Способ получения замещенных андроста-1, 4-диен-3, 17-дионов

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИРЕОЪБЛИН 207.7 Д 100ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ПАТЕНТУ ности кста,4 ению замещенных андро 3,17-дионов формулы 1о О о(72) Франко Буззетти, НаталеБарбугьян, Паоло Ломбардии Энрико ди Салле (1 Т)(56) Патент США Мф 4322416,кл, 424-242, 1975.Патент Великобритании Р 929985,кл. 2 (ЗС), 1968,Рингольд Г.Дж. и др. Химия и прмышленность, 1962, с 211.(57) Изобретение относится к производным природных стероидов, в частгде Н 1 -Н или С"С -алкил, которые проявляют сильное йнгибируюцее действие на ароматозу в лабораторных условиях и высокую активность. в живом организме. Цель изобретения - выявление новых более активных соедине" Я ний. Получение их ведут дегидрогени"зацией соответствующего 1,2-дигидропроизводного соединения формулы 1 с помощью агента дегидрогенизации в органическом растворителе при темпе- Я ратуре кипения с обратным холодильником. 1 табл,Изобретение относится к способуполучения новых замещенных андроста,4-диен,17-дионов, а именно6-.алкилиденандроста,4-диен,17-дионов общей формулы (1): 010 где К- водород или С лкил,81,25; Н 8,44. андроста,4 Предлагаемые соединения проявляютсильное ингибирующее действие на 20ароматазу в лабораторных условияхи обладают исключительно высокойэффективностью действия в живом организме благодаря своей более высокойметаболической стабильности по сравнению с известными соединениями ана";логичной структуры.П р и м е р 10,50 г 6-метиленандроста-ен,17-диона и 0,57 гдихлорцианобензохинона (ДДХ) подвергают дефлегмации в 20 мл безводногодиоксана в течение примерно 15 ч.Для того чтобы удалить ДДХ, суспензиюфильтруют через окись алюминия. После выпаривания растворителя остатокрастворяют в этилацетате, органический слой промывают водой, сушат надсульфатом натрия и растворительудаляют под вакуумом. Неочищенныйпродукт подвергают хроматографии на 40силикагеле, используя смесь гексан/этил ацетат 40% с тем, чтобы получитьв результате 0,25 г чистого 6-метиленандроста,4-диен,17-диона,температура т,пл, 188-191 С, Д макс.247 мр( Е 13,750) .Найдено, %: С 81,01; Н 8,05,СНО,Вычислено, %: С 81,04; Н 8,16,В соответствии с описанной процедурой были получены следующие соединения.1-Метил-б-метиленандроста4 ЬН 8,44 а,4 П р и м е р 3. Раствор диметиллития меди получают в атмосфере аэта при помощи добавления 1,6 М раствора в простом эфире метил лития вшлам иодида одновалентной меди вобезводном простом эфире при 0 С,Раствор перемешивают при ООС в течение 20 мин, а затем в течение 20 ми Найдено, %; С 81,32; Н 8,62.СцН,;О,Вычислено, %; С 81,44; Н 8,70,4-Метил-б-метиленандроста,4 диен,27-дион.Найдено, %: С 81,15; Н 8,32С НаьОВычислено, %: С 81,25; Н 8,44.П р и м е р 2. Смесь 6-метиленандроста-ен-З, 17-диона (0,50 г),двуокиси селена (0,50 г) и трет-бутилового спирта (200 мл) нагреваютдо температуры дефлегмации в атмосфере азота в течение примерно 30 ч.Охлажденный раствор фильтруют, азатем выпаривают до сухого состоянияпри пониженном давлении. Остаток переносят в этил ацетат (100 мл), обрабатывают древесным углем и промывают последовательно водой, раствором сульфида аммония, холодным 1%раствором гидрата аммония, холоднойразбавленной хлористоводородной кислотой, водой, сушат с сульфатом натрия и наконец выпаривают до сухогосостояния. Неочищенный продукт подвергают хроматографии в соответствиис описанием приведенным в примерев результате чего получают 0,20 гчистого б-метиленандроста,4-диен,17-диона, температура т.пл. 188191 С,Следуя той жепроцедуре получалиследующие соединения.1-Метил-б-метиленандроста,4-диен,17-дион.Найдено, %: С 81,16; Н 8,37.С.,Н,10,Вычислено, %: С 81,25;1-этил-метиленандрост35 144207добавляют 54-андрост-ен,17-дионв безводном тетрагидрофуране и перемешивают еще в течение ЗО мин. Смесьсливают в насыщенный водный раствор5хлорида аммония, затем добавляютбензол и полученную в результатесмесь быстро фильтруют через гиатомовую землю. Органический слой промывают водным раствором хлорида аммония, водой, сушат над сульфатоммагния и выпаривают до сухого состояния, Остаток подвергают хроматографии на силикагеле, используя смесьгексан-этил ацетат 10-20 , в результате чего получают 1 р-метило-андроста,17-дион,ИК (КВг): 17 10 см(3-оксо);1740 см (17-оксо),В раствор 1 р-метилК-андроста-3,17-диона (3,025 г 10 ммоль) вледяной уксусной кислоте (100 мл)опо каплям при 20-25 С при энергичномперемешивании добавляют раствор брома (1,60 г, 10 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (30 мл), содержащейодну каплю 47 раствора НВг. Бромрасходуется в течение 20 мин..Полученный раствор сливают вводу и полученный в результате осадок собирают, тщательно промываютводой и сушат под вакуумом, в результате чего получают 3,82 г (100 )неочищенного 4-бром-метил-о(-андроста,17-диона.ИК (КВг): 1740 см (З-оксо,17-оксо).Раствор неочищенного соединенияброма, полученного в соответствиис описанием, в диметилформамиде 40(100 мл) перемешивают с высушеннымохлоридом лития (7 г) при 140-150 С,После охлаждения раствор сливают вводу и полученный в результате маслянистый продукт экстрагируют с ис 45пользованием простого эфира. Оргагический слой промывают 10 -нымфраствором хлористоводородной кислотыи водой сушат, а затем выпариваютпод вакуумом. Остаток подвергаютхроматографии на силикагеле, используя смесь гексан-этил ацетат 10-30 ,в результате чего получают 2,4 г(80 ) 1-р-метил-андрост-ен,17 диона. 55ИК (КВг) 1620 (3 ); 1660 (3 ОКСО); 1735 см(17-оксо).Смесь ацетата натрия (1 г), аб"солютного хлороформа (30 мл), Форм" 74алъдегида-диэтилацеталя (30 мл,0,24 моль), Фосфорил хлорида (3,8 мл,0,04 моль) и 1 р-метил-андрост-ен,17-диона (0,811 г, 2,7 моль)перемешивают при температуре дефлегмации в течение примерно 7 ч, т,е.до тех пор, пока не исчезнет исходный материал, Суспензии дают возможность охладиться и при энергичномперемешивании по каплям добавляют насыщенный раствор карбоната натриядо тех пор, пока рН водного слоя нестанет щелочным (примерно 1 ч). Органический слой отделяют, нейтрализуютводой и сушат при помощи сульфатанатрия. После концентрации при пониженном давлении маслянистый остатокподвергают хроматографии на силикагеле, используя смесь гексан-этилацетат в качестве элюента. Такимобразом получают чистый 1 р-метил-метиленандрост-ен,17-дион с 60 выходом (0,195 г).ИК (КВг): 3100 (6 = СН ); 1735(17-оксо); 1680 (3-оксо); 1630,1660 см(дф и 6 = СН),П р и и е р 4, Раствор андрост-ен,17-диона в трет-бутаноленагревают до кипения и в кипящийраствор добавляют трет-бутилат калияв трет-бутаноле, Затеи медленнодобавляют метил хлорид в трет-бутаноле. Раствор охлаждают, подкисляютконцентрированной хлористоводороднойкислотой и разбавляют водой. Избытоктрет-бутанола удаляют под вакуумоми водный слой экстрагируют этилацетатом. Соединенные экстракты промывают водой, сушат над сульфатоммагния и выпаривают под вакуумом.Остаток подвергают хроматографиина силикагеле и элюируют смесью гексан-этилацетат. Элюент выпаривают иостаток кристаллизуют из простогоэфира, в результате чего получают4-метиландрост-ен-З, 17-дионИК (КВг): 1735 (17-оксо), 1660(З-оксо), 1620 см- (дф),В качестве альтернативы смесьандрост-ен-З, 17-диона, тиофенола,40 -ного водного раствора Формальдегида, триэтиламина и этанола нагревают до температуры дифлегмациив течение примерно 48 ч, Охлажденньбраствор сливают в водный растворгидрата окиси натрия, а продукт изолируют при помощи экстрагированияпростым эфиром. Эфирные экстракты5 144промывают водой и сушат над сульфатом магния. Полученный в результате,остаток растирают с гексаном с тем,чтобы удалить любые побочные продукты конденсации, образовавшиеся иэтиофенола и формальдегида. 4-Фенилтиометиландрост-ен,17-дион, полученный таким образом, подвергаютдесульфуризации при помощи растворения в ацетоне и добавления в суспензию Никеля Ренея в кипящем ацетоне. Смесь подвергают дефлегмациив течение примерно 5 ч при перемешивании. Горячий раствор фильтруюти катализатор промывают кипящим этанолом и водой, Соединенные фильтрыподвергают концентрированию под вакуумом, при этом продукт отделяютв виде твердой массы, В результатерекристаллизации из смеси ацетонгексан получают 4-метилен-дрост-ен,17-дион,Смесь ацетата натрия (1 г), абсолютного хлороформа (30 мл), диэтилацеталь формальдегида (30 мл,0,24 моль), фосфорил хлорида (3,8 мл,0,04 моль) и 4-метил-андрост-ен 3,17-диона (0,81 г 2,7 ммоль подвергают дефлегмации в течение примерно 7 ч, т.е, до того момента, покане прореагирует весь исходный материал, Суспензии давали возможность охладиться и при энергичном перемешивании по каплям добавляют насыщенныйраствор карбоната натрия до тех пор,пока рН водного слоя не станет щелочным (примерно 1 ч). Органическийслой отделяют, нейтрализуют водойи сушат над сульфатом натрия. В результате концентрирования,при пониженном давлении получают маслянистыйостаток, который подвергают хроматографии на силикагеле, используя смесьгексанэтил ацетат в качестве элюента,Таким образом получают чистый4-метил-б-метиленандрост-,4-ен,17-дион с выходом 601,ОК (КВг): 3080 (6-СН), 1735(17-оксо), 1665 (З-оксо), 1635,1595 см( д ф= 6 = СН),П р и м е р 5. Таблетки, каждуювесом 0,150 г и содержащую 25 мгактивного материала, получают следующим образом,1Состав (для 10 000 таблеток), г:6-Иетиленандроста,4-диен-З, 17-дион 250Лактоза 800 2077 6Кукурузный крахмал 415Порошкообразныйтальк ЗОСтеарат магния 5Перемешивают б-метиленадроста,4-диен,17-дион, лактозу и половинуколичества кукурузного крахмала, затем смесь просеивают через сито с 10 размером отверстий 0,5 мм. Кукурузный крахмал (10 г) суспендируют втеплую воду (90 мл) и полученную врезультате пасту используют для гранулирования порошка. Гранулят сушат,просеивают через сито с размером отверстий 1,4 Ъм, затем добавляютостаточное количество крахмала, тальки стеарат магния, все это тщательноперемешивают и прессуют в таблетки.20 П р и м е р 6. Капсулы, каждаяиз которых содержит дозу 0,200 г и20 мг активного материала, получаютследующим образом.Состав для 500 капсул, г: 25 6-Иетиленандроста.,4 диен, 17-дион 10Лактоза 80Кукурузный крахмал 5Стеарат магния 5 30 Эту композицию помещают в желатиновые капсулы, состоящие из двухполовин, каждая капсула содержитдозу в 0,200 г.Ингибирование ароматазы при помо- Б щи предлагаемых соединений (испытывалось как п прего (ароматазаплаценты человека) так и дп чиччо(внутренний код Р СЕ 24304) и 1-метил-б-метиленандроста,4-диен,17 диона (внутренний код Р СЕ 25027) 45 сравнивали с аКтивностью хорошо известных ингибиторов ароматазы: 4-окси-андрост-ен,17-диона (4 ОН-А),.д 1- тестололактона и андроста,4-диен-З, 17-диьна.50 6-Иетилен-андрост-ен,17-дионабыл предложен в качестве эффективного промежуточного соединения приполучении ценного с терапевтическойточки зрения бо(-метилового стероид ного гормона, однако какой-либо терапевтической ценности самого соединения не было отмечено.А. Ингибирование ароматазы в лабораторных условиях п ч 1 сго.74Ферментную систему изолировали измикросомальной Фракции ткани человеческой плаценты в соответствии состандартным приемом. Использовалианалитический метод Томпсона и Сиитери.(с тем, чтобы определить скоростьароматизации, в соответствии с которым определяют высвобождение З Н О5из 4-(1 р, 2 Р - Н) андростен,17-диона. Все стадии инкубации осущест/ вляли в водяной бане при встряхиваниии 37 С на воздухе в буфере 1 О мм фосфата калия, рН 7,5, который содержал100 мм КС 1, 1 мИ ЭДК и 1 мМ дитиотрейтола.Эксперименты проводили в 1 млобъема инкубации, содержащем 50 нИ4-(Н) андростендиона, различные концентрации ингибиторов, 100 мИ Н АДРНи 0,05 мг микросомальных протеинов.Через 15 мин инкубации реакцию прекращали при помощи добавления хлороФорма (5 мл). После центрифугированиясо скоростью 1500в течение 5 минотдельные порции (0,5 мл) извлекалииз водной фазы с целью определенияконцентрации образовавшейся Н О.Концентрацию каждого соединения,необходимую для уменьшения ингибируемой ароматазы на 503 (ИКу,), опреф деляли при помощи построения графикав координатах ингибирования в процентах и 1 оя концентрации ингибитора. Относительную активность каждогосоединения к 4 ОН-А вычисляли в соответствии с соотношением: 42077 росомы извлекали иэ яичников и ихактивность ароматазы определяли.сиспользованием приема, аналогичноготому, что был описан в А.Инкубацию осуществляли в течение30 мин в 2 мл объема инкубации, содержащем 0,1 мг микросомальньм протеинов, 100 нИ 4-(Ч) аидростендиона10 и 100 мМ И АДРН, Ингибирование впроцентах активности контролируемой.ароматазы рассчитывали на основеполУченных данных согласно таблице.Новые соединения под кодом15 Р СЕ 24304 и РСЕ 25027 являются оченьсильнйми ингибиторами ароматазы.В оральных испытаниях 1 п чтоновые соединения были очень эффективными, что являлось следствием20 его уникальной стойкости относительно апатического обмена веществ в товремя, как соединение 4-ОН-А оказывалось неэффективным,Острая токсичность (ЛД 5 ) предлагаемых соединений, при применении кмьппам, определенная в результатеразового применения возрастающихдоз и измеренная на седьмой день после применения, оказалась пренебрежиЗ 0 мо малой, Например, значение ЛПдля предлагаемых соединений Р СЕ24304 и Р СЕ 25027 вьппе, чем800 мг/кг при оральном применениина мышах.Формула изобретения,1. Способ получения замещенных 40 Б, Ингибирование ароматазы в живом организме (на крысах) (хп чиччо),Взрослых самок крысы дважды обрабатывали подкожным способом при помощи 100 м,е. гонадотропного гормона сыворотки беременных лошадей (ГСБЛ) с интервалом в 4 дня с тем, чтобы увеличить активность ароматазы яич- Б 0 ников в соответствии с процедурой, описанноц. А.И,Г,Броди и др., ЯйегоЫз. О второй обработки пам по 6 животных бб атическич спосо 5 Х метосел) или ации 30 мг/кг.устя 24 ч, микСНзгде Р. имеет указанные значения, с помощью агента дегидрогенизации в органическом растворителе при температу 1 е кипения с обратным холодильником. ИК для 4 ОН-АОтносительная 5 пактивностьИК испытываемогосоединения Через 3 дня послпри помощи ГСБЛ грув каждой давали стомбом растворитель (Оингибитор в концентЖивотных усыпляли с андроста,4-диен,17-дионов общейформулы где К - водород или С -С -алкил, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что осуществляют дегидрогенизацию соеди-, нения общей формулы(1 п ч 1 чо) Соединение ИК , Относительнм ная активность 4-0 кси-андрост-ен, 17-дион (4-ОН-А) 44 (1,00) поопределению Неактивный е -Тестололактон(1,52) Составитель И. ФедосееваТехред А.Кравчук Корректор С. Ыекмар Редактор А. Долинич Тирак 348 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР. по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Рауаская наб., д. 4/5