Способ определения токсичности веществ

2 1 ч 1/00//С 12 а 1/002 Р 1/125 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1) 342 2) 12.0 6) 30.1 г) О.И. Н, Григо В. Тара 1) Все инсти О., 00 гоег 1 а 1 се 5 сапд с 1 а 551- сагс 1 пооеп 5.- О, 1973,а К., ап од аког ча 1 пЬ 1 Ь 1 с 1 оп В 011. Епч 1 - 81, 26, йф 2 ГОСДАРСТВЕННЫй НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ 1 258/28-1 34.821,83. Бюп. % 44Астахова, Л,С. Наумов,рьева, Л, Е, Давыдкина,ва и А,Н,Божкооюзный научно-исспедоватепьсут биопогического приборостроН, со(5 Ь) 1. Аще 5 В.М 1.ес Гсоп И.Е. Ап 1 щргочед Ьас5 усСеа Гог СЬе деСесС опГсас 1 оп оГ пасапеп 5 апдРгос, Мас 1, Асад, 5 с 1.,р. 782-786.2. 1.т О. Кха 5 сЬ 1 го 51 щргочед аоаг р 1 асе веср 1 д а 55 еыпепс оГ сЬев 1 сасо щ 1 сгоЬ 1 а 1 ророас 1 оп.гоп. Сопсав, Топ 1 со 1., 1р. 145-149,(54),(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ ВЕЩЕСТВ, предусматривающивоздействие исспедуемого вещества натест-систему при их совместной инкубации, о т п и ч а ю щ и й с я тем, что,с цепью повышения чувствитепьности, атакже ускорения способа, в качестве тестсистемы испопюуют суспензию протоппаотов, попученных иэ купьтуры ВОСаЯВОЭ50 Ы 16168 в концентрации 2108310 в 1 мп суспензии, при етомисследуемое вещество вводят в суспензию протопцастов в копичестве, составпяющем 0,05-Ю,25 от общего объемас успензии.10Изобретение относится к микробиоло.гическим исследованиям, в частности кразработке способов тестирования токсических веществ (например, отходовмикробиологической промышленности),которые предназначен дия опенки загрязненности окружающей срецы.В связи с нарастающим загрязнениембиосферы откодами промышленного цроиэвоцствав частности микробиологической промышиенности, разработка способовтестирования вредных эффектов токсических веществ-еагряэниезлей биосферы выдвигается в число первоочередных задачпо охране окружающей среды. Многообразие токсическик веществ предъявляетособые требования к системамтестиро-вания: дешевизна, эффективность тестирования, высокая пропускная способностьЭтими свойствами облацают микробнывтес 1 системы,Известен способ тестирования мутагенных (токсическик) веществ с помощьюбактерий, несущих мутации по репарации.Согласно данному способу в качестве .Ртест системы используют киетки ба бдо-.МИО (,фМрщ 10 тл, в которые цля облегчения доступа тестируемых веществввоцят мутации; повреждающив структуруклеточной оболочки (01,(о ), При этомтестируемое вещество наносят на дискиэ фильтровальной бумаги, который домешают на бактериальный газон. Через24 ч инкубации при 37 фС оцениваютмутагенный(токсический) эффект тестируемого вещества по величине зоны гибелибактерий. Тест-система отличается повышенной чувствительностью благодарямутациям, поврежцаюшим клеточную оболочку 1,Однако способ характеризуется длитвиьпостыл гестирования. Кроме того, микросомы экстрактов печени, используемыхв тестах на баФВОИЕИОдля метаболической активации агентов, в то же время 45 Таблица 1 Количествопротопиастовв 1 мл суспензии, Т) 3 4 ,45 ,5 ,6 0 вестному способу смесь бактериаиьныхльтур, вырашенную в течение 18 ч,55евают на чашки, затем вносят токсикие агенты в градиентных хонпвнтрак н через 18 ч ннкубации рвгнстриру,3 зоны подавления роста культур на 60 61 67 80 способствуют их детоксикации, что затрудняет тестирование токсичности,Наиболее базок к предлагаемому потехнической сущности и достигаемому эффекту способ определения токсичности веществ, предусматривающий воздействие исследуемого вещества на тест-систему при их совместной ннкубации, Согласно Кувысчесция чашках. Минимальная определяемая концентрация феноиа в пробе составляет200 мкг (2 О г/и), длительность определения 24 ч 215 К недостаткам способа относятся егоалительность и низкая чувствительность.Цепь изобретения - повышение чувствительности, а также ускорение способа.10 Поставленная цепь достигается тем,что согласно способу определения токсичности веществ, предусматривающемувоздувйствие исследуемого вещества натест-систему при нх совместной инкуба15 ции, в качестве тес 1 системы используютсуспвнзию протопластов, полученных изкуиьтурыбасйцъ бцЪОСев 168 в концентрации 2 ф 10 в - 310 й в 1 млсуспензии, при этом исследуемое вещест 20 во вводят в суспензию протопластов вколичестве, составляющем 0,05-0,25 отобщего объема суспензии.Сущность способа заключается в следующем.25 Суспвнзию протопластов получаютизвестным методом из культуры ООС.505668 168 в логарифмической фазероста на солевой среде с содержаниемсахароэы 68,5 г/и и щелочным значениЗ 0 вм рН среды. Количество протопиастовв 1 мл составляет 2 ) 106 - 310В. причем обьем токсического вещества,ввоаимого в суспвизию протопластов,аоижен составлять 0,05-0,25 от общегообьвма суспензин, для того чтобы выживаемость протопиастов составляла 5060%, Минимальная вводимая доза токсиГчвского вещества находится в пределах1-50 мг/л,40 В качестве тестируемого веществавыбран цезоксон,Зависимость токсического эффекта де,эоксона (5 мг/л) от концентрации протопластов приведена в табл. 1 .