Способ получения метиловых эфиров октапептидов

СОЮЗ СОВЕТСКИСОЦИАЛИСТИЧЕРЕСПУБЛИК 09) 30 ПИСА БР Н К ПАТЕНТУ айаг оксиацетил;ТЬг(Ме), ТЬг,а ю щ и й о яного метиловогообщей формулы П 1 а,ем, чтоэфира ок" этли от защи тапепти 1 1 е-,2-Аг д (И О . Нз(Опр)р бе и Вг Оп е ХиХ, У име отщепляют д ную группу каптоэтанол тальные защ литического ЛОВЫулы-ОМе ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫ(72) Ольга Ньеки, Лайош КишфаЭгон Карпати и Ласло Спорни (В(71) Рихтер, Гедеон Ведьесети ДРТ (ВНР)(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕТЭФИРОВ ОКТАПЕПТИДОВ общей форХ-Аго-Ча Р-Туг- Ге-Нэ-Его-У 51 с о 7 С 103/52 // А 61 к 37/о(айаг", Тпг(Ме)-ангиотензина 11 12 12 20 Метиловый эфир ОС 1 у 1 11 е 6) -ангиотензина 11 20 10 Сарализин Составитель О, Галкин Техред Т.фанта Редактор М.Келемеш Корректор В.Гирняк Заказ 6961/бО Тираж 418 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушскаю наб., д 4/51 10410Изобретение относится к.сдособу . "получения новых соединений, а именно метиловых эфиров октапептидов,и может быть использовано в медицине. 5Известен способ получения пептидов путем отщепления динитрофенильной защитной группы .от соответствующего защищенного пептида в. средедиметилформамида под действием 2"мер 10каптоэтанола в течение 1,5-2,0 ч прикомнатной температуре 1 ,Известен также способ удалениязащитных групп в пептидах путем каталитического гидрогенолиза в водноорганической среде в присутствии103-ного палладия на активированномугле 2Цель изобретения - получение но-вых пептидов, обладающих ценными 20фармакологическими свойствами.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу получения метиловых эфиров октапептидов общей формулы 25Х-Агу-ЧаР-Туг е-Н 1 э-Рго-У-ОМе (1) 30(П) 35 40 45 50 где Х - 5 аг, оксиацетил;У -Ре, Тпг(Ме), ТЬг, АРа,от метилового эфира защищенногооктапептида общей формулыЕ-Агу(ИО 2) -Ча Р-Туг(Вг 2) -1 РеНэ(Опр) -Рго-У-ОМе,где 2 - бензилоксикарбонил;802 - нитрогруппа;.ВгР - бензил;Опр - динитрофенил;Х и У имеют указанные значения, отщепляют динитрофенильную защитную группу обработкой 2-меркаптоэтанолом, а затеи удаляют остальные защитные группы путем каталитического гидрогенолиэаИспользуемые в качестве исходных веществ метиловые эфиры октапептидов общей формулы ( П ) получают известными методами пептидной хи" мии путем ступенчатого наращивания пептидной цепи с использованием пентафторфениловых эфиров защищен" ных аминокислот 1 .Для защиты боковых функциональ-ных групп применяют защитные группы, стабильные в условиях ацидолиза, проводимого для отщепления защит" . ных групп после завершения реакции образования пептидной связи, Для временной защиты гидроксильной груя 30,2пы тирозина используют бенэильнуюгруппу (Вх 8), для защиты имидаэольного цикла.гистидина - динитрофенильную грулпу (Опр) и для защитыгуанидиногруппы аргинина - нитрогруппу (КО 2). Эти защитные группыустойчивы к действию кислот, вследствие чего трет-бутилоксикарбонильная группа (Вос), используемая длязащиты о-аминогрупп в, процессе наращивания пептидной цепи, отщепля"ется селективно без затрагиванияназванных защитных групп.Получение новых метиловых эфиров октапептидов общей формулы (1)иллюстрируется приведенными примерами, где сокращение НОАА " оксиуксусная кислота,Тонкослойную хроматографию проводят на пластинках с использованием следующих систем растворителей:1. Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20:6:11)=98:2,2. Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20:б;11)=95:5.3. Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20:б:11)=90:10,Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20:6:11)=80:20.5, Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20 6 11)=70 30.6. Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота " вода 20:б:11)=60:40,7, н-Бутанол:уксусная кислота:вода=4:1:5,8, н-Бутанол:уксусная кислота:пиридин:вода=30;б:20:24,9.н-Бутанол:этилацетатуксуснаякислота: вода=1: 1: 1: 1,10. н-Бутаэтилацетат:.(пиридинуксусная кислота - вода 20:6:11)== 75:25.Тонкослойные хроматограммы проявляют нингидрином или раствором хлортолидин с йодистым калием.Очистку целевых продуктов проводятобщепринятым методом: 0,5 г пепти-,да в 4 мл 0,01 М раствора ацетатааммония пропускают через колонку,содержащую 0,5 л карбоксиметилцел"люлозы (СМС) и предварительно уравновешенную 0,01 М раствором ацетатааммония. Продукт очищают градиент"ным элюированием с использованием1,5 л.0,01 М раствора ацетата аммо 55 ния и 1,5 л 0,4 М раствора ацетатааммония. С корость элюирования 25 мл/ч,Собирают фракции по 10 мл и детектируют с помощью прибора "ЕКВ Оч 1-3 1041согд 11". Очищенный целевой продуктполучают лиофилизацией основной фракции,П р и м е р 1, Метиловый эфир(Баг 1,Ре ) -ангиотензина 11.Стадия 1. Вос-Агд(йО) -Ча Р-Туг(Вай)Юе-Н 1 з(Опр)-РгоЮе-ОМе.К 1,36 г Г 7,5 ммоль) хлоргидрата метилового эфира изолейцина в30 мл хлороФорма добавляют 1,05 мл 1 птриэтиламина и 1,90 г (5 ммоль) пен-тафторфенилового эфира БОК-пролина,Смесь перемешивают 30 мин при посто, янном рН и экстрагируют водой,10-нымводным раствором лимонной кислоты и:водой. Органический слой сушат надсульфатом натрия и упаривают. Полу":ченный в остатке защищенный дипептид(Я =0,8) растворяют в 5 мл 8 н, соИ)ляйой кислоты в диоксане. Через15 мин раствор разбавляют 20 мл безводного эфира и упаривают, Получен-ный в остатке хлоргидрат дипептида(Уформа, добавляют триэтиламин дорН 8 и 4,36 г (7,5 ммоль) пентаФторфенилового эфира БОК-гистидина,Через 1 ц к раствору добавляют0,83 мл й,й-диметиламиноэтиламинаи через 15 мин .экстрагируют 10-нымводным раствором лимонной кислоты,насыщенным раствором хлористогонатрия, 1 н. раствором соляной кислоты, 5-ным водным раствором бикарбоната натрия и водой, Органическую фазу сушат над сульфатомнатрия и упаривают, Полученный востатке защищенный трипептид (Я=2)=0,45) без очистки растворяют в10 мл 8 н, раствора соляной кислоты .в диоксане. Через 15 мин растворразбавляют безводным эфиром, выпав-ший в осадок хлоргидрат свободноготрипептида отфильтровывают, промы-:вают эфиром и растворяют в 15 млдиметилформамида. К полученному раствору добавляют триэтиламин до рН В .и 2,4 г (6 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-изолейцина. Смесь вы"держивают 30 мин при постоянномрН и упаривают. Остаток растворяютв этилацетате. Раствор промывают104-ным водным раствором лимоннойкислоты, .1 н, раствором соляной ки:слоты, водой, сушат над сульфатомнатрия и упаривают. Остаток растирают со смесью эФир - гексан (1;9),и отфильтровь 1 вают, Полученный за"щищенный тетрапептид (Я,31) ра"(21 створяют в 7 мл 8 н, раствора соляной кислоты в диоксане, Через 15 мин добавляют безводный эфир и выпавщий при этом в осадок хлоргидрат свободного тетрапептида отфильтровыва ют. Полученный тетрапептид (1=0,38) растворяют в смеси, состоящей из 10 мл диметилформамида и 20 мл хлоро. форма, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,96 г (5,5 ммоль) пентафторФенилового эфира БОК-бензил-тирозина. Смесь выдерживают при постоян" ном рН 15 мин и упаривают. Остаток растворяют в этилацетате, добавляют 0,22 мл й,й-диметиламиноэтиламина и через 10 мин промывают 104-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты и водой, Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают, Полученный защищен" ный пентапептид (Я =0,52) растворяют в 10 мл 8 н, раствора соляной кислоты в диоксане, через 15 мин добавляют безводный эфир и выпавший осадок отфильтровывают и промывают эфиром, Полученный хло)ргидрат свободного пентапептида (Ф 5 - 0,8) растворяют в 20 мл диметил ормамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,3 г (6 ммоль) БОК-пентафторфенилового эфира БОК-валина. Смесь выдерживают при постоянном рН 1 ц и упаривают., Остаток растворяют в хлороформе и по"луценный раствор промывают 104-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н, раствором соляной кислоты, водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Полученный защищенный гексапептид (Я 0,43) растворяют в 8 н, растворе соляной кислоты в диоксане, через 15 мин добавляют безводный эфир и выпавший осадок отфильтровы- вают и,промывают эфиром, Полученный хлоргидрат свободного гексапептида растворяют в 15 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,6 г (6 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-й 6-нитроаргинина. Смесь выдерживают при постоянном рН 30 мин, добавляют 45 мл хлороформа, промывают 1 н. раство" ром соляной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают.Остаток растирают с этилацетатом и отфильтровывают.ф1041030 30 5Получают 3,3 г Вос-Агд-(10)- ЧаР-Туг-(Вл Р) -1 Ре-Н 1 з(Опр) -Рго- Ве:ОМе (выход 513 от теоретического в расчете на исходное соединениепентафторфениловый эфир БОК-про-лина), 10 37.Стадия2-Заг-Агд(ЙО)"ЧаФ" Туг(Зг Р) -Ме-Н 1 з(Опр) -Рго- Ре"ОМе.3,3 г (2,5 ммоль) метилового эфира Вос-Агд(ЙО) -Ча К-Туг(Вк Р),-1 Ре Нз(Опр)-РгоРе растворяют в 15 мл, 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 20 мин добавляет без" водный эфир, выпавший продукт отфиль" тровывают и промывают эфиром. Полу ченный хлоргурат свободного гептапептида (й =0,7) растворяют в(15 мл диметилформамида, добавляюттриэтиламин до рН 8 и 2,4 г(6 ммоль) пентафторфенилового эфира 2-5 аг. 20 Смесь выдерживают при постоянном рН 30 мин, добавляют 45 мл хлороформа, промывают 1 н. раствором со" ляной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Ос."25 таток растирают .с этанолом и отфильровывают. Получают 3, 17 г (893 от теоретического) защищенного октапептида2-айаг-Агд(ЙО)-Ча 1-Туг(Вг 1)-11 еНз(Опр)-Рго"11 е-ОМе. Т.пл. 197"209 С. В 0,82.Г - Стадия 3, Удаление защитныхгрупп. 352,59 г (1,83 ммоль) 2-Ьаг-Агд(ЙО)Ча 1-Туг(Вл)-11 е-Н 1 з(Опр)-Рго1 еОМе растворяют в 5 мл диметилформамида и к раствору добавляют 4,6 мл2-меркаптоэтанола, Смесь перемешивают 1 ч и добавляют .безводныйэфир. Выпавший осадок отфильтровы"вают. Получают 2,0 г (87 от теоре"тического) Е"Баг-Агд(ЙО )-Ча-,Туг2,ц(Вг 1) "11 е-Н 1 з-Ргое-ОМе (Ф-О 42) 45Продукт растворяют в 40 мл смеси метанол - уксусная кислотавода 5:1:1, добавляют 1,0 г 10-ного палладия на активированном угле и через раствор в течение 20 чпри интенсивном перемешивании пропускают водород. Затем катализаторотфильтровывают, фильтрат унаривают,Остаток смешивают с водным этаноломи упаривают. Операцию повторяют не"сколько раз, Затем остаток растирают с безводным эфиром, отфильтровывают и сушат,6Получают 1,56 г (984 от теоретического) метилового эфира (айаг ", 11 е 0)-ангиотензина 1, Продукт очищают как описано выше.Конечный продукт имеет следующие характеристики: 1 ф.0,19- 059 йф 0 38; Е (рН=1 9):1,00.Аминокислотный анализ: Рго 1,07(1) Ча 1,9 (1); Туг 0,8 (1)Нз 1 ОЗЬ 1) Агд 1,0 (1); 11 е 1,87 (2); Ьаг 1,0(1)П р и м е р 2, Метиловый эфир (ОСу", 11 е )-ангиотензин 11.Стадия 1. 2"00 у-Агд(ЙО)-Ча 1- Туг(Вг 1)-11 е-Нз(Опр)-Ргое"ОМе.1,5 г (0,8 ммоль) Вос-.Агд(ЙО)- .Ча 1-Туг(Вг 1)-11 е-Н 1 з(Опр)-Ргое-ОМе (например 1, стадия 1) растворяют в 6 мл 8 н. раст вора соляной кислоты в диоксане, через 20 мин добавляют безводный эфир, выпавший продукт отфильтровывают, Полученный хлор- гидрат свободного гептапептида (Р= щ 0,7) растворяют в 10.мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 046 г (1,17 ммоль) пентафтор" фенилового эфира 2-ОСу, Через 30 мин добавляют к смеси 30 мл хлороформа, промывают 104-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н, раствором соляной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают.Получают 1,05 г (93 от теоретического) 2-06 у-Агд(ЙО)-Ча 1-Туг(Вл 1) 1 е-Н 1 з(Опр)-Ргое-ОМе Т.пл. 140- 145 С; Р 1=0,24.Стадия 2, Удаление защитных групп.1,05 г (0,74 ммоль) Еу-Агд(Й 02) Ча 1-Туг(Вг 1)-11 е-Н 1 з(Опр)-Ргое-ОМе растворяют в 5 мл диметилформамида, к раствору добавляют 2,3 мл 2-меркаптоэтанола, через 2 ч добавляют безводный эфир, выпавший продукт отфильтровывают, промывают эфиром. Получают 0,85 г (853 от теоретического) Еу-Агд(ЙО 2)-Ча"Туг(Вя 1)- 1 е-Нз"Рго-е-ОМе (-0,40), 0,75 г (0,6 ммоль) этого продукта растворяют в 20 мл смеси метанол- уксусная кислота - вода (5:1:1), добавляют 0,8 г 10-ного палладия на активированном угле и через раствор в течение 18 ч при интенсивном перемешиваниипропускают водород, Затем катализатор отфильтровывают, .Фильтрах упаривают. Остаток смешивают с водным этанолом и упаривают. Операцию повторяют несколько раз. Затем остаток растирают с,.безводным эфиром, отфильтровывают и сушат.7 1.041030, 8гПолучают 0,48 г (82 от теорети-ты в диоксане, Через 15 мин добавческого) метилового эфира (ОС 1 у 11 е 8),ляют безводный эфир, выпавший проангиотензина 11, который очищают дукт. отфильтровывают и промывают как описано выше. эфиром. Полученный продукт (В27)о1 зКонечныи продукт имеет следующие 5 растворяют в 1 О л диметилформамидар, ВВ-.0 60.характеристики: В -0,29 з И-Оф 72 в, . " добавляют триэтиламин до рН 8 и-0 р 60. ,2,7 г (5 ммоль) пентафторфениловогоАминокислотный анализ: Рго 1,0 (1:) эфира БОК-О.-бензил-тирозина, выдер. Ча 1 1,0 (1); 11 е 1.,7 (2); Туг 0,88(1) живают 30 мин при рН 8, упаривают, Н 1 з 1,02 (1); Агд 0,96 (1), 10 остаток растворяют в этилацетате. КП р и м е р 3, Иетиловый эфир .полученному раствору добавляют (Яаг", ТЬг(Ме)В)-ангиотезина 11, . 0,11 мл М,М-диметилэтиламина и черезтадия 1. Е-Яаг -Агд(МО)-Ча 1- : 15 мин промывают 103-ным водным ра Туг(Вг 1)-11 е-Н 1 з(Опр)-Рго-ТЬг(Ме)-ОИе створом лимонной кислоты, насыщен 0,68 г (4,5 ммоль) метилового , 15 ным раствором хлористого натрия и эфира 0-метил-треонина растворяют в . водой, сушат над сульфатом натрия и 10 мл хлороформа и добавляют 2,28 гупаривают, Полученный в остатке за- (6 ммоль) пентафторфенилового эфира щищенный пентапептид (В=Оз 51) ра- ,. БОК-пролина. Раствор выдерживаютстирают . с безводным эфиром, отфиль мин при постоянном рН 8 и упари тровывают и растворяют в 5 мл 8 н. вают, Остаток растворяют в этилаце- . . раствора соляной кислоты в диоксане, тате, добавляют 0,22 мл М,М-диметил-,через 15 мин добавляют безводный аминоэтиламина и через 15 мин промы-, эфир, выпавший продукт отфильтровы"гт огтвают 104-ным водным раствором лимон-. вают, промывают эфиром. Полученный ной кислоты, насыщенным раствором 25. хлопгидрат свободного пентапептиЯда хлористого натрия, 1 нраствором(В =0,48) растворяют в 20 мл дисоляной кислоты и водой, сушат надметилформамида, добавляют триэтилсульфатом натрия и упаривают. Полу-, амин до рН 8 и 1 з 9 г (9 ммоль).пениенный защищенный дипептид (ЙБО 6) тафторфенипового эфира БОК-варина. растворяют в 3 мл 8 н, раствора со- З 0 Раствор, выдерживают 30 мин при рН 8, ляной кислоты в диоксане. Через . упаривают, остаток растворяют вхло мин добавляют безводный эфир и роформе, промывают сушат иупаривают. упаривают. Полученный хлоргидрат своа Остаток растирают с безводным1%бодного дипептида (В =0,18) раст- - эфиром и отфильтровывают, Полуворяют в 10 мл диметйлформамида, : ценный защищенный гексапептид добавляют триэтиламин до рН и 2,95 г .: .(К =0,44) растворяют в 1 О мл 8 н,35 -е(5 ммоль) пентафторфенилового эфи- : раствора соляной кислоты в диоксаа БОК-М" динитрофенил-гястидина.не и через 15 мин добавляют без 1 ЩРаствор выдерживают 30 мин при рН 8 ." водный эфир, выпавший продукт отфиль упаривают и остаток растворяют в этил тровывают и промывают эфиром. Полуацетате. К раствору добавляют О,1 м, . ченный хлоргидрат свободного гекса- М,М-диметиламиноэтиламин, через ф пептида (1=0,36) растворяют в 10 мин промывают 104-ным водным15 мл диметилформамида, добавляют раствором лимонной кислоты, насыщен-:,. триэтиламин до рН 8 и 2,25. г (5 ммоль) ным раствором хлористого натрия и , пентафторфенилового эфире БОК-М 45водой, сушат над сульфатом натрия и . -нитроаргинина. Раствор выдерживают упаривают, Полученный защищенный,ч при рН 8 разбавляют хлороформомЩ.3 трипептид (к -Оз 3) растворяют в 10 ил и обрабатывают как описано выше. диметилфор.;амида, добавляют триэтил-Полученный в остатке продукт расти- амин дорН 8 и 2;0 г (5 ммоль) пен- ; рают с этанолом и отфильтровывают, тафторфенилового эфира БОК-изолей- Получают 3,3 г (913 от теоретичес.50цина,выдерживают 30.мин при рН, 8кого выхода, рассчитанного на треои упаривают . Остаток растворяют:. нин) Вос-Агд (М 02) -Ча 1 -Туг(Вг 1) -1 1 ев этилацетате. Раствор промывают, -, Н 1 з(Опр)-го-ТЬг(ф)-ОМе. Т.пл, 188- сушат и упаривают, Остаток расти-193 С; В =0 38 ,В =0 87.ф 1рают со.смесью эфир - гексан 3;7 . 1,95 г (1,5 ммоЬь) вышеуказаннои отфильтровывают, Полученный . го метилового эфира защищенного гептетрапептид (В=0,28) растворяют тапептида растворяют в 10 мл 8 н, в 7 мл 8 н, раствора соляной кисло" раствора соляной кислоты в диокса40 9о 41 оне и через Яо мин осаждают добавлением безводного эфира продукт, который отфильтровывают и промываютэфиром. Полученный хлоргидрат свободного гептапептида 10,го;) раст(3воряют в 15 мл диметилформамида,добавляют триэтиламин до рН 8 и0,87 г (2,25 ммоль) пентафторфенилового эфира 2-айаг.Раствор выдерживают 1 ч при рН 8, 30разбавляют хлороформом и обрабатывают как описано выше,Получают 1,85 г (8 Д от теоретичес кого) метилового эфира защищенногооктапептида Е-айаг -Агд )302) -Ча 1-Туг 5(Й 1 -0,52), Полученный продукт растворяют в 30 мл смеси метанол - уксусная кислота - вода (5".1:1), добав. З 0ляют катализатор (303-ный палладийна активированном угле) и при интенсивном перемешивании в течение 30 чпропускают водород. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают. Остаток растирают со смесьюэфир - этанол (2:1) и отфильтровывают.Получают ООВВ г (ВВТ от теоретического метилоеого эФира (Вагт,Тйг(йе) )-ангиотенэина 11, которыйочищают как описано выше,Конечный продукт имеет следующие характеристики: В =0,29 ф=0,55; Кф 0,27.Аминокислотный анализ: Н 1 з 1,03(1);Агд 0,95 (1); 31 е 0,93 (1); Рго1, 03 (1); Ча 1 1, 15 (1); 3 1 е 1, 03 (1);Туг 0,9 (1); айаг 1,0 (1).П р и м е р 4. Метиловый эфир(пример 3, стадия 1) растворяют в4 мл 8 н, раствора соляной кислотыв диоксане и через 15 мин осаждают 30 1 Опродукт добавлением безводного эфира,отфильтровывают и промывают эфиром.Полученный хлорг)драт свободногогептапептида (К =0,35) растворяют(5в О мл диметилформамида, добавляюттриэтиламин до рН 8 и 0,8 г (2 ммоль)пентафторфенилового эфира Е-ОСу,Раствор выдерживаютч при рН 8,разбавляют 30 мл хлороформа и обрабатывают как описано, выше, Остаток растирают со смесью эфирэтанол (9:) и отфильтровывают.Получают 0,60 г (903 от теоретического) метилового эфира защищенного октапептида 2-ОСу-Агу(802)-Ча 3 Туг(Вг 3)-33 е-Н 3 з(Опр)-Рго-ТЬг(Ме)-ОМе.пл, 58-362 С0 44,Стадия 2. Удаление защитных групп,3) уб г (0,42 ммоль) Е-ОСу-АгдНО 2)Ча 3 -Туг(Вг 3) -. 3 3 е-.Н 3 з(опр) -Рго-ТЬг (Ме)ОМе растворяют в 2 мл диметилформамида, к раствору добавляют 1,2 мл2-меркаптоэтанола, черезч добавляют безводный эфир, выпавший продукт отфильтровывают,. растворя)т вметаноле. Раствор обрабатывают активированным углем, фильтруют и упаривают, Остаток растирают с эфироми отфильтровывают, Получают 0,46 гЕ.-ОСу-Агд(3130)-Ча 3-Туг(Вг 3) -1 еНз-ТЬг(Ме)-ОМе. К=О,6; В(0,52,Продукт растворяют в 25 мл смесиметанол - уксусная кислота - вода(5: 1:1), добавляют 0,3 г 10-ногопалладия на активированном угле ипри интенсивном перемешивании пропускают в течение 17 ч водород. Затемкатализатор отфильтровывают, фильтратупаривают, Остаток смешивают с водным этанолом и упаривают Операциюповторяют несколько раз.Получают 0,32 г (91/ от. теоретического) метилового эфира (ОС 3 у 3,Аа)-ангиотензина 11, который очищает как описано выше. СКонечный продукт имеет следующйЬхарактеристики; М=0,22 т Ф =0,73;й =О, 56,Аминокислотный анализ: ТЬг 0,02(1)Рго 1,03 (1); Ча 1 1,0 (1); Н 1 в 1,0(1)Агд 1,0 (1).П р и м е р 5, Метиловый эфирна и.3,8 г (10 ммоль) пентафторфени- го эфира БОК-валина, Раствор выдержи.лового эфира БОК-пролина, : вают 1 ч при рН 8 и упаривают. Оста-.Раствор выдерживают при постоян- ток растворяют в хлороформе и растном рН 1 ч и обрабатывают как описа- вор обрабатывают. Остаток растираютно выше.,Полученный защищенный ди с эфиром отфильтровывают и промыва(э1пептид (8=0,77) растворяют в 20 мл , ют эфиром. Полученный защищенный гек8 н. раствора соляной кислоты в ди- сапептид (Р =0,55) растворяют воксане, через 15 мин добавляют без мл 8 н, раствора соляной кислоты вводный эфир, выпавший продукт отфиль диоксане, через.15 мин осаждают протровывают и промывают эфиром. Полу- -1 О дукт добавлением безводного эфира .у (5ченный продукт (1=0,2) растворяют продукт отфильтровывают, промываютв 30 мл хлороформа, добавляют. три-эфиром, Полученный хлоргидрат свободэтиламин до рН 8 и ,7 г (8 ммоль) ного гексапептида,(В =0,23) раст 3"Гфпентафторфенилового эфира БОК-М -ди . воряют в 20 мл диметилформамида,нитрофенил-гистидина, Раствор выдер добавляют триэтиламин до рН 8 иживают 1 ч при рН 8 и обрабатывают .1,8 гммоль) пентафторфенило. как указано выше. Полученный в остат вого эфира БОК-М-нитроаргинина.(Яке защищенныи трипептид ( 8=0,7) ;Раствор выдерживают 1 ч при рН 8,растворяют в 20 мл 8 н, раствора со- - упаривают, остаток растворяют вляной кислоты в диоксане и через - 20 хлороформе, раствор обрабатывают15 мин осаждают продукт, добавлением сушат и упаривают. Остаток расти безводного эфира, Полученный хлор- рают со смесью эфир - этанол (9:1),(5)гидрат свободного трипептида (й: =отфильтровывают и промывают выше=0,23) растворяют в 20 мл смеси хло". указанной .смесью.роформ .- диметилформамид (5: 1), до- -25Получают 2,7 г (26 от теоретибавляют триэтиламин до рН 8 и Й,О г : ческого выхода в расчете на гистидин)(10 ммоль) пентафторфенилового эфи- Вос-Агд(1102)-Ча 1-Туг(Вг 1)-11 е-Н 1 з(Опр)ра БОК"изолейцинаРаствор выдержи" Рго-ТЬг-ОМе. Т,пл, 190-195 С (разловают 30 мин при рН 8, обрабатывают, жения); В(41-0,47,Остаток растирают с гексаном и от- -З 0 Стадия 2. Еу-Агд(802)-Ча 1 фильтровывают, Туг(Вг 1)-11 е-Н 1 з(Опр)-Рго-ТЬг-ОИе.Полученный защищенный тетрапептид,. :1,7 г (1, ммоль)Ьос-Агд(М 02-Ча 1"(8+=0,5) растворяют в 15 мл 8 н. "Туг(Вг 1)-11 е-Н 1 з(Опр)-Рго-ТЬг-ОМераствора соляной кислоты в диоксане , растворяют в 10 мл 8 н. раствораи через 15 мин осаждают продукт до- . соляной кислоты в диоксане через351бавлением безводного эфира. Полу мин осаждают продукт добавлениемценный хлоргидрат,свободного тет- безводного эфира, Продукт отфильтроЬДрапептида (80,25) растворяют в : вывают и промывают эфиром. Получен 30 мл диметилформамида, добавляютный хлоргидрат свободного гептапептриэтиламин до рН 8 и 2,05 г 4 тида (К =0,21) растворяют в 20 мл(3,8 ммоль) пентафторфенилового эфи-: диметилформамида, добавляют триэтил.ра 0-бензил-тирозина. Раствор,выдер-амин до рН 8 и 0,82 г (2,1 ммоль)живают 30 мин при рН 8, упаривают,пентафторфенилового эфира 2-061 у.остаток растворяют в этилацетате.- Раствор выдерживают 30 мин приК полученному раствору добавляют " рН 8 разбавляют О мл хлороформа45У0,11 мл й,й-диметиламиноэтиламина и промывают 1 н, раствором солянойчерез 15 мин раствор обрабатывают. кислоты и водой, сушат .и упаривают,Остаток растирают с безводным эфи-Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Полученный за. ром и отфильтровывают,щищенный пентапептид (Р= 057) ра- Получают 1,6 г (87 от теоретистворяют в 10 мл 8 н, раствора соля- ческого) метилового эфира защищен 50ной кислоты в диоксане. Через 15 мин ного октапептида Еу-Агд(ЙО )- 2продукт осаждают добавлением безвод" , Ча-Туг(Вг 1)-11 е-Н 1 з(Опр)-Рго-ТЬгного эфира, отфильтровывают и промы ОМе, Т,пл. 188-19 С; 141-0,1(3. -вают эфиром. Стадия 3. Удаление защитныхПолученный продукт (8=0,27) ра групп.створяют в 20 мл диметилформамида, 1,6 г (1,2 ммоль)Еаг-Еудобавляют триэтиламин до рН 8 и Агд(1102) -Ча 1-Туг(Вг 1) -1 1 е-Н 1 з(Опр)1,75 г (Й,5 ммоль) пентафторфенилово. Рго-ТЬг-ОИе растворяют в 5 мл диме104103 13тилформамида, добавляют 3,8 мл2-меркаптоэтанола,Через 1 ч продуктосаждают добавлением безводного эфира. Продукт отфильтровывают и промывают эфиром, растворяют в метаноле 5и осаждают добавлением эфира.Получают 1,3 г (9 й от теоретического) 2-ОСу-Агд(МО )-Уа 1-Туг(Вг 1)- Ю, (УУ1 1 е"Нз-Рго"ТЬг-ОМе. Р= 0,35;Р-.-., .щ 0 72. 10Полученный продукт растворяютв смеси метанол " уксусная кислотавода(5:1:1), добавляют 0,6 г 104-ного палладия на активированном углеи при интенсивном перемешивании про.пускают в течение 17,ч водород. За. тем катализатор отфильтровывают,фильтрат упаривают, Остаток смешивают с водным этанолом и упаривают.Операцию повторяют несколько раз, Остаток растирают с эфиром, отфильтровывают и промывают эфиром,Получают 0,64 г метилового эфира(ОС 1 у ", ТЬг)-ангиотензина 11, который очищают как описано выше.Конечный продукт имеет следующиехаоактеристики: Р - 0,22 к 0,73;=0,96.Аминокислотный анализ: ТЬг 0,92(1)Рго 1,03 (1); Ча 1 10 (1); 11 е 1,5(1); 30Туг 0,7 (1); Н 1 з 1,0 (1), Агд 1,0 (1) П р и м е р 6. Метиловый эфир (Баг, А 1 а)-ангиотензин 11,Стадия 1. Еаг-Агд(ИО)-Ча 1- Туг(бя 1) -1 1 е-Н 1 з(Опр) -Рго-А 1 а-ОМе.350,7 г (5 ммоль) хлоргидрата метилового эфира аланина растворяют в 20 мл хлороформа, добавляют 0,7 мл триэтиламина и 1, 14 г (3 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-пролина. Раствор. выдерживают при постоянном рН 30 мин и .обрабатывают как описа, но выше. олученный защищенный дипептид (Р =0,61) растворяют в 5 млг45 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 10 мин. разбавляют безводным эфиром и упаривают. Полученный хлоргидрат свободного дипептида (Р=О,32) растворяют в 20 мл хлороформа, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,7 г (4,5 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-Идинитро" фенилгистидина, Раствор выдерживают1 ч при рН 8, добавляют 0,33 мл й,й"диметиламиноэтиламина и через 15 мин обрабатывают, сушат и упаривают. Полученный защищенный трипептид (к 0,27) растворяют в 10 мл 0 148 н, раствора соляной кислоты в диоксане, через 15 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира, Полученный хлоргидрат. свободного трипеп тида (Р=0,48) отфильтровывают,(31промывают эфиром и растворяют в смеси хлороформ .- диметилформамид (2:1), добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,4 г,(6 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-изолейцина, Раствор выдерживают 30 мин при рН 8 и упаривают Остаток растворяют в этилацетате и полученный раствор обрабатывают как описано выше, сушат и упаривают, Остаток растирают со смесью эфиргексан (1:9) и отфильтровывают, По(21 лученный защищенный тетрапептид (Р = 0,29) растворяют в 1 О мл,8 н. раствора соляной кислоты в диоксане и через 1 О мин осаждают продукт добавлением безводного эфира. Полученный хлоргидрат свободного тетрапепЬтида (Р=0,67) отфильтровывают, промывают эфиром, растворяют в смеси хлороформ - диметилформамид (2:1), прибавляют к раствору тризтиламин до рН 8 и 1,78 г (3,3 ммоль 1 пентафторфенилового эфира БОК-бензил-тирозина. Раствор выдерживают 15 мин при рН 8 и упаривают, Остаток растворяют в этилацетате и раствор обрабатывают, сушат и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают, Полученный защищенный пентапептид (Р 0,33) раст. воряют в 10 мл 8 н, раствора соляной кислоты в диоксане и через 10 мин осаждают продукт добавлением безвод.- ного эфира, Полученный хлоргидрат свободного пентапептида.отфильтровывают и растворяют в 20 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 1,55 г (4 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-валина. Раствор выдерживают 1 ч при рН и упари- . вают. Остаток растворяют в хлороформе и раствор обрабатывают сушат и упаривают. Остаток растирают с беэвод-. иым эфиром и отфильтровывают. Полую,гд ценный защищенный гексапептид (к= 0,35) растворяют в 8 мл 8 н, раст-вора .соляной кислоты в диоксане и че- рез 20 мин осаждают продукт добавле" нием безводного эфира. Полученный хлоргидрат свободного гексапептида (1"075) отфильтровывают, промывают аиром, растворяют в 20 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин ,до рН 8 и 2,64 г (б ммоль) пентафтор45 15 1 аЦ 10фенилового эфира БОК-М-нитроаргинйнаРаствор выдерживают 1 ч при рН 8, разбавляют 60 мл хлороформа,обрабатывают, сушат и упаривают, Остатокрастирают со смесью этанол - эфир 5(8=0,35) растворяют в 10 мл 8 н.раствора соляной кислоты в диоксане,через 15 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира. Полученныйхлоргидрат свободного гептапептида(йй=0,15) отфильтровывают, промывают эфиром, растворяют в 20 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин 15до рН 8 и 1,27 г (3 й 3 ммоль) пента"фторфенилового эфира Е-айаг.Раствор выдерживают 15 мин прирН 8, разбавляют 60 мл хлороформаи обрабатывают,.сушат и упаривают. : 20ОстатЬк растирают с 25 мл этанола,отфильтровывают и промывают.этанолом;Получают .1,37 г (334 от теоретического выхода в расчете на пролин).Л-Баг-Агу(Н 0,2)-Ча 1-Туг,(Вк 1.)-11 е-25Н 1 э(Опр)-Рго-Аа-ОМе. Т.пл. 192-196 ССтадия 2. Удаление защитных групп,1,37 г (1 ммоль) Е-айаг-Агу(МО)Ча 1-Туг(8 г 1)-11 е-Н 1 з(Опр)-Рго-А 1 а- ; 30ОМе растворяют в 3 мл диметилформамида, добавляют 1,9 мл 2-меркапто"этанола и через 1 ч добавляют безводный эфир, Выпавший продукт отфильтровывают и промывают эфиром,Получают 1,2 г (993 от теоретического) Е-Ьаг-Агц(НО)-Ча 1-Туг(Ве 1)11 е-Н 1 з-Рго-А 1 а-ОМе (Ф 4-.0 20).еПолученный продукт растворяютв 20 мл смеси метанол - уксусная 40кислота - вода (5:1:1),добавляют0,6 г 103-ного палладия на активированном угле и при интенсивном перемешивании в течение 20 ч пропускаютводород. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают, Ос"таток смешивают с водным этаноломи упаривают, Операцию повторяютнесколько раэ. Остаток растираютсо смесью этанол - эфир (1: 1) и отфильтровывают.Получают 0,7 г (753 от теоретического) метилового, эфира (Баг",А 1 аВ)-ангиотензина 11, который очи-.,щают как описано выше,30Конечныи продукт имеет следующиехарактеристики: В =0,23 В.0,5 ч;Аминокислотный анализ: Нз 0 р 97(1),Агу 1,03 (1); Рго 1,06 (1); Ча 1 1,03 (1), 1 1 е 0,98 (1); Туг 0,6 (1); Яаг 1,0 (1)Описываемые метиловые эфиры октапептидов общей формулы изучены какантагонисты природного гормона ангиотензина 11,Антагонистическое действие новыхсоединений общей формулы (1 ) исследуют на наркотизированных котах. Приисследовании блуждающие нервы живот"ных подрезают на обеих сторонах шеии после блокирования нервных узловвводят животным гипертензии ("СЬа")путем вливания со скоростью0,5 г/кг/мин, После стабилизацииповышенного кровянного давления жи-вотному вводят внутривенно или под-кожно исследуемое вещество в Физиологическом растворе и измеряют вы"званное введением вещества уменьшение кровяного давления. Снижениекровяного давления регистрируетсяв миллиметрах ртутного столба и впроцентах начального значения давления, измеренного до введения исследуемого вещества. Под продолжительностью действия отдельных исследован"ных .соединений понимается время домомента значительного понижения кровяного давления (Р=,53). Для сравнения приведены данные, полученныепри использовании известного антагониста ангиотензина 11 - сарализина,Полученные результаты представлены в таблице.Из таблицы следует; что предлагаемые соединения при внутривенном вве"дении существенно снижают кровяноедавление.При подкожном введении метиловыеэфиры октепептийое общей фориупытакже проявляют способность снижатьэкспериментально вызванное повыше,3ние. кровяного давления. Укаэанные соединения могут найти применение в терапии как средства, понижающие кровяное давление.