Способ получения иммуноглобулинового препарата

ОПИСАНИЕ ИЗОБР ЕТЕ Н И Я К АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУц 836831 Союз Советских Социалистических Ресиуолик(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛ ОБУЛ И НОВОГО ПРЕПАРАТА1Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для профилактики н лечения заболеваний, с саванных энтеробактериями, менингококками, Рзецс 1 оспопаь аесцрпоза.Известен способ получения иммуноглобулинового препарата путем обработки хлоридом натрия экстракта из осадка Б (111 фракции) плазмы крови, фракционирования экстракта, очистки центрифугата иммуноглобулинов с 1.Однако конечный препарат, полученный этим способом, имеет значительные примеси бета-глобулинов, содержание которых превышает 3. т. е. уровень их содержания в обычных препаратах иммуноглобулина выше допустимого по приня ям техническим условиям. Препарат обладает недостаточной активностью 75,5%. Кроме того, фракциоирование этанолом оказывает денатурирующее воздействие на белковые растворы и вызывает их дополнительную агрегацию.Данный способ треоует применения специального оборудования, обеспечивающего работу при минусовых температурах. При получении препарата на производстве в низкотемпературных холодильных камерах условия труда усложняются. Цель изобретения - повышение активности целевого продукта и упрощение процесса.Это достигается тем, что к центрифуга ту добавляют хлороформ, затем декстрансульфат и полиэтиленгликоль.Способ осуществляют следующим образом.1 кг осадка Б экстрагируют в десяти.10 кратном объеме 0,9%-ного охлажденногораствора хлорида натрия при постояннои перемешивании. Затем смесь доводят до десятикратного объема, хорошо перемешивают и оставляют на ночь (18 ч) при 15 4 - 6 С рН смеси 5,5-1-0,3. На следующийдень смесь центрифугируют в течение часа при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок удаляют и в полученном экстракте определяют содержание белка, которое составляет около 2%, Объем полученного экстракта составляет 10600 мл.К экстракту осадка Б добавляюг160 мл охлажденного до 4 - 6 С хлороформа (10% по объему). Смесь медленно перемешивают 2 ч вручную или шюттель-аппарате при 4 - 6 С. Затем добавляют 233 мл 5%-ного раствора декстрансульфата (конечная концентрация 0,1%). Смесь энергично встряхивают 5 - 10 мин и цептрифуЗ 0 гируют при 3000 об/мин на центрифуге сРедактор Л, Письман Корректор Л. Слепая Ваказ 3080 Изд.12 б Тирак 717 ВНИИПИ Государственного комигета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, )К, Раушская наб., д. 4/5Подписное Загорская тпшографпя Упрполпграфиздата Мособлисполкома охлаждением до получения прозрачного центрпфугата. Осадок удаляют. Объем цеитрифугата составляет 8 л, содержание Оелеа 0,4%. К 8 л эестраета для еоццентрирования имму:гоглобулипов добавляюг 50%-1 лй раствор полиэтпленглиеоля (мол. вес 6000) до конечной концентрации 5% при постоянном перемешивании, Эту смесь оставляют на ночь (18 ч) при 4 - 6 С. После выстаива Ия осадок иммуноглобулинов отделяют путем декантации и цснтрифуп:- рования 15 - 30 мин при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок промывают 300 - 400 мл дистиллирозаппой воды, подсислепной ацетангчм Оуфером до р 1-1 50.2, пр; 1 - 2 оС, растворяют в охлажденном 0,9%-ном растворе хлорида .атрпя до содержания белка 5% (200 в 250 з,), р 11 6,3. После растворения осадка прспарат центрифугируют 15 мип прп 3000 об/мин па центрифуге с охлаждением для удаления нерастворимых примесей. С центрифугатом проводят реакцию на удаление полиэтиленгликоля с реактизом Неслера (на 3 мл реактива Неслера осторожо наслаивают 0,1 мл цептрифугата), прн этом не должен образовываться слой белого осадка, После центрифугирования в препарате устава вливае)т р 11 7,0 - 7,5 0, .1 ВОН. Для удаления нестабильных примесей е раствор пммуюглобулинов добавляют фосфорноепслый кальций Саз(РО,) 2 пз расчета 0,4 г на 100 мл. После перемешивапия и вьстаиванпя в течение часа раствор центрифугируют 30 мни при 3000 об/ми:- на центрифуге с охлаждением, затем добавлягот глюкозу до конечной еопцептрации 2% В еачестве стаоилизатора, После стерилизующей фильтрации препарат разливают по ампулам и лиофнлизируют. 4Предлагаемый способ позволяет получить комплексный иммуноглобулиновый препарат, с активностью 97,3%, содержащий иммуноглобулины трех классов в следующих соотношениях: Ядб 55 60%, 5 д А 15 - 20% и 5 д М 25 - 30%, Препарат обладает высокой серологической активностью в отношении энтеробактерий, мспингококка, Рвегег 1 опопав аегпопоза и характеризуется высокои степенью очистеи От примесег иммупологичесеи псатив,ных белков.Количество примесей не превышает 3"оот общего белка, что регламентировано для препаратов иммуноглобулина человека.Кроме того, способ пригоден для производстваэкономическ эффективен, тае еак помимо улучшения,словпй труда оп 20 не нуждается В сложном техническом Осггащении производства. Применение способа предусматривает более рациональное использование отходов производства препаратов крови из плацентарной сыворотки.25 Формула изобретения Способ получения иммуноглобулиновогопрепарата пугем обработки хлоридом нат рия экстракта из осадка Б (111 фракции)плазмы крови, фракционировапия экстракта, очистки центрифугата и выделения иммуноглобулинов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения активности целе вого продукта и упрощения процесса, ецептрифугату добавляют хлороформ, затем декстрансульфат и полиэтнленгл- коль. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. ЯегпЬцст-Ргер С 1 еп;Игу, 1973, 3 (4),363 в 3.