Способ обнаружения пилей адгезии у микробов рода

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 107490 19) 150 С 12 1/ ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТАВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ терминанреэс 1 э, раза .при итательной ша дарсткий 99-12 Е. 1 прея о 1рр 1 ей 10-15 0,04-0,07 ,075-0,12 0,5-0,75 0-1,5-2,5 РЕДЕЛЕНИЯ ПИЛЕЙ РОДА 1 ЕНБ 1 БХА микроорганизмов ах с последующей агглютинации с утствии В-,маньтатов, о т л им, что, с целью,5 13 стальное 7,1-7,3 ы ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ"Наевадд 1 цС 1 пцэ апй 11 щЬг 1 а 1611 ГегепС яегоСуреь апй ЬгоС1 егв 1 п 1 а епсегосо 11 С 1 са" д.Вассег 1 о 1 оцу, 1980, 49, 2,р. 353-360.(54) (57) СПОСОБ ОП АДГЕЗИИ У МИКРОБОВ путем пассиров,ния на питательных сред постановкой реакции эритроцитами в прис ноэы и учетом резул чающий ся те выявления пилей адгезии-де тов патогенности Хегэхп 1 а пассирование проводят 3-4 35-37 С через 36-48 ч на и среде, содержащей, г/лгДрожжевой экстрактТриптон-бактоКаэаминовые кислотыСердечно-мозговой отварГлюкозаСернокислый магнийСернокислое железо 0ЦистеинЛимонно-кислыйнатрий 1,Хлористый калий 1,ДвуэамещенныйФосфат калия 3Агар-агарВода дистиллированная О9-1210-15 Ог 040,075-0 0,5-0 5 60 Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается :посо.бов обнаружения пилей адгезии уЮегз 1 п 1 а резг;1 з.Известен способ определения пилей адгезии у микробов рода 1 егз 1 п 1 ав частности 1 егзп 1 а еп 1 егосо 1111 -са, путем пассирования микроорганизмов на питательных средах - в10-кратные пассажи в бульоне через7 дней при 20 С, с последующей постановкой реакции агглютинации сэритроцитами в присутствии В-маннозы и учетом результатов 11.Однако известный способ не позволяет выявить пили адгезии - детерминанты патогенности 1 егз 1 п 1 арезг,3.з.Цель изобретения - выявление пилей адгезии-детерминантов патогенности 1 егз 1 п 1 а резг.1 з,Указанная цель достигаетсятем, что согласно способу определения пилей адгезии у микробов рода1 егзхп 1 а путем пассирования микроорганизмов на питательных средах споследующей постановкой реакцииагглютинации с эритроцитами в присутствии В-маннозы и учетом результатов, пассирование проводят 34 раза при 35-37 С через 36-48 ч напитательной среде, содержащей, г/л:Дрожжевой экстракт 9-12Триптсн-бакто 9-12,К,аминовые кислоты 9-12Сердечно-мозговой отварГлюкозаСернокислый магний ,07Серноккслое железо ,125Цкстекн ,75Лимонно-кислыйнатрий 1,0-1Хлористый калий 1,5-2ДвузамещенныйФосфат калия 3,5-4,5Агар-агар 13-14Вода,дистиллированная Остальноеи рН среды 7,1-7,3Способ осуществляют следующимобразом.П р и м е р 1. На питательнойсреде, содержащей, г/л:Дрожжевой экстракт 9,0Тркптон-бакто 9,0Казаминовые кислоты 9,0Сердечно-мозговой отвар 9,0Агар-агар 13,01,5 ПримерЗ. На пкт среде состава, г/л:Дрожжевой экстрактТркптсн-бактсКазамкнсвые кислОтыСердечно-мозговой отварАгар-агарГлюкозаСернсккслый магнийСернсккслсе железоЦкстекнЛимонно-ккслый натрийХлсркстый калийДзузамещенный фссфаткалия атяльнсй 120 0 12 14 1-, О, О, О, - г 2 г Ог 0071257545 Хлсрксгый калийДвузамещенный фссфат калия 3,5(рН 7,1) трижды пасскруют клеткиштамма Хегз 1 п 1 а реэС 1 з 556/10 К 115 при 35 С с пересевамк через 48 ч,формалинкзкрсванные эритроциты барана суспендируют в Ог 85-нсмрастворе МаС с 0,5 П-маннсзы(рН 7,2) дс получения 5 Ъ взвеси.10 На дно чашки Петри наносят 2 каплитакой взвеси и в нек осторожнымрастиранием суспендкруют 1 стандартную петлю диаметр 2 мм) культурыштамма 556/106, Учет реакции проводят через 30-60 с при легком покачивании чашки Петри. Образуютсякрупные красные хлопья эрктроцктов,взвесь светлеет, что характерно дляприсутствия пклей. Наличие пилейу исследуемой культуры подтверждается данными электронной микроскопии. Для этого клетки указанногоштамма с описанной среды наносятна сетку, покрытую углеродом, Фиксируют 1-нсй фосфорно-вольфрамовойкислотой рН 7,1-7,3) и исследуют, на микроскопе ЗВМ - 100 В при60 кВ. У гемагглютинкрующкх клетокобнаруживается выявление густой сети тонких фкламентсв - пклей.П р к м е р 2, На питательнойсреде содержащей, г/л:Дрожжевой экстракт 10,0Тркптсн-бактс 10,0Казамкновые кислоты 10,035 Сердечно-мозговой отвар 10,0Агаз-агао 13,5Глюкоза "3,0Сернсккслый магнкй 0,06Ссрнскислое железо 0,140 цкстеин О,бЛимонно-кислый натрий 1,2Хлсристый калкй 2,0Двузамещенный фссфаткалкя 4,0рН 7,2 тркжды пассируют клеткиштамма 1 рсзг.1 з 556/10 Й 1 Г прк36 С с кнтерваламк 6 ч. Опреде- .ление пклей проводят аналогичнопримеру 1,1074904 Составитель Г. СмирноваРедактор Н. Рогулич Техред Т.фанта Корректор И, Эрдейи Тираж 522 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5(рН 7,3) 4 раза пассируют клетки штамма 1 резй 1 з 556/106 Й 1 Е " при 37 С с интервалами в 36 ч. Определение пилей проводят аналогично примеру 1.Использование предлагаемого изобретения позволяет определять новый фактор вирулентности - пили адгезии у чумного микроба. Распознаине нового фактора вирулентностичумного микроба дает возможностьдополнить существующую систему типирования и систему индикации, атакже основываясь на серотипах пилей, сконструировать полиантигенныехимические вакцины, куда пили адгезии будут входить в качестве составного компонента.