Способ получения вещества, обладающего утеротоническим действием

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(71) Институт химии Башкирского научного центра Уральского отделения АН СССР (72) Г,А,Толстиков, Л.А.Балтина, Ю,И,Муринов, М.Ю.Саитова, Ж.М.Путиева, Н.К,Абубакиров, М,Э,Адлер и Ф,С,Зарудий(56) ЯоЬегсз Я.М., Яссепвап Р, СЬев 1 зсгу, Восйевзсгу апб РЬагвасо 1 одса 1 Ассв 1 су оГ РгозсапоЫз. Кем УогЕ Регвадоп Ргезз, 1979,Атжихин И,С, Простагландины. М.: Медицина, 1978, 415 с.Ягапсау СМоча 8,1, ЯупсЬезз о 1 Ргозсад 1 апб 1 пз. Вубарезс, А 1 абев 1 а Кабо, 1978.Вепдег МКовЦава, Сус 1 обехсг 1 п СЬев 1 зсгу. Яре 1 пдег - Чег 1 ад Вег 1 и, Небе 1 Ьегд, Меа УогК 1978,Яе)се 1.1, Сус 1 обехсгп апб спег пс 1 цз 1 оп Согпр 1 ехез. Аалева К 1 або, Вцбарезс, 1982.1 пс 1 цзопСовроцпбз. Ч. 3, РЬуз 1 са 1 Ргорегс 1 ез апб Арр 11 сасопз, Еб, Амооб ЗЛ., Рач 1 з 4.Е.ОМасйсо О.О. Асабевс Ргезз, 1 опбоп, Ог 1 апбо, Кебич Уой, 1984,Путиева Ж,ММжельская Л.ГКондратенко Е.С. Абубакиров Н.К. Тритерпеновые гликозиды АсапйорЬу 1 цв ОурзорЫ 1 обез. - Хим. Прир. соед, 1970, й. 4, с. 486-487,.Путиева Ж.М., Мжельская Л.Г., Горобиц Т.Т., Кондратенко Е.С. Тритерпеновые гликозиды АсапйорЬуПцв дурзорЫ 1 обез. И 1, Строение О-гликозидной углеводной цепи акантофиллозидов В и С, - Хим. прир. саед.1975, К. 2, с, 177-183,Путиева Ж,ММжельская Л,ГГоробиц Т,Т., Кондратенко Е.С., Абубакиров Н.К, Тритерпеновые гликозиды АсапйорЬуИцв ОурзорЫ 1 оЫез; 1 Ч, Строение акантофилло 1, .Щ 1768592 А 1(51)5 С 07 С 405/00, С 07 3 71/00 зидов В и С. - Хим, прир, саед, 1975, % 6, с,728-734,Путиева Ж.М., Мжельская Л.Г ГоробицТ.Т., Кондратенко Е.С.; Абубакиров Н,К, Тритерпеновые гликозиды АсапсйорЬу 1 цвОурзорЫ 1 обез Ч. Д - хиновоза в акантофиллозидах В и С, - хим. прир. соед, 1977, М 6, с.806-809.Путиева Ж.М., ГоробицТ.Т., Кондратенко Е,С., Абубакиров Н,К. Тритерпеновыегликозиды АсапйорйуИцв Оурзорй 1 оЫез,Ч 1. Строение акантофиллозида Д. - Хим.прир. соед., 1979, Йг 2, с. 176-180,Авторское свидетельство СССРВ 1702642, кл. С 07 С 405/00, 1989.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО УТЕРОТОНИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ(57) Изобретение касается простагландинсодержащих вещес гв, в частности веществана основе 3-цис-оксо 13-транса -окси 17 (2-фурил)1 8,19,20-тринор-а -гомопростеновой кислоты, обработанной сапониномо ф.мыльного корня АсапФорйу 1 цвОурзорЫ 1 обез Вд 1, обладающей утеротонической активностью. Цель - повышение активности и устойчивости вещества, Синтез 4ведут обработкой раствора простагландина в (Ьзтаноле раствором сапонина мыльного корня ОфАсапйорйуИцв бурзорЫ 1 о 1 без йдвдиметил- (Ясульфоксиде при массовом соотношении 4:1,перемешивании при комнатной температуре,Соединение проявляет изотопный эффект в1,5-2 раза выше, чем укаэанная кислота приэффективной дозе 23 мг/кг, что в 2 раза ниже, 4 фчем у кислоты, 2 табл,паюВМзобрете гие относится к области органической химии, о частности к способу получения вещества, обладающего уретротонической активностью на примере синтетического аналога 11-дезокси-П ГЕ3-цит-оксо-транс- а- окси-фурил). В,19,20-т ри 1 гор-П ГЕ ьОсновным недостатком простэгландинооых препаратов.является быстрый метаболизм о жйвьЫтканлх, что огрэичиоает их применение о медицине.С Целью повышения ус 1 ойчиоости простагладийдвых поепаратов их модифицируот, получая различные синтетические аналоги или применяют о виде более устойчивых лекарственных форм, в часгносги, комплексов включения с циклодекстрпнами (цд)Применение синтетических модифицированных аналогов ограничиоаетсл их высокой токсичностью и церастворимостыо в водных средах, а также малой стабильностью.Ограничения второго пути использооанил простагландинов в медицине путем клатратообразованил с циклодекстринами связаны с оглсокой токсичностью последних, вследствие чего возможно только оральное, ректальное и наружное применение комплексов включения ЦД, Комплексообразование с ЦД не приводит к повышению биологической активности простагландинов, способ не дает возможность сйизить эффективную дозу простагландиновых препаратов,Целью изобретения является изыска ние йового способа повышения устойчивостииростагландиновых препаратов с одновременным повышением утеротонической активности и снижением эффективной дозы,Цель дос гигается тем, что аналог простагладина в растворе этанола обрабатывают сапонином мыльного корня (АсапйорЬу 11 цщ цурзорЫо без В 9 - (акантофиллозид) о диметилсульфоксиде при массовом соотношении 1;4 и комнатной температуре,Сущность способа заключается о том, что используемый аналог ПГ, 3-цис-оксо- транс-а-окси(2-фурил)-18,19,20-тринор-ПГЕ 1 в растворе этанола обрабатывают сапонином из мыльного корня, растворенным в диметилсульфоксиде, при весовом соотношении реагентов 1:4 при комнатной температуре, получая новуо лекарственную форму ПГ о виде комплексных соединений с акантофиллозидом.Для достижения рабочей концентрации ПГ смесь разбавляется фосфатным буфером.Получение сапонина (акантофиллозида) из мыльного корня (Асап 11 ор 1 у 1 ца 9 урзорЫ 1 осез 191,),1,0 кг воздушно-сухих измельченных 5 корней заливают 3,5 л метанола и экстрагируют 2 часа при 70 С, Делают 10 сливов, Сапонин, выпавший из экстракта при остываыии, отделяют фильтрованием на воронке Бюхнера или Шотта, маточник убирают, а 10 осадок промывают ацетоном (100 мл х 2) ивысушивают при комнатной температуре, , заточник концентрируют на роторном испарителе при 40 С до 1/2 обьема, выпавший осадок обрабатывают аналогично. 15 Вторичный маточник снова упаривают в тех же условиях до 1/2 - 1/3 объема и повторяют операцию обработки осадка,Биологические испытания ПГ в видекомплексов с сапонином из мыльного корня 20 были проведены в лаборатории новых лекарственных средств Института химии БНЦ УрО АН СССР, Обнаружен эффект йовышенил утеротропной активности йсходного ПГ при использовании его в виде новой лекар ственной формы с сапонином из мыльного корил,С 02 Н ОН (1)Утеротоническую активность 1 (1) в виде новой лекарственной формы изучали пометоду магнуса (и атго) на изолированной35 матке крыс и морских свинок в концентрации 1,10 г/мл, а также методом 1 п зси нанаркотизированных-беременных и небеременных морских свинках при внутриоенномвведении о дозах 10, 50 и 100 мкг/кг. Об40 утеротонической активности судили по изменению амплитуды и тонуса маточных сокращений в процентах к исходнойамплитуде,В качестве референс-препаратов ис 45 пользовали синтетический ПГв фосфатном буфере (Ыа - соль) и известныйутеростимулирующий препарат - и ростенон (ПГЕ 2, Таллинн), применяемый о акушерско-гинекологической практике для50 родостимулирования, а также комплекс ПГс 3 -глицирризиновой кислотой,Острую токсичность определяли по Литчфильду и Уилкоксону на белых беспородных мышах при внутривенном введении.55 В результате изучения утеротаническойактивности ПГв комплексе с сапониноми ПГ в буфере методами 1 п Маго и 1 п зш быловыявлено, что сапонин повышает утеростимулирующий эффект простагландина, Так, вопытах на изолированной матке крыс и мор1768592 ских свинок ПГв буфере увеличивает амплитуду сокращений на 76,8-.85%, а в комплексе с сапонином тот же ПГ вызывает инотропный эффект на 128 - 150%, т.е. сапонин увеличивает инотропный эффект ПГ в 1,5-2 раза. Простенон в том же разведении повышает СДМ крыс и морских свинок на 55,8-83,8%, соответственно (табл. 1),Как видно из данных табл. 1, синтетический простагландинв виде комплекса с сапонином из мыльного корня обладает более выраженной утеротропной активностью (изменение амплитуды и тонуса матки) и чго как на крысах, так и на морских свинках при равной концентрации (1 х 10 г/мл). Токсичность комплексов одинакова.В опытах и зв при внутривенном введении наркотизированным небеременным морским свинкам в дозах 10, 50 и 100 мкг/кг ПГ в буфере увеличивал амплитуду маточных сокращений на 50-65% в дозах 50 и 100 мкг/кг, а в комплексе с сапонинЬм ПГпро,являл утеротропныйэффект в дозе 10 мкг/кг- на 20,0 + 1,9%, в дозах 50 и 100 мкг/кг - на 100% и 120% соответственно, Простенон вызывал инотропный эффект в дозах 50 и 100 мкг/кг на 63,5 - 70,8% (табл. 2). ЕД 5 о ПГ в буфере составила 50 (60-41,8) мг(кг, ЕД 5 о комплекса ПГ с сапонином - 23 (27,6-19,9) мг/кг.В опытах и зк на беременных морских свинках ПГ в буфере увеличивал амплитуду маточных сокращений на 75-85%, а в комплексе с сапонином - на 105 - 285%. Простенон вызывал инотропный эффект в тех же дозах 50 и 100 мкг/кг на 89,0 - 105,0%, соответственно.Токсичность ПГне меняется при использовании его в виде новой лекарственной формы - комплекса с сапонином из мыльного корня,О 5 о ПГв буфере и в комплексе с сапонином составила 240 (264 - 218) мг/кг,С)5 о и ростенона 40 (36,7-44,0) мгкг, ПГ в виде комплекса с сапонином обладает в 2-3 раза более высокой утеротонической активностью, чем известный утеростимулирующий препарат простенон (ПГЕ 2) (табл, 1 и 2).Таким образом, комплексообразование с акантофиллозидом (сапонином из корней Асапйор 1 уогп 9 ур.) позволяет, не изменяя токсичности, повысить инотропный эффект простагландина в опытах и чсго в 1,5-2,0 раза, а опытах и зм - в 2-4 раза, а также снизить эффективную дозу (ЕД 5 о) ПГ в сравнении с ПГ в буфере в 2 раза.Одновременно повышается устойчивость простагландина, поскольку раствор ПГ в присутствии сапонина можно хранить 6при комнатной температуре продолжительное время без потери активности (6 мес.),Сущность изобретения демонстрируется следующими примерами.5 . П р и м е р 1. Получение простагландинас сапонином из мыльного корня,К раствору 10 мг простагландина в 10 млэтанола добавляют раствор 10 - 40 мг сапонина (акантофиллозида) из мыльного корня10 (АсапйорЬуцпз 9 урзорЫоЫез) в 40 мл перегнанного диметилсульфоксида и смесьперемешивали 1 час, Полученный растворкомплексов ПГ разбавляли фосфатным буфером до необходимой концентрации ПГ,15 Для приготовления фосфатного буферарастворяют 8 г йаС, 800 мг йаН 2 Р 04.Н 20,12 г йа 2 НР 04,7 Н 20 в 1 л бидистиллята.П р и м е р 2., Методика исследованияутеротонической активности веществ мето 20 дом п чтго.Утеротоническую активность синтетичвкого аналога 11-дезокси-П Г Е 1 3-цис-оксотранс-а-окси(2-фурил)-18,19,20-тринор-а-простеновой кислоты в буфере и в комплек-25 се ссапонином изучали в оптимальном разведении 1 10 г/мл на изолированном по Магнусуотрезке рога матки небеременных крыс и морских свинок, Рог матки помещали в аэрируемыйтермостатируемый раствор Рингер-Локка (со 30 став: ИаС - 9 г, КС - 400 мг, СаП 2 - 240 мг,йаНСОз - 150 мг, глюкоза - 1 г, дистиллированная вода - до 1 л; 37 С). Об утеротоническойактивности судили по проценту изменения тонуса (тонотропный эффект) и амплитуды (инотроп 35 ный аффект) маточного сокращения,Эффективность аналога ПГ в буфере и в комплексе с сапонином сравнивали с утеротропным эффектом простенона (ПГЕ 2Таллинн), применяемого в акушерско-гине 40 кологической практике в качестве средства,для родостимуляции.В результате изучения утеротоническойактивности ПГ в комплексе с сапонином иПГ в буфере методом и что было выявлено,45 что сапонин йовышает утеростимулирующий эффект ПГ. Так ПГ в буфере увеличивает амплитуду сокращений матки крыс иморских свинок на 76,8-85,0%, а тонус - на35,9-50,0%, соответственно. Аналогичный50 утеротропный эффект вызывает простенон,увеличивая амплитуду сокращений маткикрыс й морских свинок на 55,8-.83,8%, соот-.ветственно; Синтетический аналог 11-дезокси-ПГЕ 1 в комплексе с сапониномвызывал инотропный эффект на 128-150%,55 т,е. в 1,5-2.раза больший(табл. 1),П ри м е р 3. Методика изучения утеротонической активности препаратов п зв,1768592 Таблица 1Влияние препаратов на СЦМ небеременных крыс и морских свинок,в концентрации 1 10г/мл ., "" ффф"утеротроп,ую активность синтетического аналога 1 1-дезою;,и-ПГЕв буфере ив комплексе с сапонином изучали методом 1 п зй нэ беременеых и небеременных морских свинках, У лабораторных животных, находящихся под уретановым наркозом (1 г/кг, внутрибрюшинно),. Послойно вскрывали брюшную полость, выводили петлю рога Матки в стаканчик с нагретым физиологиче-, ским раствором (0,9 р-р МэС 1, т, - -37"С) и фиксйРовали лигатурой к подвижной системе датчика механотрона 6 Мх 1 С, Выходной сигнал механотрона подавали нэ вход усилителя ВЗВС - 4 У, выход усилителя соединялй со входом осциллограФа С 1-68, регистрацию сокрэтительнои деятельности матки осуществляли с помощью потенциометра КСП. Об утеротонической активности ПГ в буфере и в комплексе с сэпонином судили по увеличению амплитуды и тонуса сокращений матки в % к исходной амплитуде. Эффективность ПГ в комплексе с сэпонином сравнивали с утеротропной активностью простенона. Препараты въодили внутривенно в дозах 10, 50 и 100 мкг/кг,В опытах и з 1 тц на небеременных морских свинках синтетический аналог ПГ (1) в буФере увели 1 ивэл амплитуду маточных сокращений на 50-65% в дозах 50 и 100 мкг/кг (табл. 2), в комплексе с сапонином ПГпроявил утеротонические свойства и в дозе 100 мкг/кг - на 20,0 + 1,9%, а в дозах 50 и 100 мкг/кг - на 00 и 120/о, соответственно, ЕДзо ПГ в буфере составила 50(60-41,8) мг/кг, ЕД 5 о ПГ в комплексе с сапонином (27,6 - 19,9) мг/кг.В опытах и зв на беременныхмоРскйх свинках ПГ в буфере увеличивал амплитуду сокращений матки на 75 - 85, а в комплексе с сапонином - на 105 - 285%. Простенон в тех же дозах 50 и 100 мкг/кг вызывалинотропный эффект на 89,0-105, соответственно, Следовательйо,комплексообрээо 5 вание ПГс акантофиллозидом -сапонином из мыльного корня увеличйваетутеротропнйй эффект ПГ на небеременныхживотных в 1,5-2 раза, на беременййх"- в3-4 раза,10 П р и м е р 4, Методика определенияострой токсичности,Острую токсичность препаратов определяли на беспородных белых маршах весом15-13 г при внутрйвеннбм введений, Па 1 а 15 метры токсичности оценивали по Литчфиль. ду и УилкокСону. ЛД 5 а ПГ в"буфересоставила 240(264-218) мкг/кг. ТоксичностьПГв комплексе с сапонином была аналогична ЛДбо ПГ в буфере. ЛД 5 о просгенона20 составила 40(36,7-44,0) мг/кг." " Формула и зоб рете ни я Способ получения вещества, обладающего утеротоническим действием"путем об работки аналога простагланАЙна3-цис-оксо-транс-а-окси(2-фурил)-18,19,20-тринор- -а-гомопростеновой кислоты химич"еским реагенто"м;"о т л и"чэ.- ю щ и й с я тем, чтЬ, сцельо повыщеййя 30 устойчивости вещества "и"актйвностиЙрисникении эффективной дозы аналог простагландина обрабатываютсэпонином мыльного корняАсампорйуцв ОурзорЫоЫез йф при массОвом соотйойе нии 4 1, причем раСтворсапгонина в-дйметил сул ьфоксиде доба ел я ют" к раствору аналога простагландина в этаноле и геРемешивают при комнатной температуре,1768592 10 Продолжение табл,1 Таблица 2 Влияние на СДМ беременных и небеременных морских свинокпвто при внутренном введении+ достоверность различий при р0,002; достоверность различий при р0,001,оставитель Т.Толстиковехред М.Моргентал Корректор И.Шмакова Реда кто Заказ 3620 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 ПроизвоДственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина