Способ получения эндоглюканаз из aspergillus terreus вкм f 2220

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПЮВЛИКГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНК АВТОРСКОМУ СВИДЕИЛЬСТВУ 43-44и физиолотии микроорга(21) 3770961(13(71.) Институт биохимиинизмов АН СССР Ое) Я 1 М 1259674 А 1(Я) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНДОГЛКЖАНАИЗ АВРЕЙОИЛЛВ ТЕййИВ ВКМ Г-ЗЮОИзобретение относится к биотехнологии, а именно к получению ферментных препаратов для биоконверсии растительного Сырья.Целью изобретения является повышение выхода и упрощение процесса получения эндоглюканаз,Сущность способа в том, что хроматографию проводят на карбоксильном катионите при рН 4,0-4,5 с последующей элюцией ферментов ацетатным буфером, рН 5,0-5,1 и 5,4-5,6,Зндоглюканазы из подкисленного до рН 4,0-4,5 фильтрата культуральной жидкости или раствора целлюлолитического комплекса в воде сорбируют на карбоксильном катионите; удаляют с сорбента целлобиазы промывкой исходным буфером, водой, 0 1 М ацетатным буфером рН 4,8; элюцию зндоглюканаз 1 и 2 проводят 0,2 М ацетатным буфером рН 5,0-5,1, эндаглюканазы 3-0,3 М ацетатным буфером, рН 5,4-5,6,Все используемые сорбенты являются полимериэационными карбоксильными катионитами, содержащими в качестве кросс агента разные структуры, а именно дивинилбензол или ИЮ -диметакроилалкилендиамин, или в, а -диметакроилэтилен и полизтиленгликоли, 1,е, в предлагаемом способе могут быть использованы только карбоксильные катиониты - ионообменные смолы. На карбоксильных катионитах на полисахаридной декстрзновой основа типа СМ-сефадекс эндоглаканззы Азр, феггеов В КМ Рпри описанных условиях не сорбируотся,Таким образом, эндоглюканазы получают в одну стадию при хроматографии на карбоксильном катионите и суммарный выход зндоглюканаз при использовании способа составля 8 Т 1 Г)0%. в то вр 8 мя как в прототипе 4%,П р и м е р 1, Оильтрат культуральной жидкости или раствор комплекса риба Азр, 1 еггецз БКМ Гв воде подкисляют до рН 4,0 и зндоглюканазы из него сорбируют на колонке с карбоксильным катионитом Биокарб Гсо скоростью 150 мл/см ч. Промывают исходным буфером (5 л/л сорбента), водой и затем 0,1 М ацетатным буФером, рН 4,8, при этом удаляется 90% целлобиазы. Элюцию эндоглюканаз 1 и 2 проводят 0,2 М ацетатным буфером, рН 5,0, Получают две эндоглюканазы с выходом20 25 30 35 40 45 50 55 50,8 и 25,4% и степенью очистки 2000 и 2500. Эндоглюканазы 3 элюируют 0,3 М ацетатным буфером рй 5,4, Получают эндоглюканазы 3 с выходом 23,8% и степенью очистки 2000, В результате очистки из 30 л Фильтрата гультуральной жидкости полученоязндоглоканаза- 765 спектрофотометрических единиц белка с удельной активностью 41,3 ед/спектрофотометр. ед. белка;зндоглюканаза 2 - 356 спектрофотометрических единиц белка с удельной активностью 44 ед/спектрофотаметр, ед. белка;эндоглюканаза 3 - 400 спектрофотометрических единиц белка с удельной активностью 35.6 ед/спектрофотаметр, ед. белка,Аналогичные результаты по выходам эндоглоканаз 1, 2 и 3 получены при,использовании марок Ьиокарбов Ги Г, Биокарбов 3,П р и м 8 р 2, ЭндоглЮканазы гриба Аэр. юггецз ВКМ Рполуча:от хроматографией нр кзрбоксильном катионите КМТ, как описано в прим 8 ре 1, но фильтрат или раствор комплекса подкисляет до рН 4,5, злюцию эндснлюканиз 1 и 2 проводят буфером с рН 5,1 В зндоглюканазы 3 - буфером с рН 5 Я, Выход ферментов 100%,П р и м 8 р 3. 3 ндоглсоканазы гриба Азр. едеоз ЯКМ;2220 гголучают как описано в примере 1, на колонке с карбоксильным катионитам КРК-2 п, Выход фермапов 90%. Идентичные результаты полу ены при проведении хрол 1 Втогрзфии на катионитзх КРК 1-5 п, КРК-8 п, КРК-20 п.П р и и 8 р 4, Зфдоглюканазы гриба Азр, "8118 цз ВКМ Гполучают, как описано в примере 1, на колонке с карбоксильным катионитом КМ 2 п, Выход ферментов 80%.Использование спо;оба гозволит увеличить суммарный выход ферментов в 25 рзз, снизить стоимость сорбентов в два раза и сократить время очистки за счет увеличения скорости протокз через колонку с сорбентом.56) Накапззоп ОРас 18 гзюв Е., ВосЫщ Вормуз Асса, 1973, 524, 385-392.О 9 ааа Р Тоуагла НТоуава М, ,З,РегпеиасЬо, 1982, 60, 349-356.Иванова Г,С., Белецкая О,П., Окунев О,Н Головлев Е.Л и Кулаев И,С. Фракционирование целлюлазного комплекса гриба Азр. теггеоз. Прикладная биохимия и микробиология, 1983, т. )9, 362-368.259674 Составитель Техред М.Моргентал Корректор Л.Филь Редактор О.ЮрковаЗаказ 3332 Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента 113035. Москва, Ж, Рауаская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Формула изобретения1, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНДОГЛЮКАНАЗ ИЗ АЗРЕВ 010.08 ТЕЙВЕОЗ ВКМ Рпутем хроматографии комплекса целлюлолитических ферментов, отличаюийся тем, что, с целью повышения выхода и упрощения процесса, хроматографи ю проводят на карбоксильном катионите на 61неполисахаридной основе, сорбцию осуществляют при рН 4,0 - 4,5 с последующей элюцией ферментов ацетатным буфером при рН 5,0 - 5,1 и 5,4 - 5,6,2. Способ по п,1, отличающийся тем, что в качестве карбоксильного катионита используют катионит типа КМТ, или типа КРК, или типа Биокарб, или КМ,