Питательная среда для получения энтеротоксина clostridium perfringens типа а штамма э1

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНТЕРОТОКСИНА CLOSTRIDIUM PERFRINGENS ТИПА А ШТАММА Э₁, содержащая питательную основу, стимулятор роста, водорастворимый крахмал, натрий фосфорнокислый двузамещенный, тиогликолят и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения активности энтеротоксина, в качестве питательной основы она содержит пептон D, в качестве стимулятора роста экстракт кормовых дрожжей, в качестве тиогликолята тиогликолевую кислоту при следующем соотношении компонентов, г/л:
Пептон d 1,5 2,0
Экстракт кормовых дрожжей 2,5 3,0
Водорастворимый крахмал 4,0 5,0
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 6,6 10
Тиогликолевая кислота 0,25 0,3
Вода До 1 л

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается питательной среды для культивирования Cl. perfringens типа А штамма Э₁ c целью получения энтеротоксина, необходимого для изготовления диагностических антиэнтеротоксических сывороток, а также для определения энтеротоксигенности штаммов этих микроорганизмов в процессе их идентификации при лабораторной диагностике пищевых токсикоинфекций у людей и энтеротоксемий у животных.
Цель изобретения повышение активности энтеротоксина.
П р и м е р 1. Ингредиенты среды берут в следующих соотношениях, г/л: Пептон "D" 1,5
Экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) 2,5
Водорастворимый крахмал 4,0
Натрий фосфорнокис- лый двузамещенный 6,6 Тиогликолевая кислота 0,25
Вода
Указанные ингредиенты растворяют в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипения и кипятят 3-5 мин, проверяют реакцию среды и при необходимости корректируют известным способом. Среду разливают во флаконы или пробирки, стерилизуют в автоклаве при 110^oC в течение 30 мин. В готовой среде содержание аминного азота составляет 65-75 мг рН 7,2-7,4.
П р и м е р 2. Среду готовят в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих соотношениях, г/л: Пептон "D" 2 ЭКД 3
Водорастворимый крахмал 5 Na₂HPO₄ 10 Тиогликолевая кислота 0,3
П р и м е р 3. Среду готовят в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующем соотношении, г/л: Пептон "D" 1,75 ЭКД 2,75
Водорастворимый крахмал 4,5 Na₂HPO₄ 8,0 Тиогликолевая кислота 0,27
П р и м е р 4. Получение нативного энтеротоксина Cl. perfringens типа А.
Тест-штамм Э₁ Cl. perfringens типа А первоначально культивируют 16-18 ч на известной тиогликолевой среде, повторно пересевают в ту же среду и инкубируют в течение 6 ч при 37^oC, затем пересевают на предлагаемую среду в количестве 5% посевного материала к объему среды. Инкубируют в тех же условиях в течение 14-16 ч.
К этому сроку культура содержит не менее 30% спорулирующих клеток в фазе нелизированных спорантиев. Культуру центрифугируют на рефрижераторной центрифуге при 3000 об/мин и трехкратно отмывают в физиологическом растворе в том же режиме, полученную клеточную массу разводят физиологическим раствором до объема, равного 1,5% объема исходной спорулирующей культуры. Полученную клеточную суспензию, содержащую не менее 10¹¹ микробных клеток по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича, подвергают ультразвуковой дезинтеграции на установке MSЕ (Англия) в течение 15 мин. Полученный клеточный экстракт, содержащий энтеротоксин и структурные элементы клеток, центрифугируют на холоде при 16000 об/мин в течение 15 мин. Осадок отбрасывают, отбирают надосадочную жидкость, содержащую нативный энтеротоксин, который затем подвергают очистке или применяют в нативном виде для получения антиэнтеротоксических сывороток Cl. perfringens типа А.
На предлагаемой среде указанным способом получено 7 серий по 50 мл нативного энтеротоксина из тестштамма Э₁ Сl. perfringens типа А активностью 400-600 DLm/мл для белой мыши.
Данные по уровню энтеротоксинообразования приведены в таблице.
Использование питательной среды позволяет определять энтеротоксигенность штаммов Сl. perfringens типа А, повысить активность энтеротоксина и удешевить способ за счет упрощения состава среды.
Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается питательной среды для получения энтеротоксина Сlostridium perfringens типа А штамма Э₁. Цель изобретения - повышение активности энтеротоксина. Для приготовления питательной среды пептон D 1,5-2 г, ЭКД 2,5-3 г, водорастворимый крахмал 4-5 г, Na₂HPO₄ 6,6-10 г, тиогликолевую кислоту 0,25-0,3 г растворяют в 1 л дистиллированной воды, кипятят 3-5 мин, стерилизуют после розлива при 110°С в течение 30 мин, рН среды 7,2-7,4. Активность энтеротоксина 400-600 Dem/мл для белой мыши. 1 табл.