Способ получения литических ферментов

"4 Б 294 Сааз Сбзетскии Соцма листы мь:аа РеспубпмкК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 61) Зависимое от авт. свидетельства - 22) Заявлено 06.06.72 (21) 1793898:28-1 1) МКл, 3/1 присоединение аявки-осударстееииыи комитетСовета 1 ииккстроа СССРоо делам изооретекийи открытий 32) Приоритет -Опубликовано 5,0 4, Бюллетень6 577,о.О (088.8) публикования описания 18,09.7 2) Авторы изобретения О. В. Кислухина, В. Ю. Авиженис и К. А. Калуня Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ(71) Заявител 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТО 1Изобретение относится к области микробиологической промышленности и может быть использовано при производстве препаратов литических фарментов из культур бакте 1 рий группы сенной и картофельной палочек, например Вас 111 цз зцЫ 111 з 402, выращенных глубинным способом.Известен способ получения литических ферментов путем выращивания микроорганизмов например, Вас 111 цз зцЫ 111 з 402, на водной питательной среде, содержащей источники углерода, азота, стимуляторы роста и минеральные соли, с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости.С целью повышения активности литических ферментов и снижения себестоимости продукта по предлагаемому способу в качестве источников азота и углерода в среду вводят осахаренный ячменный солод, в количестве 2,3 - 2,70 о от общего объема среды.Дробленый ячменный солод суюпендвруют в воде в концентрации около 5%, подогревают суспензию дю 70+2 С, выдерживают прои этой температуре и постоянном перемешивании в течение 1 час, а затем повышают темлературу суспензии до 802 С и продолжают процесс до перехода крахмала в неокрашиваемые йодом декстрины, При высокой активности амилазы в солоде процесс осахарнвания может закончиться менее чем за 1 час при 70 С; при эом выдсржпвапгь суспензию при 80 С не нужно, По окончании осахарпвания раствор кипятят в течение 10 - 15 дан, затем стерплизуют 30 - 35 лан прп 135 1-2 С. Отдельно при готавливают раствор солей, в который внюсятсухие пивцые дрожжи. Объем этого раствора определяют исходя нз конечного объема среды, объема суспензии солода и количества конденсата, образующегося при стерилизации.1 О Раствор солей (с пивными дрожжами) стерилизуют 30 - 35 лаан прп 135+2 С. Простерилизованные компоненты среды соединяют в ферментере, охлаждают до 40+1 С, устанавливают в среде рН 6,90+0,2 с помощью кон центрированных растворов аммиака и орто.фосфорной кислоты, а затем засевают среду культурой бактерии из группы сенной и картофельной палочек, например Вас 111 цз зцЫ 111 з 402. Посевной материал выращивают при 20 37+1 С в течение 48 - 3 час на пшеничныхотрубях, увлажненны 1,5 вес. ч. воды и простерилизованных в течение 50 - 60 лан пр 1 и давлении 1 0,1 ата. Для засева 1 лх питательной среды достаточно культуры, выра щенной на 30-,-10 с пшеничных отрубей (повоздушно-сухому весу). Ферментацпю ведут в теченпе 12 - 16 час прп 371 С, постоянном перемешиванип и количестве продуваемого воздуха 0,5 - , 0,05 объемов в 1 мин. Активзо ноеть литических ферментов в фильтрате415294 Составитель Б. ДуньеТехред Г. Васильева Корректор М, Лейзерман Редактор В. Блохина Заказ 3070 Изд,1288 Тираж 456 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб д. 4/оЗагорская типография 3культуры по окончании ферментации составляет 22000 - 29000 ед. ЛА/мл.П р им е р. 20 г дробленого ячменного солода помещают в реактор, содержащий 400 л холодной водопроводной воды. Взвесь нагревают до 70 С при постоянном перемешиванви. Процесс осахаривания солода при 70 С, длится 30 мин. Затем суспензию солода нагревают до кипения, кипятят в течение 10 мин, охлаждают и перекачивают с помощью насоса в ферментер емкостью 1500 л и в нем простерилизовывают в течение 30 мин при 135 С. Во второй реактор, содержащий 260 л холодной водопроводной воды, вносят 3,2 кг/ХН 4/зНР 04, 0,48 кг КС 1, 0,08 кг Мдс 1047 Н,О, 0,088 кг СаС 1 з и 0,4 кг сухих пивных дрожжей. Раствор перемешивают в течение 15 мин, а затем перекачивают в сателлит ферментера и простерилизовывают в течение 30 мин при 135 С, после чего стерильную жидкость передают под давлением в ферментер. Среду охлаждают до 40 С; рН среды составляет 6,9, объем - около 800 л, Среду засевают водной суспензией культуры Вас 111 цз зцЫ 111 з 402, выращенной в течение 48 час при 37 С на 20 г пшеничных отрубей,увлажненных 30 мл водопроводной воды и простерилизованных в течение 1 час при давлении 1 ати, Ферментацию ведут в течение 13 час при 37+1 С, постоянном перемешива нии в количестве продуваемого воздуха23 - 26 м/час, По окончании ферментации активность литического фермента составляет 25700 ед. ЛА/мл. 10 Предмет изобретения 1. Способ получения литических ферментов путем выращивания микроорганизмов,например Вас 111 цз зцЫ 111 з 402, на водной пи 15 тательной среде, содержащей источники углерода, азота, стимуляторы роста и минераль.ные соли, с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения активно 20 сти литичеоких ферментов и снижения себестоимости продукта, в качестве источниковазота и углерода в,среду вводят осахаренныйячменный солод,2. Способ по п, 1, отличающийся тем, что25 ячменный солод вводят в среду в количестве2,3 - 2,7% от общего объема среды.