Активированные эфиры n, n -ди-трет бутилоксикарбонилгистидина в качестве полупродукта для синтеза дии трипептидов

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскнвСоциалистическихРеспублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 30.12.80 (21) 3237771/23-04 (11 М.КЛ.з с присоединением заявки Нов(23) Приоритет С 07 Р 233/64 С 07 С 103/52 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(НУДК 547,784,2 (088,8) Опубликовано 07.12,82. Бюллетень Йо 45 Дата опубликования описания 07,12.82(71) Заявитель Институт биологической и медицинской химии АИН СССР(54) АКТИВИРОВАННЫЕ ЭФИРЫ И , 14 , ДИ-ТРЕТ- - БУТИЛОКСИКАРБОНИЛГИСТИДИНА В КАЧЕСТВЕ ПОЛУПРОДУКТА ДЛЯ СИНТЕЗА ДИ- И ТРИПЕПТИДОВ О 0И(СН 5) 5 СОСМНСНСОС 5 Х 5СН,С=СН ОуВ 7с 5 х 50 н У УсОС(сн 5)5СН Изобретение относится к химическим соединениям, конкретно к пентагалоидфениловым эФирам И , Нпз.ди-трет-бутилоксикарбонил-бок-гистидина об" щей Формулы где Х = Г, С 0,которые являются полупродуктами длясинтеза ди- и трипептидов.Известны и-нитрофениловый эфирди-бос-гистидина (1 ) и Я-оксисукцинимидный эфир ди-бос-гистидина (2 3,используемые в качестве полупродуктов в пептидном синтезе,Однако указанные эфиры не устойчивы при хранении и поэтому не могут быть объектом товарного промышленного производства. Кроме тогб,известные производные гистидина трудно кристаллизуются и их получают снедостаточно высоким выходом. Цель изобретения - расширениеассортимента полупродуктов пептидного синтеза с улучшенными свойствами.Поставленная цель достигается новыми активированными эфирами в(, йф ди-трет-бутилоксикарбонилгистидинаобщей Формулы 1, которые получают пу тем взаимодействия ди-БОК-гистидинас пенталоидфенолом в присутствии конденсирующего реагента. В качестве конденсирующего реагента используют дициклогексилкарбодиимид (ДЦГК). Чтобы при получении эфиров наряду с образованием эфирной связи происходило образование комплекса пентагалоидфенола с имидазолом, фенольную компоненту необходимо брать в избытке, достаточном для протекания обоих процессов.При одномолярном соотношении компонентов, достаточном только для об" раэоваиия эфира, получаются Масло образные, не кристаллизующиеся продукты. Вместо раздельного введения в реакцию пентагалоидфенола и ДЦГК можно применять известные комплексные соединения ДЦГК ЗСЬХ 5 ОН (Х= хлор 30 или Фтор), 9793415-ным раствором триэтиламина в хло роформе, хлороформом и хлористымметиленом (Зх 15 мл). Добавляют растворы Иф бензилоксикарбонил- Ь-фенилаланина (0,5 г) и 0,4 г ДЦГК в хлористом метилене и суспензию перемешивают 16 ч. Т 1 ептидил-полимер фильтру 65 ют, промывают хлороформом, метаноВыделение новых активированныхэфиров из реакционной смеси не представляет трудностей и производитсяобычным методом экстракции и промывок. ЦеЛевые продукты легко кристаллизуются в хроматографически и аналитически чистом виде из петролейного эфира или гексана.П р и м е р 1. Комплекс пентафторФенилового эфира И, И-ди-БОК-Ьгистидина с пентафторфенолом.К охлажденному до +3 С раствору1,8 г (4,1 мМ) кристаллического ком(плекса ди-БОК-Ь-гистидина с бензолом в 10 мл тетрагидрофурана добавляют охлажденный раствор 4 г (5,3 мМ)кристаллическогО комплекса ДЦГК хЗСьРОН в 20 мл в том же растворителе, смесь выдерживают 1 ч при +5 ОСи 5 ч при -20 С. Добавляют 20 млводы, отделяют осадок дициклогексилмочевины и раствор упаривают в вакууме до половины объема. Остатокразбавляют этилацетатом, промываютводой, рассолом, высушивают ЯадБО 4и упаривают в вакууме. Остаток растирают в гексане, кристаллическийосадок отфильтровывают, промываютгексаном и высушивают в вакууме надРОи КОН. Получают 2,8 г (95,7)целевого продукта с тпл. 99-100 С.с(фС (с 1, диоксан).Найдено, : И 6,19, Г 2.7,04.Св Н 25 И 301 РоВычислено, : Б 5,95, Г 26,93.П р и м е р 2, Комплекс пентаФторфенилового эфира И, М-ди-БОКгистидина с пентафторфенолом.Соединение получают из ди-БОК-Р-гистидина в условиях примера 1,Выход 71, т.пл, 98-99 С,(Ы 3+8,0 С(с 1, диоксан).П р и м е р 3. Комплекс пентахлорфенилового эфира И ,И -ди-БОК-Ь-гистидина с пентахлорфенолом.К охлажденному до +3-5 С раствору 2,1 г (4,8 мМ) кристаллическогокомплекса ди-БОК-Ь-гистидина с бенэолом и 2,5 г (11 мМ) пентахлорфенола в 15 мл тетрагидрофурана добавляют раствор 1,1 г (5,3 мМ) ДЦГК в5 мл тетрагидрофурана и смесь перемешивают 1 ч при +5 С и выдерживают16 ч при 20 С. Выделение продуктареакции производят в условиях примера 1. После кристаллизации из петролейного эфира осадок на фильтрепромывают гексаном, высушивают ввакууме и получают 3,9 г 92,5 целевого продукта с т.пл. 104-105 С .е 3-9,9 С (с 1, диоксан),Найдено, : С 38,70; Н 2,981И 4,89; СР 39,96.СН 5 Н,О.,С ,Вычислено,С 38 рб 51 Н 2 р 89;4,83; С 40,75.П р и м е р 4. Метиловый эфир Ф-БОК-Ь-гистидил-Ь-лейцина,К суспензии 1,8 г хлоргидрата метилового эфира Ь-лейцина в 20 мл тетрагидрофурана добавляют 1,1 мл Н-ме-тилморфолина и раствор 5,0 г комплекса пентафторфенилового эфира ди БОК-Ь-гистидина с пентафторфеноломв 15 мл тетрагидрофурана. Смесь перемешивают 5 ч, дважды добавляют по0,3 мл И-метилморфолина, фильтруют,упаривают в вакууме, остаток раство ряют в этилацетате,(-30 мл), растворпромывают водой, 5-ным раствором лимонной кислоты, 1 М КНСОЗ, водой,рассолом, высушивают ИаБОд и упаривают в вакууме. В остатке получаютметиловый эфир ди-БОК-Ь-гекстидил-Ь-лейцина в виде подвижного масла.Дпя снятия И и-БОК-группы остатокрастворяют в 25 мл метанола, добавляют 5 мл диэтиламина и смесь кипятят 1,5 ч с обратным холодильником(или оставляют на 16-20 ч при 25 С).Раствор упаривают, остаток растворяют в 20 мл смеси этилацетата иэфира (1:1) и отфильтровывают сольциэтиламина и пентафторфенола. Фильтрат промывают водой и пептид извлекают 10-ным раствором лимоннойкислоты (3 раза по 15 мл). Кислотныйэкстракт подщелачивают твердым ИаСОзи пептид экстрагируют этилацетатом(2 н 25 мл). Экстракт промывают водой,рассолом, высушивают ИаБО и упариваютОстаток в виде смолы кристаллизуют из смеси диоксана с циклогексаном, Кристаллический осадок отЗ 5 Фильтровывают, промывают гексаноми после высушивания получают 2,3 г(85) целевого дипептида с т,пл, 116118 С,(Ы 1 -30 С (с 1, С 2 Н 6 ОН).Лит,данные: выход 57, т,пл. 11540 117 С ГЗ 3.П р и м е р 4. И -бензилоксикарЫбонил-Ь-фенилаланил-Р-гистидил-Ь-лейцин.1,0 г хлоргидрата Ь-лейцилполиме ра (сополимер стирола с 1 дивинилбензола, 1 мМ лейцина) промывают 5 ным раствором триэтиламина в хлороформе, хлороформом и хлористым метиленом (315 мл), смешивают с раство(З ром 1 г (1,4 мМ) комплекса пентафторфенилового эфира ди-БОК-Р-гистидинас пентафторфенолом в 20 мл хлористого метилена и смесь перемешивают 5 ч,Защищенный дипептидил-полимер про мывают хлороформом (Зк 15 мл), 30 мл1 М НС 0 в уксусной кислоте и выдерживают в 40 мл 1 М НС 9 в уксусной кислоте 1 ч. Полимер моют хлороформом,(СН) 606 МКЖСОб 6 Х 5нй1=Н 0С,Х,ОН 1( жоеск,),г 55 ВНИИПИ Заказ 9268/1 Тираж 445 Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 лом (315 мл) и суспендируют в 20 млметанола. Добавляют 1,5 мл 1 М раствора КаОН и перемешивают 16 ч. Полимер отфильтровывают, промынают метанолом (Зф 15 мл) и фильтрат упаривают до объема 10 мл. Добавляют1 мл ледяной уксусной кислоты и упаривают досуха. Остаток промынают водой, смолообразную массу растворяютн изопропиловом спирте, упаривают,остаток снова растворяют в иэопропилоном спирте (5 мл) и разбавляют эФиром. Белый творожистый осадокотфильтровывают, промывают эфиром ивысушивают в вакууме. Получают 0,3 г,Хроматографически гомогенного целеного продукта с т.пл133-135 С.Ге(70-23,4 С (с 1, ДМФ) . Н 06(1 илуфол, хлороформ-метанол-конц,МН,ОН 40:101).Найдено, Ф: С 63,51; Н 6,05; 20М 12,90.Вычислено, %: С 63,271 Н 6,36;И 12,72,П р и м е р 5. и-Нитроанилид 25И-трет-бутилоксикарбонил-Ь-гистидил-пролина.Раствор 0,27 г п-нитроаналидаЬ-пролина, 0,8 г комплекса пентахлорфенилоного эфира ди-БОК-Ь-гистидина с пентахлорфенолом и 0,15 гИ-оксибензотриазола в 5 мл ацетонитрила перемешивают 6 ч, разбавляют водой до 20 мл, экстрагируютэтилацетатом (Зк 15 мл), экстракт 35промывают 1 М раствором КСО(ДлЯ снЯтиЯ И БОК ГРУппы) и ос 40тавляют на ночьМетанол упаринаютн вакууме, остаток снова растворяютн метаноле, раствор подкисляют дорН 2 0,5 н НБО 4 и экстрагируют эфиром (2 к 10 мл), Эктракт промывают455 мл 0,5 н Н ЯО 4, сернокислотныйраствор подщелачинают твердым ИаНСОЗи оставляют до полной кристаллизации продукта. Осадск отфильтровывают,промывают водой и высушивают, Получают 0,35 г (74) целевого продукта с т.разл. 130-135 С. После повторного переосаждения из разбавленнойкислоты содой т,разл. 140 С,ас 70-23 с (с 1, ДмФ), н 0,64 (ф силуфол ацетонитрил-конц. ЙН 4 ОН9:1) .Найдено, %: С 55,70; Н 5,601Ы 17,57.С 2 Н дчЧьОь. Вычислено, %: С 56,04; н 5,77;М 17,82.Таким образом, пентафторфениловыйэфир ди-БОК-гистидина можно применятьн пептидном синтезе как классическимметодом н растворе, так и применениемтнердофазного носителя,Данные соединения получают с высоким ныходом (ныше 90), в то время как известные аналогичные производные гистидина трудно кристаллизуются и получены с более низкимивыходами (и-нитрофенилоный эфир ди-БОК-гистидина 65)17, К-оксисукцинимидный эфир ди-БОК-гистидина -78 27.Кроме того, в результате испытаний предлагаемых соединений установлено, что они в течение одного годапри комнатной температуре полностьюсохраняют кристаллическую форму спостоянной температурой плавления.Оба соединениячереэ год по даннымтонкослойной хроматографии в системах растворителей бензол-ацетон-уксусная кислота 10:5:1 содержат основного вещества не менее 98Т.е,указанные производные гистидина являются стабильными химическими реактивами для пептидного синтеза. Активиронанные эфиры И , Н -диЫ 1 ттрет-бутилоксикарбонилгистидинаобщей формулы где Х-Р, С 1,в качестве полупродукта для синтезади- и трипептидон.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Е.БсйпаЬе ег. а 2, 21 еЬ. Апп,СЬещ, 716, 175, 1968,2.Позднев В,ф Применение ди-трет-бутилирокарбоната для получения О-трет-бутилоксикарбонильныхпроизводных аминокислот. - Химияприродных соединений, 1974, с. 764,3. Позднев В.Ф. и др., СинтЕэ2-Ь-РПе-Ь-Ьец-субстрата карбоксикатепсина. - Химия природных соединений, 1975, с.637,