Способ получения диастереомера n-3-хлор-4-(2-хлор-этилтио) бутаноил-l-фенилаланина

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН С 323/59 51) 5 К 31 1 О РЕТЕНИ оцют ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ ТОРСНОМУ СВИ 4 ЕТЕЛЬСТ(7) Институт биохимии АН Ли(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАСТЕРЕОМЕРА Я-ХЛОР-(2-ХЛОРЭТИЛТИО)-БУТАНОИЛ-Ь-ФЕНИЛАЛАНИНА(57) Изобретение касается замешенных аминокислот, в частности способа по лучения диастереомера Я-хлор- -(2-хлорэтиптио)-бутаноил 1 -1,-фенилалаланина (ФА), который обладает пр тивоопухолевой активностью и может быть использован в медицине. Цель разработка способа получения ФА, имеющего лучшую активность, чем известный сарколизин. Синтез ФА ведут из И-винилацетил-Ь-фенилаланина и 2-хлорэтилсульфенхлорида в среде смеси СНС 1 и СС 1, при (-20)-(-30) С с последующим отделением осадка и его фракционной кристаллизацией иэ эфира. Выход ФА 607, тпл. 108-115 С;2 о оф 3,вч = +78 (диоксан, концентрация 0,84). Испытания показывают, что ФА после 10 сут быстрее восстанавливает норму числа лейкоцитов (-27,97.), чем рацемат (35,2 Ж). В отношении штамма ЛП наблюдается лучшая активность ФА, чем сарколизина. Токсичность ФА (ЬО, ) составляет 100 мг/кг против 120 для рацемата и ЬП, сарколиэина 7-23 мг/кг. 2 табл.Изобретеце относится к способу получения нового оптически активного производного фенилаланина, диастереомера Н-хлор-(2-хлорэтилтио)-бутаноил -1,-фецилдланина формулы(С 1 СНСНЙ-СН -СИЖ 1)-СИСОНИ-СН-СООИ СигсьИ обладающего противоопухолевой активностью,Он может найти применение в медицине и для лечения экспериментальных опухолей.Целью изобретения является получение с высоким выходом оптически чистого производного ФЕцилаланинд) обладающего более высокой противоопухолевой активностью.Изобретеие иллюстрируется следующими ггримердми. Пример а) Ацилиронацие 1.-фенилаланина.К раствору 16,52 г (0,1 моль) 1,-фенилдлдцина и 60 мл 2 н. раствораИаОН при перемешивднии одновременноприбавляют по каплям 10,4 г (0)1 моль)хлорангидрида нинилуксусной кислотыи 5 ц. раствор ИаОН при 0-(-5) С ирН 8-9 (по универсальному ицдикатору). Погученную смесь разбавляют50 мл хлороформа и перемешивают прикомнатной температуреч, подкисляютконцентрированной НС 1 (по Конго), органический слой отделяют, водный слойэкстрагируют хлороформом. Зкстрактсушат М 850упаринают, остаток нвиде масла обрабатывают четыреххлори.стым углеродом и образующееся твердоевещество кристаллизуют из смеси СНС 1,и СС 1, (2:1). Получают Я-винилдцетил.-фенилаланин (14,0 г), т. пл.108-115 С, выход 60 , удельное вращение ос= +78 (диоксац, с)690,84) (поляриметр "Рег 1 с 1 п Е 1 шег 41"),Найдено,: С 67,28, Н 6,17;Б 6,01,С) Н)5 ЮеВычислено, l: С 66,94) Н б)48;М 6,00.ПМР-спектр снят на приборе "Н 1.СасЬдц К(90 МГц) в О-ацетоне)внутренний стандарт - ТМДС, й ) м.д.:3,2-2,7 м (2 Н, СН, СО), 4,7 1 м (1 Н, СН),5,0 м (1 Н, :СН), 5,7 м (2 Н, ( Н фф7,1 с,(5 Й, С Н ),Аалогично ацилцруют П-феи )аанинн. Получают М-виццлацетил-П-фенилдлаццц (12,8 г), т.пл. 108-115 С, выход 55 , удельное вращение э, я- -77,7 (диоксан, с 0,72).Найдено: С 67)20 Н 6,29;М 5,85.ПМР-спектр н аналогичных условиях10совпадает с ПМР-спектром ацилированного 1,-фенилалдцинд.б) Присоединение 2-хлорэтилсульфенхлорида.К раствору 23,32 г (0,1 моль) полученного н пункте а) Н-винилацетил,-фецилаланина в 100 мл абсолютногохлороФорма при (-20) в (-25) С прибавляют по каплям 13,1 г (0,1 моль) 2-хлорэтилсульфенхлорцда в 30 мл четыреххлористого углерода. Выпавшийосадок отфильтровывают и подвергаютфракциоцой кристаллизации из абсолютого эфира. Выделяют диастереомерИ-хлор-(2-хлорэтилтио)-бутдцоил - 1.-Фгцилаланина (1) (14,5 г),от.пл. 116-117 С, выход 80%) удельноевращение о = +64,7 (диоксан,с 0,50).ПМР-спектр в О-ацетоне) внутреннийстандарт - ТМДС, П ) м.д.: 4,32 м(5 Н, СН,).Изучеие физиологической актинцости.О токсичности соединений судилипо величине дозы, вызывающей 100%-нуюгибель животных (ЛД), максимальнопереносимой дозе (МПД) и по изменениюмассы тела и селезенки. Токсичностьопределяли на белых беспородньгх кры 50сдх-самкдх с массой тела 100-120 г.Препараты вводили сусцендированцымин растительном масле, внутрибрюшинно.Протиноопухолевую активность (ПОА)соединений 1-11 определяли на крысахс привитой карциносаркомой Уокера(ЛП) и на линейных мьппах С гВ 1 скарциномой легких Льюиса (1 Л,В). ВТ а б л и ц а 1 Доза, мг/кг Ш аммопухоли Соединени МПД ТД и число введений+2, 7 1 ппытах иснользовацо 350 крыГ ц 130 мышей,) Об зффективцости действия сулили по торможению роста опухоли и изменению массы тела и селезенки.Результаты биологических исследований соедицвций 1-111 и широко используемого в медицине сарколизица приведены в табл. 1. Из табл. 1 следует, что соединение 1 по токсичности не уступает 11 и соответствующему производному Р-фенилаланина, величины ЛД , и МПД для всех соединений одного порядка, а отрицательное влияние на массу селезенки оказывае т только вещество 11 (-15,7 и - 1,бЕ), ца массу тела в зависимости от штамма опухоли цезцаЧительно влияют все три соепицення. В то же время соединение 1 намцсго превосходит сарколцзин ц по величине ЛД, , МПД и по влиянию на массу селезенки.Противоопухолевая активность предложенного соединения 1 ца всех штаммах опухолей в терапевтических Позах вьппе, чем ПОЛ соединения 11 и производного Р-Фенилалацица 111. Наиболее высокую, постигающчо 98,3 291/3ди 95,57 активность оно проявляет вотношении штаммов опухолей КСУ И ОЯсоответственно, а в отношении штамма бЛП - превосходит даже сарколизин (результаты 67,9 и 61,07, соответственнополучены в одном опыте на крысах).Данные по изучению действия соединений 1-111 на число лейкоцитов кровиу крыс с лимфосаркомой Плисса приведены в табл. 2.Из табл. 2 следует, что число лейкоцитов после 10 сут возвращается кнорме быстрее в случае применения соединения 1 (-27,97), чем рацемата(35,2 Ч),Формула изобретения Способ получения диастереомераЯ- З-хлор-(2-хлорэтилтио)-бутаноил-Ь-фецилаланица, о т л и ч а ю - , щ ц й с я тем, что И-винилацетил-Ь- -фсцилаланиц подвергают вэаимодейуг, ствию с 2-хлорэтилсульфенхлоридом всмеси хлороформа и тетрахлорметана при (-20) в (-30) С, выпавший осадок .отфильтровыч;чгт и фракционной кристаллизацией иэ эфира выделяют индиЗр видуальный пиастереомер. т Торможение рос- Изменение массы,та опухоли Х т ( Рселезенки тела329123 Продолжение табл. Соединени Изменение массы,Доза, мг/кгВ Тормоаение роста опухоли селезенки тела 120 90 8 х 30 КСУ 60,5 с 0,0110 х 30 ЛП 37,3 0,5 10 х 30 С-М,6 с 0,5 Сарколизин17 ЛД17 23 12 10 х 2 3 ЛП 61 О сОф 05 28 в 4 2 в 7 ТД - терапевтическая доза. Ф Таблица 2 Сойди- Доза, нение мг/кг Число лейкоцитов через время, сут 3 6 О с/ммРс тыс/ммРс тыс/мм Контроль 25,7+ 2,5,8+ 2,6,3 + 1,5 9,6 + 0,9 -41,1 0,01 15,7+ 2,4 -38,9 0,02 18,6+ 1,0 -27,9 0,0 1 0,7 -386,0 0,01 6,7 Т 1,7 -35,2 е 9 Ов 05 2017+ 2 ю -19,7 1 15,4+ 1,20 3,0 + 0,7 -20)2 0)5 18,0+ 2,0 Составитель Л.ИоффеТехред А,Кравчук орректор Л.Беск Редактор Е,Хорина Тир на Государственного по делам изобретений 035, Москва, Ж, Раув