Способ получения сорбента

ОПИСИЗОБРЕТЕНИЯ Ц) 476285 Союз Советских Социалистическит Республик(23) ПриоритетОпубликовано 05,07 Совета Министров СССРао делам изобретеиийи открытий БюллетеньДК 661,183,1,(088.8) та опубликования описания 13.11.7(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕН среде диоксаца при и рН среды около 8. ромывают щелочью,Изобретение касается получения ионообменных смол, иопользуемых в качестве сорбентов, а также применяемых для других целей.Известен способ получения сорбента путем 5 взаимодействия хлорсульфонированцого сополимера стирола и дивинилбензола с аминокислотой - и-аминобецзойцой кислотой. Недостаток этого способа заключается в отсутствии у получаемого при этом сорбента 10 сорбционной способности по протеолитически активным белкам.С целью создания сорбента с высокой сорбционной способностью по протеолитически активным белкам, пригодного для очи стки протеаз, предлагается способ получения сорбента путем взаимодействия стирола и дивицилбензола с аминокислотой - М- (а-аминобензил)-.-тирозином.Исходный сополимер получают известным 20 способом путем сульфохлорировация сополимера стирола и дивинилбензола.М-(п-аминобензил)-.-тирозин получают взаимодействием гг-питробензилбромида с метиловым эфиром .-тирозина с последующим 25 восстановлением с помощью гидросульфита натрия,Реакцию проводят вкомнатной температуреПолученный сорбент и 30 водой, разбавленной соляной кислотой и водой до нейтральной реакции.Синтезированный сорбент обладает высокой активностью в сорбцин бактериальных протеаз, продуцируемых Вас, ЯцЫ 11 в в интервале рН 5,6 - 10, легко отмывается от примеси посторонних белков и хорошо регенерируется, Выход протеаз по активности 61 - 100%, по белку 95 - 100%Максимальная удельная активность протеаз за одну операцию сорбции - десорбции повышается в 20 раз. Синтезированный сорбент может быть использован для получения высокоочцщенных протеаз, отделения протеаз от других ферментов для хроматографического расщепления рацематов н в других целях.Пример.Л. Получение Х-(гг-амцнобензцл) -.-тирозина. 23,05 г (0,1 моль) метилового эфира .- тирозина гидрохлорида, 21,6 г (0,1 моль) гг-нитробензилбромида, 60 г (0,3 моль) калия двууглекислого, 20 ъгл воды, 120 мл диоксана, 5 г иодистого калия перемешивают 9,5 час при 50 С, после чего 2/3 реакционной смеси отгоняют в вакууме. Оставшееся маслообразцое вещество растворяют в 50 мл коцц, НС 1 ц добавляют несколько миллилитров воды. При этом выпадает гидрохлорид метцлового эфира Х-(г-нитробензил)-.-тироКорректор М. Лейзерман Редактор Л. Ушакова Заказ 2690/13 Изд, Ио 863 Тираж 496 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 зина в виде кристаллов, которые перекристаллизовывают из спирта.Выход 87,6%, т, пл. гидрохлорида 186 -190 С (с разлож.)Найдено, %: Х 8,82,Вычислено, %: Х 8,48.3,655 г (0,01 моль) гидрохлорида растворяют в 66 мл смеси спирта с водой (1: 1) идобавляют 3,75 (0,067 моль) едкого кали,раство 1 ренного в 7 мл воды. Полученныйраствор смешивают с 9,5 г (0,057 моль) гидросульфита натрия, растворенного в 33 млводы, и после нагревания в течение 10 минпри 30 - 40 С отфильтровывают, Растворитель отгоняют в вакууме до появления помутнения. Оставшееся маслообразное веществоотделяют и обрабатывают 100 мл спирта, Полученные кристаллы имеют т, пл, 199,5 С (сразлож,),Найдено, % И 8,92.Вычислено, %: И 9,33. Б. Конденсация, К 80 мл раствора, полученного после восстановления 0,012 моль замещенного тирозина без его выделения, добавляют 48 мл диоксана, 1 г хлорсульфонированного сополимера стирола и дивинилбепзола (0,5%). Смесь перемешивают при комнатной температуре 15 час, рН среды поддерживают около 8 2 н. едким натром, Полученную смолу отфильтровывают, промывают 2 н. щелочью, водой, разбавленной соляной кислотой и водой до нейтральной реакции. В ИК-спектре имеются полосы поглощения в области 1160, 1340, 1600 и 1620 см - . Содержание К - 2,76%, аналитическая объемьая емкость (АОЕ) - 2,0 мг. экв./г.В. Испытание сорбента, 2 г смолы загружают в колонку (Я 1(5 см), уравновешивают 0,01 М универсальным буфером с рН 7,0 и наносят 4 мл раствора (в том же буфере) ферментного препарата протосубтилина Г - 10 х, полученного из Вас, ЬцЬШ 1 з с протеолитической активностью 409 ед./1 г 10 белка при рН 7,5. Концентрация белка2,5 мг/мл. Протеолитическую активность устанавливают модифицированным методом Ансона, концентрацию белка - методом Лоури. При элюации 30 мл указанного буфера 15 вымываются протеолитически неактивныебелки в интервале рН 5,6 - 10,0, а также красящие вещества, Протеолитические ферменты элюируются 120 мл 11 Ч раствором хлористого натрия в том же универсальном буфере.20 Общая протеолитическая активность полученного фермента 1606 ед./ 1 г белка при рН 7,5.Очистку протеолитических ферментовможно проводить также непосредственно из культуральной жидкости Вас. ЬцЬИ 1 з и из 25 водного раствора ферментного препарата,Предмет изобретенияСпособ получения сорбента путем взаимодействия хлорсульфонированного сополимера 30 стирола и дивинилбензола с аминокислотой,отличающийся тем, что, с целью создания сорбента с высокой сорбционной способностью по протеолитически активным белкам, в качестве аминокислоты используют М-(и аминобензил) -.-тирозин.