Способ получения алкилированных нуклеиновых кислот

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(51) М. Кл.е С 07 В 27/00 4 С 07 Н 21/00 асударстеениыи комитетСовета Министров СССРаа делам иеооретенийн аткрытий(43) Опубликовано 25.11,76, Боллетень(45) Дата опубликования оицсания 15,06,77 Авторызобретения ва, Г. Г. Кар а, С.Д. Мызина и аткулнц 1 овосибирский государственный уциверсите(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛКИЛИРОВАННЫХ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТательного алкипи)юезция только взний в составе нуклеиновых ся способ получения апкцпировых кислот, заклкчанпциися в ый процесс алкили)квзция цукле. изводными хлор з пцзри из минов нилсодержашие ароматические Г целью изби гуациновых оснособу получения кислот, что даетшую структуру и тсцис относится кзцных нуклеиновых анкил исьтва испо ванных нуклеин новых кислот,х кислот име том, что в извести новых кислот про обавляют карбо цие для изучения также Ля изучения цости, а процессов ца проблел 1 ы ра зль з,достзочно зимодейству о ап кили рую)Лх с гете 1 оцикличес х кислот, в том мц них Известно реагентов, вз кими основа сообразно осуществпят анки) ямц цукпеицов сугствии кис цовьь бытка числе и производные хлорззипзрилзмицов.Однако к недостаткам известных способов алкилироцзнияетсропикпичсских оснований в составе нуклеиновых кислот следует о 1 нести от. сутствие избирательности действия таких реагентов: бопццицство алкилирующих резгецтов реагируют в соизмеримой степени с здецицовыми, гуани. новыми и цитзицовьлп 1 ц)хизводцвми в составе нуклеиновых кислот. В то же время для структурных исследований нуклеиновых кислот большое значение имеет специфическое взаимодействие реагента только с одним типом гетероциклических оснований, входягпих в состав нуклеиновых кислот, например только с производными гуацица. сумма равс нук елочи Описываемый рования гуанино кислотах основан ческого алкили. внуклеиновых бонильные соедиенина и цитозина особ сп х основаниина том, что кзрроизводными ад пения образуют слабильные алкилоют злкилированиваний, но не гуани ые и прецятству клических осно. ые произвэтих гетеро возможность исследовать цср биологические функции цукпецИсследование цукпешювь большое прзкгцче скос значе Процесс ос 0 - 70 СирН 6 - 7Наиболее цел ровацие нукле 2 - 4-кратного и по отношению к цитозица в сос раствора поддер 0,1 н. раствора ш)з 1) УДК 547.963.3(088.8 твляется прц температуре карбоцильного соединения ому солержзцн аленина и леицовой кисло гы и р 11 постоянным добавлением536154 Составитель С. Чернова Ч схгзец О Пи оная Р ктор И. Е 1 ждРагспи Корректор В, Салка Тираж 575 Подвисное ЦПИИПИ Государствеиюго комитета Г:овега Л 1 инисгров СГСР ио делам изобретеиий и открьггий 1130 5, Москва, Ж. Раугвская наб., д. 4/5Зака 5750/271 Филиал ППП "Патент", , Ужгорол, ун. Проектная, 4 дц 1 ц 1 н 1 способ может представлять особый итерес для алкилих 1 вдння гудциновых оснований в составе дсэоксирибонукпеиновых кислот (ДНК) в святи с проблемой специфического расгцецления этэ х биополнл 1 еров,П р и м е р 1, Ллкцлировдние Д 11 К 4 (; й - -хнорэтнз 1-Гч.метилдчицо) Сецзилдмнном (МНа СНа ВС) в ррзцсутствии п.диметилдминобенздльдегида (ДМЦ.В колбу помещают 25 мг ЛНК (денатурированной нагреванием или нативной) в 25 мл Н,О и 23,4 мг ДМБ в 5 мп диоксаца (до конечной концентрации диоксаца в растворе равной 17%), После этого вносят в реакционную среду 38,5 мг МНЬ СН 2 ВС (или лобого другого алкилирующего аге та). Смесь выдерживают при 50 С в течение 8 час, поддерживая постоянным значение рН б,2 добавлением 0,1 и. КОН. После окончания реакции ДМБ экстрагируют эфиром до отсутствия оптического поглощения при 330 ммк м. После удаления ДМБ осаждав,т алкилированную ДНК и выделяют целевой продукт известными методамц. Контроль за ходом реакции осуществляют, определяя количество це модифицироватп 1 ых оснований в цуклеицовой кислоте и накопление алкилироваццых оснований после кислотного гидролиза алкилированныхДНК В описанных условиях длкилировацию подверга ется только гуаниц. Вьгход длкилироваццых про изводных гуаница в составе ДНК составляет 95% о исходного.П р и м е р 2. Ллкнпировацие риооцуклеиповой кислоты (РНК) 2 3-0-14- (М-хлорэтил-Л 1- -метипамино) бецзилидец -уридицом (ОВС) в г 1 гнсутствии 4- (Л 1-2-хлорэтил- - мегилдмицо) бец эальдегнда (ВС). В колоу номен 1 ди 1 т 50 мг ОВС н 50 л 1 г ВС 1,растворенных в 30 мл дноксацд, и добдвнянэт 20 мг Р 1 К я 70 лш волы, Смесь выдержш 1 дют прн 50 С вотечение 8 чдс, поддерживая р 1 6,2 добавлением 0,1 н. КОН. По окончании реакции к РНК добавляют 100 мл 0,05 М ацстагного буфера (РН 4,0), содер ждщего 2 М йдС 1 и 400 мл этд 1 изла. Смесь вглдержцвают на холоду 1 час, и осадок алкилнрованцой РНК выделяют центрифугированием. Контроль за 1 О ходом реакции осуществляют, анализируя смесьметодом бумажной и колоночцой хроматографии.Полученные результаты ноказьгвают, что коли.чество алкилированного гуацица составляет 90 - 95% от исходного. Формула изобретения 1. Способ получения алкилироваццых нуклеиновыЯ кислот путем вэаимодействиянуклеиновых кислот с производными хлорэтилдриламнцов, о т -, л и чающий с.я тем, что, с целью избирательного алкнлнрования гудница в нуклеиновых кислотах, процесс проводят с добавлением карбоцилсоои держащего ароматическогО альдегида цри температуре 0-70 С и рН 6 - 7. 2. Способ по и. 1 о т л и ч а ю щ и й с я тем, что количество вводимого карбоцилсодержащего ароматического альдегида составляет 24-кратный избыток по отношению к исходному содерждцшо нуклеиновых кислот. 3. Способ по и. 1, о т л и ч а ю гц и й с я тем, что рН поддерживают постояннь 1 м добдвпснием 0,1 и. Раствора щелочи.