415293

О П И С А Н И Е 415293ИЗОБРЕТЕН И ЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Сойетских С 04 излистицеских РеспубликЗависимое от авт, с3 аявлецо 29.05.1972с присоединением зПриоритет 1 детечьства179060428-13) С 12 с 11 26 6 01 п 33,16 явкиГасударственный комитет Совета Министров СССР па делам изобретений и открытийбликов юллетень6 15.1 Е 1 УДК 661.715.(088 та опублцковаия описания 9 Л 1.1971 Авторыизобрстеция Э. Казанцев, Г. Н. Максимова, Е. В. Щекина и Г, И. Воробьева Заявител есоюзцый научно-исследовательский институт биосицт белковых веществСПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕ СОДЕРЖАНИЯ УГЛЕВОДОРОДОВ В ДРОЖ опредследрожжах, фракциях Препар20 (цапримес фазововающимпример, оДля то 2 ров измеды в клевых клети объектГотовят 30 и с помо Известец способ количественного ция содержания углвводородов в выращенных ца углеводородных ,нефти. Известный способ состоит в том, что впродукт вводят растворитель, отделяют раствореццые углеводороды, зачем разделяютуглеводороды и растворитель и рассчитываюколичество углеводородов, содержащихся впродукте,Однако известный способ требует значительных количеств дорогостоящих химическихреактивов, посуды, оборудования и весьматрудоемок,Цель изобретеция - ускорение и упрощецие процесса количественного определениясодержания углеводородов в дрожжах.Для этого по предложенному способу приготавливают суспензию исследуемых дрожжей, измеряют в цей микроскопироваццем лицсйцыс размеры дрожжевых клеток и липидцых включений в клетках, затем рассчитывают объемы липидцых включеций и дрожжевых клеток и соотношение их объемов и пополученным даццым определяют содержаниеуглеводородов, например, с помощью градуцровочцой кривой.На чертеже показана градуировочцая кривая зависимости содержания углеводородовв клетках дрожжей от соотношения суммарного объема включеццй лцпидцой природы в 100 клетках к суммарному объему 100 дрожжевых клеток (%).Способ реализуется следующим образом, Пробу дрожжей, цапример Сапйс 1 а с)ц 1111 егпчопй 1 НП, выращеццых ца парафццах, цапример фракций: С,о - Сць С 11 - Сць С 1 з - Сот в фермецтерах, колбах, взятую цепосредствеццо цз фермецтеров, колб или из прессо ваццой свежей биомассы разводят водой доконцентрации порядка 10 клеток/мл с целью приготовления цитологического препарата.Затем суспецзию дрожжей наносят цапредметцое стекло таким образом, чтобы получить одцослойцый препарат с отдельно расположенными клетками дрожжей по 20 - 30 клеток в поле зрения микроскопа. ат помещают ца столик микроскопа р Ке 1 с 1 чег, Хе 1 зч-Мц МБИ-З, МБИ) коцтрастцым устройством, обеспечцувеличение порядка 1000 раз (цабъектпв 100, окуляр 8).чцого определения лццейцых размеряемых включений липцдцой приротках и лицейцых размеров дрожжеок используют окулярцый микрометр микрометр,2 - 4 препарата дрожжевых клеток щью микроскопа выбирают 4 - 6 по" ооР . Табл 33(а 1 Соотношение суммарного Объема вклн)пений л(иидиой Грироды в 100 клетках к суммарному Объему 100 дрожже в их и леток, ", .=3Л;адо ПП 50дО 1свыше 1;до 4 Чсвыше 4 15 - 51 60 - 86 18 - 74 94 - 218 234 в 2 3 - 23 22 - 62 0,20 0,30 0,42 0,83 0,91 1,09 1,23о 0 1,45 1,71 2,11 4,06 4,13 5,60 6,60 7,40 1 2 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 0,32 0,31 0,42 0,70 0,80 1,01 1,31 1,27 1,41 2,06 1,80 1,90 2,19 2,88 4,04 5,70 89 - 96 105 в 1 леЙ Зрсиия, тяе чтооы Ойи(е 1(Олиилст 0 е:с. ток было ис мсисс 100.Проводят фотосьсмеу вцбрдииых препаратов. 11 а фотосиимках опрсдсл.ют лииейице размеры включении лини;иой природл В к;еткдх и лииеииыс рдзмер 11 кле 03; (х). По получсииым лииейиым размера л (с помошью таблиц определеия ооьемов ио лии(йиым 123 срам) Оп 1)деляОиий лииидиой природы вОО 3:лси(дх (по формуле для ооъсма сферы) и Объемы ОО дрожжевых езеОе (ио формуле дл; обьем. ЭЛЛИПСОИДа ВРа:ИСИИЯ), ЗДТСМ Вл ИСЛЮТ ЕО ОТИОШСИИЕ () СУХХЯРИОГО 00 ЬЕ)32 ВЕЛО(- иий липидио Природы В 100 еле едх (ме)13) к суммяр 103)у 00 ъему 100;1 рожжеВых елс - ток (мкм) ио формуле:хув включений липидиой природыК=3га ДРОжжЕВЫХ КЛЕГО( Гдс К -1 сть Обьс) 12 Дрож)ес 1х е,103 О,:, занимаем 151 велочеии 5)и липи,1( Прро;л (в %).Если определения проод;ипо меньше у НОличсстВу е,:3(,тое (Наири)ер ОО), рс:улич 1 1 ИМСН)Т Л 1 ЕИЬИ 1 У 0 ТОИОС Ь. . ОИОС 3 Д 3,1 ЯЯ СО(- иошсиия (%) суммариого ооъемд челн Сиий липидиой природы в ОО к)с 1 ах и суммарному объему 1 ОО дрожжсых клеток с ддиицми ио оирсдслеиинэ углеодородоизвес ы, СПОСОООМ, СОС 1)1 Л 5 Н)Т ТДОЛ 3)ЦЪ;32 ИСИХ 1001 И МежДУ СОДСРжДИИСМ УГЛЕВОДОРОД(И 3 мЕЕДХ (% К СуХОХу ВЕСУ) И СООтПии 33,.:М Су,) д- ИОГО 00 ЬЕХ 1)1 3103 ОЧСИИИ ГИ 33,303 1 Р 1 РОД, В 1 ОО клсНдх е су)марцоту Об ье)уОО, 0)е жсвц 1 лс Ое (с). тдОл, 1) .23)ПСИХОС )СЖДУ СО:СР)к)ии(1) УГ,(30.0- РОДО 3 В ДРОЖЖДХ (,( Е СУХОМУ ВЕСУ) И сооПОПсиС)1 смм)12 риОГО Обье.,12 Ве.3 Осипи л 1 пиди(ш природы в 100 клетках к сурио )у объему ОО дрожжсых сзето 1 и)е:с 2- лсиа в табл. 1,По таблице 3)дсс Итгдют ко ффшиеи ГЕОРРСИПИ .;ЕТЕ,У С(ДЕ )Е 31 ИСЛ УГ,СВОДОРО 3(1су ) 1 и с ), Оиеделеииь:м пзее.ицм спосооо., в проб, 1 сооиоис 3 ех су)м.,Яриого объе): 1,53 ОСипи лии.Ой прроВОЦ 1. 1 Ет.акС:ХХдр 1 О;М 001 С,у100 лэожжсВ)1 х 1:еое ,( ), 13 т(.х же проод.:.хо-:фф 3 цисит коре 1 яии; рдвс 0,96.Для оирсделси; СО,е;кдиия углсво 1 оро,0 Б . сПах,эо)1.):сй ио ддииых т 10,1. 1 с роят г ддуирово (у 0 ершую здвисихоси со срж 2 ии, улсодорогОВ 3 еледх дрои, - жсй 01 СО 01 ОШС;и СУ)хДгПОГО ООЪСМа ВЕЛО(:иий,1 иидиой иризоды В 1 ОО елеГНЯ е 15 су.хариому оо,ему 100 дропкевцх клеток.а Осиоваиии усаиовлсииой здкоио) риости;л 51 Оолсе Острого Опе,с сии) солер)капя уг,с 3 дородо 13;рож)едх ид 3Прсид рд Гдх, содсртеаиих 1 ОО еле 01., и Удг ПО п)СИЫ 3203 Е 0,1 ИЕС 13( Е,1(".(,Е С ЕГ 103 СИИ)3 Х 1 И13 п 1,3 ОЙ пРИ)0;1 ь 3 ,ц ), 1(оси(с Г 0 елО"е ППЙ,ииидиои ир.роды елеЯх (% ), еоличес 1130 1 елнсипи лини Пои иПро; 1;132(е 1- 25 ро. бол ис 1,ем 3; ОО елеедх, 110 едждо)1) и;3 идд(.П 13 эх иоед)1 слеЙ и(с,( сос 1233 л(- Ии Т)10, 3 ПЬ 32 ИСИМОС 1 И )С)кУ СОД(РЖ 1 ИИСМ угл(ми)ДО;и)до(% и с)Гх(у ест), Опред(.- лепих и 3)ест 33)1 сиособо)1, и 1 ихи иоея.)д Т(.л;)1 и Ориеи 1 ирбочио Оир(Дел;От с;сржд.иие углеядород( в елзедх.З 133 исимость между 00.ержии(Г) г)е 0;О.р 051( Ю 1 С ХОМ у ЕСу), ОИЕ;ел Е 33 Ь 11 ИЗ.,.риси ировочиое оирсделеиие содержания хГ)еводородов В дрожжах ЗапилЯст О -30 мии. П р ие р 1.,) Ожтеи Сдд (3111 СГП)оп(1,60 11рди и а н13 ОО литрово)я фсрмитеРЕ,:32 ТЕХ ИСРСОДИ Б,О;3 СВЯ 3 (., Ь И ЧЕРСЗ 3,5 чдс спарируюг, провЫвают и отоирают прооу сусиеи 331 П дро:еж)й, которую р 2302 Вляот водой до коицеи 1 рации примерио 65 10 кгеток 3)л. Затем готовят 4 цитологичеТ аблица 4 Количествовключекии лвидной природы чиатстромболее 1 мкм 0 1 0 1 0 0 3 1 30 3 4 5 6 1002,85,0 4,8 4,6 6,0 5,4 8,49 42,00 48,60 18,90 32,20 32,80 1 2 3 4 5 100 2,4 4,0 4,4 2,8 3,2 3,4 00,520,5200,270,52 0 1 1 0 0,8 1,0 15,50 1920,4 ских препарата. Для этОГО суспензи 10 дрожжевых клеток наносят нд предметное стекло и накрывают покровным стеклом, таким образом, чтобы получить однослойный препарат с отделыо расположенными клетками.С похОнью фотонасадки на микроскоп КеС 11 ег 1 с фазовым контрастом проводят фотосъемку препаратов.Чувствительность пленки 90 ед. ГОСТ, выдеркка 1 сск.На фотоснимках с известным увеличением, определяемым но фотоснимкам обьскт-микро. метра, проводят измерение линейных размеров (диаметров) ВклОче 15 липид:ой природы В 100 клечкдх и линейных размеров (большо и меньшую с;сн эллипса) 100 дрожжевых клеток. По заранее построенной таблице (см. табл. 3) определяют объемы Вклочецш липндно," природы в 100 клетках и объемы 100 дрожкевых клеток.С помощью счет ной ма 1 нины сум мируот объемы вклктчений липидной природы в 100 клетках - получают величину 1,э,о мкт, затем суммируют объемы 100 дрожкевых клеток - получО Величину 1920,4 хкаа. По найденным величинам определяют 0",ношение суммы объемов Включений липндной природы в 100 клетках к сумме объемов 100 дрожжевых клеток (%). Опо равно 0,81%. По заранее построенному градуировочному графику определяют, что этой вслнчипс соответствуег соде 1 жанн. Углеводо)одов В д 10;кках, 1 Явное 0,90% сухого веса дрожжей,Определение соотношения объемов Включений линндной природы в 100 клетках к обьсм Яа 1 100 дрок 1 сеВых к.теток при Всдены В табл. 3. Соотношение ооъсмов включений липидной природы в 100 1:летках и объемам 100 дрожжевых клето с составляет 0,81.П р и м е р 2. Дрожки Сансс)а с 111 Сггпопс 11 НП(8 раза) Вьращивдют ненрерыв ным способом в фсрмептере объемом 30 т,Отбирают суспснзню дрожисй, сспдрнруюг,ога 1 ЫВ о н 1 бн)аот пробу нд определениеуГлеводоро;1 ОВ В д)ожкдх. Для этОГО д 1 ожжн разводят Водон до концентрации порядка5 10 клеток 1 мл). Готовят 4 ннтологнчес 1 нхпрепарата, для чсго суспензню дрожжевых1(леток наносят ня пред 1 етнос стекло н ц 1 крыва 10 т поС 1 ОВныа Стекло.; таким Образох 1,чтобы получит. оп:Ослсйный препарат с от 10 дельно располо 1:синьми 1:лс 11 Я.,и. 11 д нрспдратах подс нТываот процент клеОк с включения.1 и лнппдн 01 .р 1 роды, пронснт В 1 лОчсний лнп 1 днОй нрнрОЛ, В ле кдх, еолнес ГВОВключений л 1 гпн.но 1 трнроды:1 ндхСтрох15 больше 1 1:,1 к (с 1 О:1 он;ь,о окулярного микрометра) в .00 хгстк:х. Рс ддьныс заносят итаол. 4,О 1 нснт нровочнос б 01 рое Оп).едслсннс сОдержаии, уГ 51 ЕВО-Ирадов В дрОЖЖЯХ Приве 20 дено В табл. 4. Клет 1,"с вклю- Колчестноче 1 инкап вклочени 25липи,"итон лпГлной прин/ипр 1;роды,роды в клетке По тдол. 2 1 дходят, что содсрждн:с углсВОЛ 01 одйв В д 1 О;1:.ждх нрсвынЯст 4 ", 1;ОП 1- 1 ольнйе Он)ас,с,ение соде)кд 1 ня уг,1 сводорО- дОВ дд 10 1 сснПн 0,0 ю От сухОГО Веса д 10 к жей.45 Предмст изоорстения Способ колич с-Венного определения содср жанни угловдо 1 одон В дрсккдх, В.рднсснных ня уг,1 сводО,0:Пьх ф 1 дкннях нсфт 11, 0 т- Л Н Ч Я 10, Н й С 5С,1, 110, С НЕ.1 Ь 10 УСКОРЕННЯ и упрощс 1;ня нродсссд, прнготдвливдют сусНСНЗИ 10 НССЛсдуСМЫХ дрОЖЖЕй, ИЗМСр 5110 Т В 55 нсй .,1 П 1 роскОпи 1 ОВ;1:1 не. л не 1:Вс раз.:с)1:Л 1)ожжев 1,1 х к,10 сок н лннндных В 1;л 10 ченн:гКлсКа:, ЗД СЕ 111 СНТЫГДОт 00 ЬСМЫ ЛНННД- ныл Г 1.лОчс;1,и 11 д)ГОкксВ 1)1 х 1 лс 5011 н соо ГНИНСН: Н; СбЪС Гсп 1; и 1 ПО т исНЫ.Ы 60 01 1 сдсля 10" со, с 1 кд 1 нс т Г,1 к Водородов, ндприлер, с иотОП 1 ью Г 1 ядн 1 ОБО По К 1 ивой.р Составитель М. Ларина Корректор Е, Сапунова Текрсд Е, Борисова 1 едзктор М, Макарова Ти ног р аф и и, нр. С а пуп о в а, 2 Заказ 1101,7 Изл ЪЪ 1287 Тираж 456 Подписное Ц 1 ИИПИ Государственного комитета Совета Ьинпстров СССР ио делам изооретений п открытий Л 1 оскиа, Ж.35, Раушская иаб., д. 4/5