Способ получения в аморфной форме термически устойчивых комплексов 7-2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(z) метоксииминоацетамидо-3-(1-метил-1-пирролидинио)метил-3 цефем-4-карбоксилата с галогенидами металлов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 80157594 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТ НОЙ ФОРЛЕКСОВ2) -МЕТОК 1-ПИРРОКСИЛАТА тсриеероциклиолучениясов. 7-2 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ В АМОРФ МЕ ТЕРМИЧЕСКИ УСТОЙЧИВЫХ КОМП.7-2-(2-АМИНОТИАЗОЛ-ИЛ)-2-( СИИМИНОАЦЕТАМИДО -3- (1-МЕТИЛЛИДИНИО) МЕТИЛ-ЦЕФЕМ - 4-КАРБО С ГАЛОГЕНИДАМИ МЕТАЛЛОВ (57) Изобретение касается гет ческих веществ, в частности и термически устойчивых комплек Изобретение относится к способу получения в аморфной форме новых термически устойчивых комплексов 7-(2-(2- аминотиазол-ил)-2-(2)-метоксииминоацетамидо 3-3-(1-метил-пирролидинио) - метил-цефем-карбоксилата с галогенидами металлов, являющихся антибиотиками и находящими применение в медицине.Целью изобретения является получение новых форм антибиотиков цефалоспоринового ряда, обладающих повышенной термической стабильностью,1)5 С 07 Э 501/46//А 61 К 31/5(2-аминотиазол-ил)-2-(2)-метоксииминоацетамидо -3-(1-метил-пирролидинио)метил-цефем-карбоксилата (Хс галогенидами металлов - (ИаС 1) ух(СаС 1 ) , где а) Х и 7=1; 2=0; б) У=ОХ=1 - 1,5; 2=0,5-1, которые как антибиотики могут быть использованы в медицине. Цель - создание новых термически более стойких веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией водных растворов с концентрацией 100 -400 мг/мл 7-2-(2-аминотиазол-ил)-2-(2)-метоксииминоацетамидо 1-3-(1-метил-пирролидинио)метил-цефемкарбоксилата с соответствующим молярным количеством МаС 1 или СаС 1 с последующим выделением целевого прод та путем лиофилизации или косольве ного осаждения и, в случае необход мости, сушкой в вакууме. Воду для ходных веществ используют после ст лизации, В этом случае образуются щества, способные при 4 С сохранят активность на 90 Х в течение 1-2 ле 6 табл. 7-2-(2-Аминотиазол-ил)-2-(2)- метоксииминоацетамицо 73-(1-метил- пирролидинио)метил-цефем-карбоксилат (далее цвиттерион). в виде комплекса с галогенидом металла, помимо высокой термической устойчивости, как в виде сухого порошка, так и в виде раствора, при получении растворов в концентрациях, пригодных для инъекций, обеспечивает нейтральные значения рН, и, таким образом, эти растворы могут быть применены для внутримышечных ивнутривенных инъекций без использования буАеров или оснований.Примеры приведенные ниже,иллюстрируют изобретение.5П р и м е р 1, Получение и испытание комплекса цвиттерион:хлорид нат"рия 1: 1.В сосуд, снабженный мешалкой, вносят 800 мл водного раствора, содержа Ощего 250 г цвиттериона, при перемешивании со средней скоростью, добавляют30,41 г хлорида натрия для обеспечения молярного соотношения цвиттерион::хлорид натрия 1:1. Добавляют водудля инъекций, отвечающую требованиямФармакопеи СП 1 А (11 ЯР), до 1 л, Продолжают перемешивать раствор 15 мин, далее - с интервалами 5-10 мин до техпор, пока пробы, отобранные между интервалами при перемешивании, не будутпоказывать существенного количестванерастворенных частиц, Полученныйраствор переносят в автоклав из нержавеющей стали для работы при повышен 25ном давлении. Раствор выпускают иэ автоклава, пользуясь сжатым азотом,через установку со стерилизованнымФильтром, снабженным предфильтром иФильтром для стерилизации, в чистыйстерилизованный сборник. Затем 4 млпорции (1 г активности обусловленнойцвиттерионом) вносят асептически встеклянные колбы 10 мл. После заполнения колбы закрывают пробками, служащими для лиофилизации. Колбы помещают35на лотки дпя лиофилиэации, которыезакладывают в лиоАилизатор, где продукт вымораживают 4 ч при (-30)(-40) С. Затем температуру в присое 40диненном к лиофилизатору конденсаторевыдерживают при (-60) + 3 С и установку для вымораживания выключают. Когдатемпература в конденсаторе достига.ет-50 С, вакуум-насос выключают. Когдауровень вакуума достигает 200 мкПа.,температуру на полке устанавливаютна уровне -1313 С и поддерживают втечение 16-13 ч, Затем доводят температуру на полке до +25 С. Температуру+25+2 С поддерживают 48 ч. Далее лиофилиэатор выключают и вынимают колбы.Продукт - аморфное твердое веществохарактеризуется как комплекс цвиттерион:хлорид натрия 1:1,Вычислено, 7: С 42,34; Н 4,49;И 15,59; Б 11,60; НО(КГ) отсутствие;Ма (сульфатированная зола) 4,27;С 1 6,58. С э Н , М ОгБ С 1 Иа.Найдено (корректирование для воды), 7: С 4196; Н 4,57; И 14,73; Я 12,28; Н О (КГ) 1,80; Иа (сульфатированная эола) 315; С 1 6,85,Никаких существенных различий при инАракрасном анализе между данным продуктом и цвиттерионом не отмечено. Однако определенная по методу дифференциальной сканирующей калориметрии точка разложения была измерена зкзотермически при 197,4 С, что заметно отличается от таковой для цвиттерионао(173,84 С) . Это указывает на то, что данный продукт представляет собой соединение, отличающееся от цвиттериона.Тот же продукт получают добавлением 10-20 объемов изопропанола в сборник, содержащий водный раствор цвиттериона и хлорида натрия, для образования осадка, отделения его с применением вакуумного Аильтрования, промывки осадка изопропанолом и высушивания в высоком вакууме, Продукт получают в сухой Форме.Для оценки широкого спектра активности определяют минимальные ингибирующие концентрации (МИК) данного продукта и цвиттериона по методу двукратного серийного разбавления агара (агар Мюллер-Хинтона). Полученные данные приведены в табл. 1 (Бристоль А И соответствует особому виду микроорганизма) .Приведенные в табл.1 данные указывают на то, что полученный продукт, т.е. комплекс цзиттерион:хлорид натрия 1:1, имеет эквивалентную микробиологическую активность по сравнению с цвиттерионом.Токсичность комплекса цвиттерион: :хлорид натрия 1:1 испытывают на крысах Яра 8 це-Эач 1 еу путем однократного внутривенного введения болюса. 1 Лдля комбинированных данных из 2 исследований составляет 796 мг/кг с 95 -ными лимитами, достоверность между 759 и 832 мк/кг. Эти данные подлежат сравнению с 1 Л , 669 мк/кг и 95 Х-ными лимитами достоверности между 618 и 732 мг/кг для цвиттериона. Ответные кривые были параллельными, однако по эФАективности действия данный продукт был менее токсичен, чем цвиттерион.Стабильность при повышенной температуре определяют после хранения комплекса цвиттерион;хлорид натрия 1:1 и цвиттериона в сухом порошкообразномсостоянии по утрате эффективности действия путем анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (НРЬС). Показатели утраты эффективности действия представлены в табл.2.5 Пределы показывают крайние значения для множества опытов.Стабильность водного раствора комплекса цвиттерион;хлорид натрия 1:1 определяют путем изменения структуры при различных концентрациях после хранения при 25 С в течение установленных периодов времени. Изменение структуры путем разбавления до 250 мг/мл (номинально) проводят стерильной водой для инъекций, отвечающей требованиям Фармакопеи США ЙБР). Для последующего разбавления используют 0,9 Х-ный раствор хлорида натрия. 20 Данные представлены в табл.З. Пределы показывают крайние значения для множества опытов.Данные табл. 3 свидетельствуют об 25удовлетворительной стабильности водного раствора комплекса цвиттерион::ИаС 1 1:1 по меньшей мере в течение24 ч при 25 С (комнатная температура).П р и м е р 2, Получение и испытание комплекса из цвиттериона и хлорида кальция,4,6 г цвиттериона растворяют в14 мл воды для инъекций, содержащей950 мг хлорида кальция (1 мол,-экв),Полученный раствор пропускают через 0,22 мк стерильный фильтр,Фильтрат добавляют при асептическихусловиях и быстром перемешивании синтервалом 5 мин к 400 млабсолютного 40этанола. Образуется аморфный осадок.Смесь взмучивают в течение 0,5 ч.Твердое вещество отделяют вакуумФипьтрованием и промывают 40 мл этанола, который добавляют к Фильтрату 45(обозначен как Фильтрат А)Твердое вещество, влажное от этанола, взмучивают в 100 мл абсолютногоэтанола 0,5 ч. Полученное аморфноетвердое вещество отделяют вакуумнымФильтрованием, промывают 20 мл этанола, 50 мп эфира, затем высушивают ввысоком вакууме при 50 С 4 ч, что дает 2,2 г продукта, содержащего цвиттерион и хлорид кальция в молярномсоотношении 2:1,Вычислено, Е: С 42,56; Н 4,51;И 15,68; Б 11,96; С 1 6,6; Са (в видезолы) 3 73 1575942С,9 НгеИ 6 ОЮБг(С 1 гСа)о кНайдено, Е: С 38,4; Н 4,85;И 13,76; Б 8,82; С 1 5,44; Са (в видезолы) 3,59; НгО .(КР) 7,79 .Найдено (сухое основание), Ж:С 41,65; И 14,92; Б 9,57; С 1 5,9, Са(в виде эолы) 3,89.Фильтрат А концентрируют в вакуумепри 35 С до 30 мл, Получают весьмаплотные, сходные с кубической Формбймикрочастицы, показывающие отсутствиедвойного преломления,Плотные твердые частицы веществаотделяют вакуумным Фильтрованием, про"мывают 15 мл абсолютного этанола, за"тем 20 мл эфира и высушивают, что дает 2,0 г аморфного твердого продукта,представляющего собой цвиттерион схлоридом кальция в молярном соотношении 1,5:1 (сескви-цвиттерион)Вычислено, Е: С 41,1; Н 4,5;И 14,7; Б 10,8; С 1 8,33, Са.(в видезолы) 4,8.(СН гИОБ Д,СаС 1Найдено, Ж: С 37,35; Н 5,17;И 12,37; Б 10,24; С 1 7,84; Са (в видезолы) 4,47; НгО (КР) 3,24 3 этанол0,5 моль.Найдено (Н гО и основание, не содержащее этанол), Е: С 40,01; Н 4,88;И 13,3; Б 10,57; С 1 8,3; Са (в видезолы) 4,7.Растворимые и нерастворимые в этаноле комплексы не показывают существенного отличия по данным высокоэФФективной жидкостной хроматографии(НРЬС) и ультрафиолетовых спектровот цвиттериона.Для оценки широкого спектра активности данного продукта определяют минимальные ингибирующие концентрации(ИИК) для продукта цвиттерион:хлоридкальция при молярном соотношении1,5: 1 и цвиттериона по методу двукратного серийного разбавления агара(агар Мюллер-Хинтона), Полученные данные представлены в табл,4, где особыевиды микроорганизмов отмечены какБристоль А М:Стабильности при повышенной температуре определяют после хранения продукта цвиттерион:хлорид кальция примолярном соотношении 1,5:1 и цвиттериона в сухой порошкообразной Формепо утрате потенциальных свойств методом высокоэФФективной жидкостной хроматографии (НРЬС). Утрата потенциальных свойств показана в табл,5, где,Л- сн,-я (васг)ц (сас 1,)ОСБзВ где Х и 7=1;Е=О г=0 1 Х=11,5; Е=0,5 1, пределы указывают крайние значениядля множества опытов.П р и м е р 3. Изучение термической стабильности,Получают лиофилизированные компози 5ции из цвиттериона и хлорида натрияили хлорида кальция и определяют ихстабильность при различных температурах. В табл. б показаны значения остаОточной активности по данным анализатаких композиций методом высокоэффективной жидкостной хроматографии(НР 1 С),15Комплекс цвиттерион:хлорид натрия1:1 пригоден для фармацевтическогоприменения, обладает широким спектромдействий, свойственным антибиотику,и в значительной степени равен таковому у цвиттериона, Как видно из проведен ных испытаний, данный комплекс имеет20удовлетворительную стабильность врастворе, по меньшей степени равную24 ч при 25 С (при концентрации250 мг/мл цвиттериона в стерильной 25воде существует менее чем 107-наяутрата активности, определяемая анализом по методу высокоэффективной жидкостной хроматографии) . В отличие отцвиттериона имеет удовлетворительнуюстабильность при повышенной температуре для сухой порошкообразной формы(около 103-ной утраты после 4-недельоного хранения при 45 С), что определе-но путем высокоэффективной жидкост 35ной хроматографии (НР 1.С), и исключительнунь стабильность для формы в видесухого порошка при обычных для холодильника температурах (утрата отсутствует при 6-месячном хранении при 4 С) 40во время всего 24-часового периода,после которого упомянутый выше комплекс изменяет структуру, обеспечиваяпригодную для инъекций композицию(т.е. после изменения структуры дообеспечения концентрации, пригоднойдля инъекции). Композицию, пригодную для инъекции, поддерживают при удов- летворительном значении рН, т.е. в пределах от 4,2 до 6,2, без применения буферов или оснований, Упомянутый выше комплекс менее токсичен, чем цвиттерион.Рассматриваемые композиции переводят в композиции, пригодные для инъекции, путем разбавления стерильной вондои и/или физиологическим раствором для обеспечения композиций с активностью цвиттериона, базирующейся на концентрации в пределах от 1 до 400 мг/мл, как определено анализом по методу высокоэффективной жидкостной хроматограф ( Р 1.С), предпочтительно в пределах фии (НРот 2,5 до 250 мг/мл. Разбавление до 2500 мг/мл целесообразно проводить, используя стерильную воду для инъекции, отвечающую требованиям Фармакопеи С 1 ЦА (цВР)(1 БР), а если понадобится дальнейшее разбавление, то берут 0 97-ныйО вы и раствор хлорида натрия по. 11 ЯР. Для внутримьпдечного или внутривенного введения с лечебной целью взрослому человеку общую суточную дозировку в пределах от 750 до 3000 мг разделяют на достаточные дозировки. Композиции транспортируют и хранят в сухом состоянии в условиях обычного холодильника (например при 4 С), причем они должны оставаться активными более чем на 903 в течение по меньшей мере 1-2 лет. Такие композиции легко превратить в композиции, пригодные для инъекции,Формула изобретения Способ получения в аморфной форме термически устойчивых комплексов 7-2-(2-аминотиазол-ил)-2-(Е) -метоксииминоацетамидо 1-3-(1-метил-пирролидинио)метил-цефем-карбоксилата с галогенидами металлов общей формулы о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, в стерилизованной воде растворяют7-2-(2-аминотиазол-ил)-2-(Е)-метоксииминоацетамидо 3-3-(1-метил-пирролидинис)метил-цефем-карбоксилат с получением его концентрации 1001575942 10 или косольвентного осаждения с последующей, в случае необходимости, сушкой в вакууме. Т а б л и ц а 1 Значения МИК (мг/мл) Микроорганизм Цвиттерион Комплекс. цвиттерион:МаС 1 1:1 БристольА И Таблица 2 Стабильность сухого продукта Потеря эффективности, 7 Комплекс цвиттерион:МаС 1 1:1 Цвиттерион 0-14Отсутствие1-543,06-1079-12,96,012,55-18, 05,68,310,712162012,7-23,021,734,092 25 34,1 71 45,634,4 46,2 55,2 100 70 100 40 мг/мл и соответствующее молярноеколичество хлористого натрия или хлористого кальция и из раствора выделяют целевой продукт путем лиофилизации 1. Б.рпецщопхае2. Б.руонепезе3. Б.йаеса 1 ь.в4. Б. ацгецз5. Б ацгецз /+507. вегцщ6. Б.ацгецз /Реп.Кев7. Б.ацгецв/щего. Кев. 28 С8. Е.со 1 х9. Е.ецио10. К. рпецщоп.ае11. К, рпецщоп 1 ае12. Е.с 1 оасае13. Е,с 1 оасае14. Р.щ 1 гаЪ 3.1 ы15. Р.ю 1 даг 1 з16. М.щог 8 ап 3.д17. Р.геТгдегх18. Б.щагсезеепв19. Р.Б.аегцддпова99, 5-100, 199,3-99,495,2-97,0 100,0 99,6-100,0 96,2-96,8 Т а б л и ц а 4Значения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) (мг/мл) Микроорганизм БристольА И Цвиттерион Цвиттерионф :СаС 1, молярное соотноше-,ние 1,5:1 Концентрация, Время, ч Остаток, % мг/мл 0 3 6 24 О 3 6 24 0 3 б 24 0 3 6 24 1, Б. рпецшоп 1 ае2, Б. руо епея3. Б.Ьаеса 11 в4. Б.ацгеця5. Б.ацгецв/+507 Бегцш6. Б.ацгеця /Реп.-Кея.7. Б.ацгеця/(МЕТН.-КЕБ.128 С)8. Е,со 119. Е.со 1110. К.Рпецшоп 1 ае11. К.Рпецшоп 1 ае12. Е,с 1 оасае13, Е.с 1 оасае14. Р.шдгаЬ 111 я15. Р,чц 1 яаг 1 я16. М. шогдап 1117. Р.гегдегь.18. Б.шагсеясепв19. Р.аегця 1 пова20, Р.аегцд 1 пова/СагЬ. йея. и 5,04-5,22 5,03-5,24 5,03-5,24 5,14-5,39 5,0-5, 17 5,07-5,3 1 5,06-5,31 5,30-5,60 4,94-5,12 5,05-5,34 5, 11-5,47 5,44-5,78 5,00-5,19 5,28-5,66 547-5,92 5,87-6, 18 А 9585А 9604А 20688А 9537А 9537А 9606А 20699А 15119А 20341 А 9664А 20468А 9659А 9656А 9900А 21559А 15153А 22424А 20019А 9843 аА 21628 0,060,0161610,511250,0160,030,0310,0160,130,0080,030,0080,030,030,52 0,0160 91610,53630,0160,0160,0310,0160,250,0080,030,0080,030,016921575942 13 14 Таблица 5 Стабильность сухого продукта Потеря свойств, % Температ а оС Время хранения Цвитте Цвиттерион:СаС 1,рион молярное соотноше ние 1,5:1 37 45 3,50,4-03,2-5,7 34,1 7149,6 0-5,3 1,7-6,6 13,756 34,4 46,2 55,2 100 2,2-6,5 20-30,0 100 Т а б л и ц а бРецептуры и процент остаточной активности Время/температура Цвиттерион/ /ИаС 1 1:1рН 4,9, остаточная активность, Е Цвиттерион, рН 5,1, остаточная ак тивность, Е Цвиттерион:70 79 39 69 П р и м е ч а н и е. н - недели, д - дни. Составитель З.ЛатыповаРедактор А.Маковская Техред М.Дидык Корректор И. Муска Заказ 1793 Тираж 325 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 1 д - 70 С 3 д - 70 ОСн - 56 ОС 2 н - 56 С 4 нС 8 нС 1 нС 2 нС 4 н - 45 ОС 8 нС 13 нС 4 нС 8 н - 37 С 13 н - 37 ОС 13 нС 2 мес 1 нед 2 нед 4 нед 1 нед 2 нед 4 нед 1 день 2 дня 3 дня 1 день 85,2 76,6 81,9 73,9 67,7 55,9 91,787,5 84,2 76,2 67,4 90,4 85,4 80,9 93,7 94,2 88,8 92,3 86,9 84,4 79,0 96,2 93,0 92,9 88,9 86,3 95,2 93,5 91,1 96,4 88,7 80,7 86,6 78,4 71,5 62,5 94,3 89,2 85,8 80,4 75,3 92,0 87,3 85,8 95,6