Способ получения s(+) энантиомера 2-арилпропионовой кислоты

(5 БРЕТЕ АТЕН СН-СООН где Аг - свобо ный фенил, кот палительные сИзвестно 2-арилпропион специфическо сложных эфир клеточного или-бензоилзамещенвляет противовосдныи или орый пр войства, получен овых ки го гидро ов посре микроб еров реоских . вне- ения е Я энантиом слот путем сте лиза рацемиче дством липазы ого происхожд ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР.синтеза биологически активных соединений, Сущность изобретения; рацемический Изобретение относится к синтезу биологически-активных соединений, проявляющих терапевтическую активность.Более конкретно изобретение относится к способу получения Я(+) энантиомера 2-арилпропионовой кислоты общей форму- лы С 12 Р 41/00, 7/40//(С 12 Р 41/00 С 12 В 1:01) 2-арилпропионамид подвергают стереоспецифическому гидролизу микроорганизмом, выбранным в зависимости от его способности к селе кви ному гидролизу а-фенил пропионамида в а-фенилпропионовую кислоту Я(+), Способ предусматривает получение смеси 2-арилпропионамид В рацемизируется по известным технологиям в рецемический 2-арилпропионамид, который снова может гидролизоваться в 2-арилпропионовую кислоту Я. Рацемизацию 2-арилпропионамида осущесТвляют путем нагрева с гидратом окиси аммония при 80-160 С.(европейский патент М А). Однако, согласно этому способу получают целевой изомер с выходом 600,Цель изобретения заключается в повы, шении выхода Я(+) энантиомера кислоты формулы и в.получении практически чистой оптически активной кислоты,Это достигается тем, что рацемические 2-рилропинамиды гидролизуют посредством микроорганизмов или энзимов, выбранных в зависимости от их способности к селективному гидролизу рацемического а-фенилпропионамида ва-фенилпропионовую кислоту Я,Селекция агентов, позволяющих осуществлять энантиоселективный гидролиз рацемических 2-арилпропионамидов, осуществляется путем контактирования агента с рацемическим а-фенилпропионамидом в соответствующей среде до преобразования20 Д продукта с последующим измерениемэнэнтиомерного избытка. Отбираются агенты, которые гидролизуют, в этих условиях,рацемический а-фенилпропионамид в а-фенилприпионовую кислоту 5 с энантиомерным выходом, превышающим 65 О/.Среди таких микроорганизмов можноназвать штаммы, принадлежащие к родуВгечЬастегцв или СогупеЬас 1 егцв и, в частности, ВгечЬас 1 егцв 8312 (СВЯ 717, 73)иСогупепастегцв Н 771(ГЕВМ Р 4445) илиСогупеЬас 1 егцв М 774 (РУЯМ Р 4446), которые позволяют получить 2-арйлпропионовые кислоты Я с энэнтиомерным избыткомизомерэ Я, превышающем 90% 15Согласно изобретению, способ обычноосуществляется в однородной или неоднородной водной или водноорганической среде в определенных условиях температурыи рН в зависимости от аида микроорганизмов и энзима с перемешиванием суспензии клеток или клеточных экстрактовмикроорганизма а рацемического 2-арилпропионамида.Способ приводит к смеси 2-арилпропионовой кислоты Я и 2-арилпропионамида Й,причем 2-арилпропионамид Р может рацемизироваться по известным технолотиям в рацемический 2-арилпропионамид,который снова может гидролизоваться в 302-арилпропионовую кислоту Я в приведенных условиях,Например, рацемизация 2-арилпропионамида Р может осуществляться путем нагрева с гидратом окиси аммония при 35температуре от 80 до 160 С,Способ согласно настоящему изобретению, особенно подходит для получениякатопрофена И+/ из рацемического 2-./3/-,бензоилфенил/ пропианамида. 40Нижеприведенные неорганическиепримеры показывают возможность практического осуществления изобретения,П р и м е р 1. а/Штамм ВгечЬэстегцв й312/СВЗ 717, 73/ культивируют в колбе при 45перемешивании при 20 С в течение 14 ч всреде со следующим составом,Глюкоза 10 г(М Н 4)2304 5 гКН 2 Р 04 1,01 г 50Мэ 2 НР 04, 12 Н 20 1,64 гК 2 Н Р 04 0,82 гСаС 2 2 Н 20 0,012 гЕпС 2 - 0,0012 гГеЯ 04 7 Н 20 0,0012 г 55Мп 304 Н 20 0,0012 гМ 9504 7 Н 20 0,5 гХлоргидрэт тиамина 0,002 гВода в количестве до 1000 см,Зту предварительную культуру используют для затравки культурной среды, имеющей тот же самый состав, но содержащий,кроме того, М-метилацетамид с концентра-.цией 20 мМ. Культивирование осуществляют в колбе с перемешиванием в течение24 ч при 28 ОС, Полученную биомассу отделяют центрифугированием, затем промывают двараза раствором хлоридэ натрия при9 г/л.П р и м е р 2. а/Культивируют в колбе сперемешиванием при 28 С в течение 14 чштамм СогупеЬас 1 егцв 771 (ГЕВМ Р 4445) всреде со следующим составом;Дрожжевой экстракт 3 гСолодовый экстракт 3, гБактопептон ,5 гГлюкоза10 гРе 804 7 Н 20 0,1 г. Вода в количестве до 1 ла) рН регулируют до 7,5 путем добавки едкого натра перед стерилизацией;Зту предварительную культуру используют для затравки 1/40-й средй такого жесостава, в которую добавляют из расчетаз5 см на 1 л, нитриловый раствор кетопрофена в ацетонитриле (0,2 г/см ),После инкубации в течение 24 ч при20 С в перемешиваемой колбе отделяют биомассу центрифугированием, затем промывают два раза водным раствором натрияпри 9 г/л,б) Осадок центрифугирования,содержащий 72 мг клеток,СогупеЬэстегцв Ь 771 в .расчете на сухое вещество, переводят в суспензию с 2 см буферного фосфэтного расзтворителя (50 мМ) при рН = 7; Добавляют.25мг рацемического 2-фенилпропионамида (167 и моль); затем перемешивают втечение 24 н при 25 С,Реакционную смесьобрабатывают в условиях по примеру 1Всплывшая часть содержит 110.р моль .2-фенилпропионамида; 34 р моль 2-фенилпропионовой кислоты,.Содержание энантиомера 2-фенилпро-.пионовой кислоты, измеренное по вращательной способности и после его отделенияс помощью В/+/ а-метилбензиламина, иэ.меренное по ЖХВВ составляет соответственно 100 и 95 О изомера И+/,П р и м е р 3. Осадок центрифугйрования, полученный в условиях по примеру 1 а),содержит 13 мг клеток ВгечЬастегцв Й 312,в расчете на сухоез вещество, переводят всуспензию с 2 см буферного фосфатногораствора (50 мМ) при рН = 7, Добавляют25 мг рацемического 2-фенилпропионамида1806201 Составитель Г. СмирноваТехред М.Моргентал Корректор 3. Салко Редактор 3. Ходакова Заказ 966 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина. 101 пионовой кислоты в присутствии ферментопродуцирующего микроорганизма, о тл ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода и оптической чистоты целевого продукта, в.качестве функционального производного 2-арилпропионовой кислоты берут.соответствующий рацемический 2-арилпропионамид, а в качестве ферментопродуци-.рующего микроорганизма используют ВгечЬастегот Р 312 (СВЗ 71773), 5 СогупеЬастегогл М 771 (ГЕЙМ Р 4445) илиСогупеЬастегце М 774 (ГЕЙМ Р 4446),