Способ определения клеток крови на цитологических мазках при световом и электронномикроскопическом исследовании

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 2 З,04,79 (21) 2750317/28-13с присоединением заявки Мо(51)М. Кл. 6 01 Н 1/28А 61 В 10/00 Государственный комитет СССР по деяам изобретений н открытнй(72) Авторы изобретения Г.К.Гогичадзе и И.Л. Яковлев Научно-исследовательский институт гемати переливания крови им. акад. Г.М.Мухадзе(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК КРОВИ НА ЦИТОЛОГИЧЕСКИХМАЗКАХ ПРИ СВЕТОВОМ И ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ Способ осуществляют следующим образом.20 Мазки крови или пунктат костногомозга приготавливают на эпоновыхпластинках, изготовленных с размерами, соответствующими размерам обычнымпредметным стеклам. На вычищеннойот эмульсии фотопластинке размером.9 х 12 см делается остов с размером,соответствующим обычному предметномустеклу, посредством стандартныхпредметных стекол или стеклянных по лосок. Предварительно поверхность Изобретение относится к медицине,а именно к гематологии и цитологии.Известен способ определения клеток крови на цитологических мазкахпри световом и электронномикроскопическом исследовании, который заключается в том, что приготовленные наобычных предметных стеклах мазкикрови фиксируются для электронногомикроскопа, обезвоживаются, покрываются заливочной средой (эпоксиднойсмолой), после чего на них помещается органическое стекло, Образец полимеризуется, а после отделения стекол друг ох друга мазок оказываетсяна органическом стекле. Затем в фазовоконтрастном микроскопе специальнымметчиком отмечаются выбранные клетки,после чего они вырезаются, прикрепляются каплей заливочной среды к блокуиз органического стекла и полимеризуются. Через несколько дней затачивается пирамида 1),Однако такой способ включает большое количество операций, что затягивает время исследования при определении лейкозных клеток,Цель изобретения - сокращение вре+мени исследования при определениилейкозных клеток. Поставленная цель достигается тем,что при осуществлении способа опреде"ления клеток крови на цитологических 5 мазках при световом и электронномикроскопическом исследовании, включающего приготовление мазка на предметном стекле, фиксацию, обезвоживание,заключение материала в эпоксиднуюсмолу и выбор клеток, подлежащихэлектронно-микроскопическому изучению, мазок наносят на предметное стекло, изготовленное из эпоксидной смолы, а выбор клеток проводят до егозаключения в эпоксидную смолу путемокрашивания в красителе Майн-Грюнвальда в течение 20-30 мин.879368 Формула изобретения Составитель Л.СоловьевТехред А,Ач Корректор М,Шароши Редактор С,Суркова ЗАКАЗ 9704/8 , Тираж 910 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д.4/5 Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная 4 фотопластинки и предметных стекол,ооставляющих остов, тщательно смазы-вают тонким слоем термостойкой смазкики - ЦИАТИМ, В остов вливают окончательный состав смолы - Эпонс катализатором и фотопластинку ставят вгоризонтально расположенный термостат. После полимеризации в течение,48 ч при 60 ОС зпоновая пластинка посредством легкого поддевания скальпелем отделяется от формы, Полученнаяэпоновая пластинка имеет толщину 23 мм и достаточную для микроскопирования прозрачность. Эпоновую пластинку перед нанесением мазков протираютспиртом и покрывают тонким слоем раствора альбумина. Мазки крови и костного мозга окрашивают и просматриваютв светооптическом микроскопе подиммерсионным объективом. После выявления интересующей клетки не Фотографируют, под иммерсионным объективом 2 Опомещают точно в центре поля зрения.Затем посредством объектива с увеличением в 20 раз с опущенной диафраг"мой и с фокусированной нижней поверхностью эпоновой пластинки отмечаютс обратной стороны центр поля зрения.Сняв эпоновую пластинку с предметногостолика микроскопа, с обратной стороны простыми чернилами отмечают кружок, в центре которого находится метка. Затем производят контроль на наличие интересующей клетки точно вцентре кружка и отмеченный участоквырезают посредством вращения металлической трубки. Полученный образецпредставляет собой эпоновый диск смазком, в центре которого размещенаинтересующая клетка. (размером 2 х 2 мм) .Диск помещают в широкодонную пробирку и фиксируют в 1 Ъ-ном, растворе глутаральдегида на 0,1 М Фосфатном буфере (рН 7,2"7,4) на 15 мин, а затемпосле кратковременной промывки вфосфатном буфере в 1-ном растворечетырехокиси осмия на том же буферена 10 мин. После промывки в буферепроводят процесс дегидратации и инфильтрации эпонового диска с мазком,в 70 спирте материал помещают на5 мин, в 96 О- на 5 мин, в 100 О- на5 мин по 2 смены, в абсолютном ацетоне на 5 мин, в смеси абсолютногоацетона с зпоном - на 5 мин, в эпоне.без катализатора также на 5 мин, Заключение эпонового диска с мазком в эпоксидную смолу проводится в желатиновой капсуле. Полимеризация материала проводится при 60 фС в течение 48 ч.Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает непродолжительное время подготовки препарата для электронного микроскопа (48 ч по сравнению с известным, где требуется как минимум 96 ч). Способ не требует никакого дополнительного оборудования (Фазоконтрастная прйставка, специальный метчик) экономичей, так как все процедуры, связанные с электронной микроскопией, производятся после выбораинтересующей нас клетки, в то время как в известном способе эти же манипуляции проводятся сразу же .после нанесения мазка, что требует фиксацию нескольких мазков из-за вполне возможного отсутствия интересующей нас клетки в мазке. Проводка материала для электронной микроскопии в способе производится на объекте размером 2 х 2 мм, что значительно сокращает расход дорогостоящих реактивов, в то время как в известном способе проводка проводится на предметных стеклах размером 25 х 75 мм, что приблизительно в 500 раз большеСпособ определения клеток кровина цитологических мазках при световоми электронномикроскопическом исследовании, включающий приготовлениемазка на предметном стекле, фиксацию,обезвоживание, заключение материалав эпоксидную смолу и выбор клеток,подлежащих электронномикроскопическому изучению, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью сокращениявремени исследования при определениилейкозных клеток, мазок наносят напредметное стекло, изготовленное изэпоксидной смолы, а выбор клетокпроводят до его заключения в эпоксидную смолу путем окрашивания в красителе Майн-Грюнвальда в течение 2030 мин,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Ростомян М,А. и Абрамян К.С.Ультраструктура клеток крови. Иэд.