 мин, фильтруют, Туберкулин осаждают трихлоруксуснай кислоты, очищают ацето ном, этиловым спиртом и эфиром. Химический состав полученного аллергена, следующий, мас оь; 75.0-80,0, полисахариды 9,0-11,0. 1 табл,ние, на поверхности образует толстую, морщинистую пленку кремового цвета, через 4-5 нед. роста окрашивает среду в коричневый цвет, На плотной яичной среде Левен- д штейна-Йенсена при 37 ОС вырастает за 3-5 дней; на картофельно-глицериновой среде Павловского - за 5-6 дней, Размножается ф" при 22-40 С, не растет при 45 ОС. Оптимум роста 36-37 С., ЬФерментативные свойства, Расщепля- ОО ет с образованием кислоты инозит; не фер Я ментирует рамнозу, арабинозу, сорбит, манн ит, дул ьцит, утилизи рует цитрат и малонат натрия, Обладает активными ферментами: уреазой, Р галактозидозой, нитратредуктозой. Растет на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена с добавлением 5 О-ного хлористого натрия или салицилата натрия.Туберкулиногенные свойства. В процессе роста штамма на синтетической среде Линниковой-Могилевского, начиная с трех.3четырехнедельного возраста, происходитнакопление в среде туберкулина (инситина),Максимальное количество сенситина в среде образуется через 5-6 нед. роста,После заражения морских свинок бактериальной массой в количестве 1,0-1,5 мгвнутримышечно животные остаются здоровыми в течение 3 мес., на вскрытии патолого-анатомическая картина микобактериозаотсутствует. " 10П р и м е р 1, Получение туберкулина.Штаммы МусоЬастегйв 1 огто 1 т 0 е ГИСК М35 засевают на жидкую синтетическую среду Линниковой-Могилевского (3 серии из 20колб с 0,5 л среды), выращивают в термостате при 37 С в течение 5-6 нед. Затем колбы. с культурой стерилизуют в автоклаве при120 С втечение 30 мин, фильтруют, высуши. вают и взвешивают. Выход сухой бактериальйой массы 0,720-0,980 г на 1 л среды. 20Туберкулин (сенситин) осаждают трйхлоруксусной кислотой с последующей очисткойацетоном, зтиловым- спиртом и эфиром.Полученный туберкулин (сенситин) представляет собой порошок светло-серого цвета, Химический состав характеризуетсясодержанием, %, белка 75,0-80,0 и полисахаридов 9,0-11,0,Каждая из 3-х серий посевов имеет продуктивность 0,890; 0,930 и 1,150 г на 1 л 30среды соответственно. Биологическая активность сенситина из штамма МЯогтойца ГИСК М 35 Раэме кожных еак ий, мм, и и озе сенситина, мг Примечание 0,000075 0,00015 0,0003 Некроз при дозе 0,0003 мгНекроз при дозе 0,0003 мгНекроз при дозе 0,0003 мгНекроз при дозе 0,0003 мг56 56 57 б 5 бнб 7 хб 74 7 б 66 65 5 лб 78 85 блб 5 л 5 55 57 4"5 5 б 57 67 ЗкЗ 55 8 10 89 99 10 Я 1112.1510 1010 11 х 11 13 12 10 9 109 11 12 8 л 7 99.96 77 118 910 99 12 "11 11 к 12 55 бкб 44 П р и м е р 2, Определение биологической активности, 24 светлокожих беспородных морских свинок весом 300-350 г сенсибилизируют внутрикожным введением 5,0 мг бактерийной массы МЛопцшгп ГИСК Ь 35 в неполном адьюванте Фрейнда.Через месяц после сенсибилизации морским свинкам внутрикожно вводят сенситин в дозе, мг: 0,000075; 0,00015; 0,0003 в 0,1 мл растворителя для туберкулина млекопитающихх.Результаты представлены в таблице.Одновременно 16 морских свинок сенсибилиэируют полным адьювантом Фрейнда с 5,0 мг БЦЖ. Через месяц на них ставят кожные пробы со стандартным туберкулином из ГИСК им.Л,А.Тарасевича в дозах 2 ТЕ,5 ТЕ и 10 ТЕ.Биологическую активность выявляют методом гетерологичных аналогий при сравнении известного стандартного с новым гетерологичным. Биологическая активность составляет 0,00003 мг в одной туберкулиновой единице. Формула изобретения Штамм бактерий МусоЬастегоа. тогцмв ГИСК М 35, используемый для изготовления аллергена,14 15 16 17 18 18 1616 . 12 т 121515 16 ф 12 12 16 1216 15 16 16 ч 14 14 16 12 к 12 1213 13 12 12 12 12 15 15 к 15 14 15 1413 1616 106 12 1067