Способ получения 4, 5-3ндокозагексаеновой и 5, 6-3н тимнодоновой кислот

ОЕ АГЕНТ СТ И ТОВАРНЫМ АКАМ 1 г) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ 2) 09.08,88 М к авторскому свидетельст(71) Институт биологии моря Дальневосточного отделения АН СССР(56) Мягкова Г,И. и др, Синтез (8 х, 11 г,14 г)-эйкозатриен-иновой (5,6-дегидроарахидоновой) кислоты и ее превращение в5,6- Н 1 арахидоновую кислоту, 5,6- Нпроз зстагландины Ег и Е 2 а. - Биоорганическаяхимия, 1987, т,13, М 3, с.415-419.(57) Изобретение касается меченных тритием органических веществ, в частностиполучения 4,5 - Ндокозагексаеновой и5,6 - Н 1 тимнодоновой кислот, которыемогут быть использованы при изучениисинтеза лейкотриенов, Цель - создание новым способом новых селективных, меченных тритием по 4,5- и 5,б-положениямполиеновых кислот, Синтез ведут из смесижирных кислот, полученных гидролизом жира сардины иваси, Эту смесь суспендируют в водном растворе К 2 СОз с последующим добавлением тетра гидр оф урана, иодида калия и иода и перемешиванием этой смеси. Далее ее подвергают разделению хроматографией с выделением иодлактонов докозагексаеновой и тимнодоновой кислот, которые отдельно эпок сидируют гидроокисью лития в смеси тетрагидрофурана и воды. Полученные эпоксикислоты этерифицируют диазометаном с последующей обработкой КВг в СНзСООН и окислением реактивом Джонса до эфиров бромкетокислот. Их обрабатывают тозилгидразином и дебромируют с получением метиловых эфиров кислот, которые гидролизуют с помощью гидроокиси лития с выделением соответствующих ацетиленовых кислот и восстановлением их газообразным тритием на катализаторе Линдлара в диоксане (соотношение катализатора и вещества 2: 1) при давлении 400 ГПа в течение 25 мин при комнатной температуре. Общий выход целевых кислот 15,3 и 9,12%, молярная радиоактивность 1,85 ГБк/моль, 1631942Предлагается новый способ получения новых меченных тритием соединений - 4,5Н ) докозагексаеновой и 5,6 - Н ) тимнодоновой кислот, которые могут найти применение в медицине,Цель изобретения - поиск нового способа получения новых, селективно меченных тритием по 4,5- и 5,6-положениям полиеновых кислот,Пример 1, Получение 5,6 - Н3 тимнодоновой кислоты,Смесь свободных жирных кислот, полученных омылением жира сардины иваси в количестве 2,6 г с содержанием тимнодоновой кислоты 12 суспендируют в растворе 0,75 г бикарбоната калия в 10 мл воды при интенсивном перемешивании, затем добавляют 10 мл тетрагидрофурана, 1 г йодида калия, 2 г йода и перемешивают при 0 С в течение 10 ч. Затем добавляют 10 мл воды и 10 мл диэтилового эфира, органический слой отделяют, водный слой экстрагируют этилацетатом (3 х 30 мл), Органические слои объединяют, промывают насыщенным раствором тиосульфата натрия в воде (3 х 30 мл), затем водой (2 х 20 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (2 х 20 мл), высушивают над сульфатом натрия, Йод-лактон тимнодоновой кислоты выделяют колоночной хроматографией на 60 г силикагеля КСК (размер частиц 40 - 100 мкм). Элюиров ание проводят смесью гек сан диэтиловый эфир (6: 1 по объему) и выделяют 318,4 мг (80) йод-лактона тимнодоновой кислоты в виде светло-желтого масла.К раствору 318,4 мг йод-лактона тимнодоновой кислоты в 7,6 мл тетрагидрофурана добавляют 4,8 мл 0,2 н, гидроокиси лития. Реакционную смесь выдерживают 2,5 ч при 25 С, Затем смесь подкисляют до рН 2 - 3 10-ным раствором соляной кислоты, добавляют 20 мл воды и 20 мл диэтилового эфира. Органический слой отделяют, водный слой экстрагируют этилацетатом (3 х 30 мл). Объединенный экстракт промывают водой (2 х 20 мл), насыщенным раствором хлорида натрия (2 х 20 мл), высушивают над сульфатом натрия, упаривают в вакууме и получают 222,6 мг (94,1) 5,6-эпокситимнодоновой кислоты.Полученное соединение растворяют в 20 мл диэтилово го эфира, добавляют 10 мл эфирного раствора диазометана, выдерживают 20 мин и упаривают в вакууме, Получают 230 мг (99;4) метилового эфира 5,6-эпокситимнодоновой кислоты. Растворяют 230 мг метилов ого эфира 5,6-эпокситимнодоновой кислоты в 0,85 мл тетрагидрофурана и добавляют 15 мл насыщенного раствора 6 ромида калия в уксусной кислоте. Реакционную смесь выдерживают 3 ч при 25 С, после чего добавляют 25 мл воды и 25 мл диэтилового эфира. Органический слой отделяют, водный слой экстрагируют этилацетатом (3 х 25 мл), Объединенный экстракт промывают 10- ным раствором карбоната натрия (3 х 25 мл), водой (3 х 20 мл), насыщенным раствором хлористого натрия (2 х 25 мл), высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме, Получают 278,5 мг (95) метилового эфира бромгидринтимнодоновой кислоты.Полученное соединение растворяют в 5 мл ацетона, добавляют 2 мл стандартного реактива Джонса, выдерживают в течение 15 мин при 20 С, после чего добавляют 4 мл изопропанола и выдерживают еще 20 мин, затем упаривают в вакууме, Остаток растворяют в 30 мл диэтилов ого эфира, эфирный раствор высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме, Получают 257 мг (95,5;4) метилового эфира бромкетотимнодоновой кислоты,Метиловый эфир бромкетотимнодоновой кислоты с предыдущей стадии растворяют в 4 мл хлороформа, добавляют 15 мг гидрохинона, 2 мг ледяной уксусной кислоты и 420 мг тозилгидразина, Реакционную смесь выдерживают под аргоном в течение 6,5 ч при 20 С. После этого к смеси добавляют 20 мл воды и 20 мл диэтилов ого эфира. Органический слой отделяют, водный слой экстра гируют этилацетатом (3 х 25 мл), объединенный экстракт промывают водой (2 х 20 мл), 10-ным раствором карбоната натрия (2 х 20 мл), насыщенным раствором хлорида натрия (2 х 20 мл), высушивают над сульфатом натрия, упаривают в вакууме и очищают колоночной хроматографией на силикагеле, как описано выше. Выделяют 49 мг (25,6 ) метилового эфира 5,6-дигидротимнодоновой кислоты.Полученный продукт растворяют в 2 мл тетрагидрофурана, добавляют 0,2 мл метанола и 0,2 мл 0,1 н, гидроокиси лития. Реакционную смесь выдерживают 15 ч при 20 С, После чего смесь подкисляют 1 н, соляной кислотой до рН 3 - 4, затем добавляют 20 мл воды и 20 мл диэтилового эфира. Органический слой отделяют, водный экстрагируютэтилацетатом (3 х 20 мл), Объединенный экстракт промывают водой (2 х 20 мл), насыщенным раствором хлорида1631942 6 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ натрия (2 х 20 мл), высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме, Получают 46,3 мг (99) 5,6-дигидротимнодоновой кислоты.Восстановление тритием проводят следующим образом, В реакционную ампулу помещают диоксановый раствор 5,б-дегидротимнодоновой кислоты и катализатор Линд- лара при соотношении катализатор вещество 2; 1 мг/мг. Ампулу замораживают жидким азотом, вакуумируют до давления 110 ГПа и заполняют газообразным тритием до давлении 400 ГПа, Далее реакционную массу перемешивают 25 мин, предварительно разморозив ампулу, Затем ампулу вновь замораживают и избыточный тритий удаляют вакуумированием, Катализатор отфильтровывают, промывают метанолом (3 х 3 мл), фильтрат трижды упаривают с метанолом для удаления остаточного трития, затем конечный продукт очищают хроматографией, Получают 43,4 мг (920/,) 5,6 - Н тимнодоновой кислоты с молярной радиоактивностью 1,85 ГБк/моль.Общий выход в расчете на исходное количество тимнодоновой кислоты в составе рыбьего жира 15,300, Анализ и идентификацию 5,6 - Нтимнодоновой кислоты осуществляют методами тонкослойной, газо- жидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии.Пример 2, Получение 4,5 - Н3 докозагексаеновой кислоты,Смесь свободных жирных кислот, полученных омылением жира сардины иваси в количестве 2,6 г с содержанием докозагекСпособ получения 4,5- Н докозагексаезновой и 5,6- Нтимнодоновой кислот, заключающийся в том, что смесь жирных кислот, полученных гидролизом жира сардины иваси, суспендируют в водном растворе бикарбоната калия, прибавляют тетрагидрофуран, йодид калия, йод и перемешивают, полученную смесь йод-лактонов разделяют хроматографией, выделенные йод-лактоны докозагексаеновой и тимнодонов ой кислот каждый отдельно эпоксидируют с помощью гидроокиси лития в смеси тетрагидрофуран - вода, полученные соответствующие эпоксикислоты этерифицир уют диазометаном, затем обрабатывают бромидом калия в уксусной кислоте и окисляют реактивом Джонса до соответствующих эфиров бромкетокислот, которые обрабатывают тозилгидразином и дебромируют с образованием саеновой кислоты 1470, подвергают реакции йод-лактонизации и дальнейшему разделению образованных йод-лактонов аналогично примеру 1, Выделяют 392 мг (78%) йод-лактона докозагексаеновой кислоты,Полученный йод-лактон эпоксидируют в тех условиях, что и в примере 1, Получают 222 мг (750 ) 4,5-эпоксидокозагексаеновой кислоты, которую этерифицируют диазометаном аналогично примеру 1, выход метилового эфира 4,5-эпоксидокозагексаеновой кислоты 228 мг (990).Получение метилового эфира бромгидриндокозагексаеновой кислоты осуществляют, как в примере 1, выход 226 мг (95%),Окисляют полученное соединение в бромкетодокозагексаеновой кислоты метиловый эфир (214 мг, 8170), который переводят в метиловый эфир 4,5-дегидродокозагексаеновой кислоты аналогично примеру 1, Получают 38 мг (2370). Выделенный продукт омыляют в присутствии гидроокиси лития до 4,5-дегидродокозагексаеновой кислоты (60 мг, 99 7). Гидрирование ацетиленового предшественника тритием проводят при условиях и соотношениях компонентов, как в примере 1. Получают 33,2 мг (91,800) 4,5Н докозагексаеновой кислоты с молярной радиоактивностью 1,85 ГБк/моль. Общий выход в расчете на исходное количество докозагексаеновой кислоты 9,120/О.Реализация описываемого способа позволяет получать новые, селективно меченные тритием по 4,5- и 5,б-положениям полиеновые кислоты, которые могут быть использованы при изучении биосинтеза лейкотриенов,метиловых эфиров 4,5-дегидродокозагексаеновой и 5,б-дегидротимнодоновой кислот, которые гидролизуют с помощью гидроокиси лития и выделенные соответствующие ацетиленовые кислоты восстанавливают газообразным тритием на катализаторе Линдлара в диоксане при массовом соотношении катализатор; вещество 2: 1 и давлении трития 400 ГПа в течение 25 мин при комнатной температуре,