C12N 9/16 — действующие на сложноэфирные связи (3.1)

Номер патента: 1763488

Опубликовано: 23.09.1992

Авторы: Вотрин, Кирзон, Пчелинцева, Романцев, Соколова, Ткачева, Ходарев, Чупырина

МПК: C12N 9/16, G01N 27/26

Метки: зависимой, ингибитора, эндонуклеазы

...концентрации сульфата аммония до 70 приводило к снижению выхода ингибитора на 10-15 и снижению стабильности препарата. Повышение концентрации сульфата аммония до 85 фи 90 фне приводило к изменению результатов,Осадок, полученный после высаливания, растворяли в минимальном объеме 10 вМ трис-НС, рН 7,4 - 7,6 и обессоливали на колонках с сефадексом 6-25. Обессоленный образец, содержащий 1 - 1,5 мг белка в 1-2 мл, наносили на катионообменную колонку "Мопо Я" (система РР С, Фармация, Швеция), предварительно уравновешенную тем же буфером. Скорость нанесения составляла 0,1-0,2 мл/мин. После нанесения образца колонку промывали 5 - 7 мл того же буфера со скоростью 1 мл/мин, после чегоначинали элюцию сорбированных белков линейным градиентом йаС...

Номер патента: 1426089

Опубликовано: 07.11.1992

Авторы: Аренс, Макарова, Сахаров

МПК: C12N 9/16

Метки: фосфатазы, щелочной

...30 мл/ч. Фракции, содержащие ферментную активность обьединяют и вычисляют удельную активность полученного препарата щелочной фосфатаэы, которая равна 750 ед,/мг белка. Выход по активности 80 О.П р и м е р 2, 15 мг препарата щелочной фосфатаэы тюленя (120 ед,/мг белка) растворя(от в 10 мл 10 мМ фосфатного буфера рН 5,8, содержащего 1 мМ хлористого магния. Раствор фермента наносят на колонку с фосфоцеллюлоэой (26 х 280 мм), уравновешенной буфером А, и отмывают ионообменник тем же буфером до А 2 ва = 0,03, Фермент элюируют 10 мМ И 2 НРОа. Ионообменную хроматографи(о проводят при 4 С. Скорость элюции 30 мл/ч, Фракции, содержащие ферментативную активность, объединяют и вычисляют активность полученного препарата щелочной фосфатазы,...

Номер патента: 1554377

Опубликовано: 07.11.1992

Авторы: Аренс, Ермолин, Лахтин, Макарова, Сахаров

МПК: C12N 9/16

Метки: фосфатазы, щелочной

...проводят при 4 С. Скорость элюции - 50 см/ч, Фракции, содержащие ферментативную активность,объединяют и диализуют против буфера А без МпС 12 и СаС 12 Активность полученного препарата щелочной фосфатаэы равна 3500ед/мг белка,5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 П р и м е р 2. 15 мг коммерческого препарата щелочной фосфатазы тюленя с удельной активностью 58 ед/мг белка растворяют в 5 мл 20 мМ трис-НС 1, рН 7,4, содержащего 1 мМ М 9 С 12, 1 мМ МпС 12, 1 мМ СаС 12 0,5 М МаС 1(буфер Б), Раствор фермента наносят на колонку с конканавалином А, иммобилизованным на сополимере оксиэтилметакрилата и этилендиметакрилата (9 х 91 мм), уравновешенную буфером Б и отмывают тем же буфером до Агво 0,01-0,03, Фермент элюируют стартовым буфером, содержащим 50 мМ...

Номер патента: 1287593

Опубликовано: 07.11.1992

Авторы: Аренс, Бейнаровича, Гиршович, Ермолин, Ефремов, Кирсис, Киршбаумс, Макарова, Руткис, Саканделидзе, Салмане, Сахаров

МПК: C12N 9/16

Метки: фосфатазы, щелочной

...образца и элюираваиие осуществляют градиентным программируемым микронасосом РРМ(ЧССР) со скоростью потока 1,2 л/ч, Элюирование проводят в градиентном режиме с увеличивающейся в буфере А концентрацией КаС 1 ат О до 1 М.В процессе хроматаграфирования отбирают фракции по 20 мл. В полученных фракциях определяют активность щелочной фосфатазы и содержание белка, рассчитывают удельную активность фермента и выход по активности, 5 10 20 После храматографической очистки наДЭАЭ-сфероне активность щелочной фасфатазы составляет 120-130 ед/мг белка ивыход до активности 80-84%,За единицу активности принимают количество фермента, катализирующего отщепление 1 мкМ неорганического фосфата при рН 9,3, 37 С в присутствии 10 мМ МЯСА,Верхняя граница...

Номер патента: 1832129

Опубликовано: 07.08.1993

Авторы: Аникейчева, Калугин, Карпычев, Либрик, Самко, Соколов, Фицнер, Хорошутина, Эльдаров

МПК: C12N 1/20, C12N 9/16

Метки: bacillus, бактерий, вrеvis-продуцент, рестриктазы, штамм

...33(3;," л"(ТОН(3 О 3 б)гГЛ 3 )г 3 Е 33 гГг 3 г 3 о3,1 , г,3.О 3 Л Е Р Н ОП О М В Г 3Г 3И З О " Г -, ;Отное.ие 3 к 3 спрол.)э,".,Ти)3 иэа 33 ИЛ УГП/),)г",)33 а г.г 33,):,;" 3 СЛота . Гаэ + 3) 3 Л;31,Индол и сероводрд;: О 3)з г,ъ 3(033 Т 3)МДЛЬ 33 ЫО УС(С) .л:,(3,:)3 ,;:Х 3)ДНЕ).33 л 3 К(13 ГУОЫ,Куль;ура В. Ьг)чг) ВКгЛ В9 хо,)(;)3 сРЭСТЕт ВУСПОВИЛХ )ЭРДЦ 313 33,3; Г (, 3-, Гг,г)3,ОНО )ОТТИНГ3, сг)ле)3(а 3 е 3 ) "г 1 Г(33(Г)Э 3,без Гл)окозь), на (,раде с 3)д)гллиэз)ок 3 пК)Л И Срвдц .В. П)3 Л ВЫГ)л.; г Ч ".: ": (П,гг;1И г С на каОй,.е 3 а )аз 3 3 и.,; )Тег(Е)33" 10: 133 пгг(3 И- Г "-); "глюкозь 3 1,(; срг:313;) 3- 1,.), (;3 к. :;.,:,(г(лд:)0333 лззто 33 2,31,(3)Е3)Е 3)ТЛГцн 3 Г, ГГ:. гдобавлен)я в фе) 3 пт,.ношении 3 10 к Обьему с)Оп) И...

Номер патента: 1838406

Опубликовано: 30.08.1993

Авторы: Карл, Рагнар, Эвен, Эрлинг

МПК: C12N 9/16, C12N 9/24, C12N 9/26 ...

Метки: активных, биологически, компонентов

...экстракта путем прямой фильтрации после добавления поликатиона на основе полиакриламида. Применяют около 0,1 г поликатиона на 1 л экстракта, После флокуллирования и фильтрации фло-. куллированных частиц с применением рамного фильтра, окончательный экстракт дополнительно концентрируют, Второе концентрирование производят в 10 раз в системе поперечной фильтрации, состоящей из блока полых полисульфоновых волокон с пропусканием молекул до 10000 дальтон. Объем после этого последнего концентрирования составляет приблизительно 20 л,Щелочную фосфатазу связывают с 10 л 0-сефарозы (непрерывный поток) в колонке с плацадью поверхности приблизительно 500 см, со скоростью 8 л/ч, Колонку уравновешивают трис-Н С буфером (при р Н 7,2, 1 мМ хлорида...

Номер патента: 928794

Опубликовано: 15.11.1993

Авторы: Панфилова, Салганик

МПК: C12N 1/20, C12N 9/16

Метки: bacterium, marcescens, prodigiosum, serratia, в-10, неспицифической, продуцент, штамм, эндонуклеазы

...мкм.Культуральные признаки и физиологобиохимические свойства, При посеве на РПА колонии округлые, гладкие, диаметром 1,5 мм через 48 ч роста при+30 С). Профиль колоний выпуклый, Пигментная окраска колоний, характерная для вида В,ргобц 1 озце, отсутствует, Желдину разжижает, молоко свертывает, крахмал гидролизует слабо, клетчатку не разлагает, нитраты восстанавливаетдо нитритов. Штамм является ауксотрофом, Иэ глюкозы, сахарозы, мальтоэы,маннита образует кислоту, на лактозе кис. лоту не образует, Оптимальный режим роста: температура 28-30 С; рН среды 7-8.При лабораторной проверке эндонуклеазиой активности полученного штаммаВ,ргоб 91 озце 8-10, Ми сравнении ее с20 активностью известного штаммаВ,ргоб 191 озце 8-10, Мпри выращиваниина...

Номер патента: 1713265

Опубликовано: 15.12.1993

Авторы: Сахаров, Степанова

МПК: C12N 9/16

Метки: фосфатазы, щелочной

...равнон иНС, рН 7,4, содержащего 2,5 мМ Мд 304, в 19000 ед/мг белка, выход по активности ратечение 20 ч при 4 С, Буфер заменяют све- вен 90 о .жим через 10 ч. К полученному диализатупри перемешивании добавляют этанол (4 С) П р и м е р 2. 25 г свежезамороженногодо конечной концентрации 55 - 65 об.о , вы тонкого кишечника тюленя размельчали идерживают 30 мин при 4 С и осадок центри- гомогенизировали в 25 мл 0,05 М трис-НС,фугируьот. Полученный осадок растворяют в рН 7,4, содержащем 2,5 мМ М 9304. К гомо 20 мл 0,02 М трис-НС рН 7,4, содержащем генату добавляли 80 мл н-бутанола и прово 10 мМ МдС 2 и 0,5 М ИаС. Раствор наносят дили экстракцию при 37 ОС в течение 1,5 ч.на колонку (Ч=10 мл) с иммобилизованны Бутанольнуюфазуотбрасывали, а 45 мл...

Номер патента: 1738108

Опубликовано: 30.05.1994

Автор: Сахаров

МПК: C12N 9/16

Метки: фосфатазы, щелочной

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ, включающий экстракцию липидов из животного сырья, осаждение фермента из экстракта этанолом и очистку его аффинной хроматографией, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве сырья используют содержимое кишечника млекопитающих, а экстракцию липидов осуществляют добавлением раствора хитозана до конечной концентрации хитозана 0,01 - 0,4% при рН 5,5 - 10,5 и температуре 0 - 45oС.

Номер патента: 1152252

Опубликовано: 09.02.1995

Авторы: Мазина, Пустошилова, Селина, Серов, Фодор, Шулюпин

МПК: C12N 1/20, C12N 9/16

Метки: malvacearum, xanthomonas, xmabi, в-2710, продуцент, рестрикции, штамм, эндонуклеазы

ШТАММ XANTHOMONAS MALVACEARUM В-2710 - ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ XMABI.Штамм Xanthomonas malvacearum В-2710 (коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика", коллекционный номер ЦМПМ В-2710) - продуцент эндонуклеазы рестрикции Xma BI.

Номер патента: 1311253

Опубликовано: 10.03.1995

Авторы: Баев, Бурьянов, Зеидака, Косых, Миериня, Шпрунка

МПК: C12N 9/16

Метки: метилазы

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕТИЛАЗЫ E CO R11, предусматривающий культивирование продуцента Escherichia coli, инкубацию и дезинтеграцию клеток ультразвуком, получение бесклеточного экстракта, осаждение фермента сульфатом аммония, хроматографию на диэтиламиноэтилцеллюлозе и фосфоцеллюлозе и последующее концентрирование, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и удельной активности фермента, в качестве продуцента используют штамм Escherichia coli суспензию клеток инкубируют в присутствии лизоцима, фермент осаждают полиэтиленимином, который добавляют к бесклеточному экстакту до концентрации 0,3 - 0,4% с последующей элюацией метилазы из осадка 0,4 - 0,5 М хлористым калием,...

Номер патента: 1218678

Опубликовано: 10.04.1995

Авторы: Баев, Кузьмин, Солонин, Таняшин

МПК: C12N 15/00, C12N 9/16

Метки: рестрикции, эндонуклеазы

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ ECO RV из клеток продуцента Escherichia coli, содержащих рекомбинантную ДНК, несущую гены рестрикции - модификации Eco RV, предусматривающий разрушение клеток и последующую хроматографию экстракта белков клеток на фосфоцеллюлозе PII и гидроксипатите, отличающийся тем, что, с целью обеспечения электрофоретической гомогенности препарата, не содержащего интерферирующих примесей ферментов нуклеинового обмена, разрушение клеток ведут в присутствии 5-15%-ного раствора глицерина, хроматографию на фосфоцеллюлозе PII проводят, используя для элюции фермента раствор хлористого натрия с линейным градиентом концентрации от 200 до 800 мМ, а перед очисткой на гидроксилапатите фракции, содержащие фермент с...

Номер патента: 1489182

Опубликовано: 20.10.1995

Авторы: Еляков, Жигалина, Иванова, Михайлов, Рассказов, Федосов

МПК: C12N 1/20, C12N 9/16

Метки: acinetobacter, species, бактерий, продуцент, фосфатазы, штамм, щелочной

1. Штамм бактерий acinetobacter species ВКПМ В 3905 продуцент щелочной фосфатазы.2. Способ получения щелочной фосфатазы, предусматривающий выращивание штамма-продуцента на питательной среде с получением бактериальной биомассы, отделение биомассы от культуральной жидкости с последующим выделением целевого продукта водной экстрацией микробных клеток и двустадийную хроматографическую очистку сырого ферментного препарата, отличающийся тем, что, с целью повышения активности, увеличения выхода целевого продукта и упрощения способа, в качестве продуцента используют штамм бактерий Acinetobacter sp. ВКПМ-3905, а хроматографическую очистку осуществляют сначала ионнообменной хроматографией на анионообменнике, затем гидрофобной хроматографией с...