Способ получения антибиотика — гликозида вариамицина

Союз Советских Социалистических Республикависимое от авт. свидетельстваМ, Кл, С 07 с 109/ОО Заявлено 04.Ч 11.1969 ( 1355862/23-4) присоединением заявкимитет по делам иоритет и открыти Мииистров изобретепри Со УДК 547.594,3(О 88.8 Опубликовано 15.Ч,1972, Бюллетень1 Дата опубликования описания 15.И.1972 Авторызобретения В. Жданович, Г, Б. Локшин, А, Д, К и Н. К. Соловьевасоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков узовков, С, М. Рудая Заявитель ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА -ГЛИКОЗИДА ВАРИАМИЦИНА2 Изобретение относится к получению новых антибиотиков.Предлагаемый способ получения нового антибиотика - гликозида вариамицина заключается в том, что культуру Ас 11 потпусез о 11 чочаг 1 аЬ 111 з зр. поч. выращивают на среде, содержащей соевую муку (2% ), крахмал (2% ), глюкозу (2% ), Х аС 1 (0,5% ), С а СОз (0,5%), (МН 4) 304 (0,4%) и К 2 НРО 4 (0,04%), продукт экстрагируют органическим растворителем при рН 2 - 4, например этилацетатом, осаждают его органическим растворителем, например гексаном, методом хроматографии на силикагеле и целевой продукт выделяют обычным способом.Пример 1. Процесс глубинного биосинтеза антибиотика осуществляют культивированием Ас 11 погпусез о 11 чочаг 1 аЬШз зр, поч. при 26 - 28 С на среде следующего состава, %: соевая мука 2, крахмал 2, глюкоза 2, 1 чаС 1 0,5, СаСО, 0,5, (ИН 4)г 504 0,4 и К,НР 04 0,04 в аппаратах емкостью 100 л. Длительность процесса ферментации 130 - 140 час. Мицелий культуры отфильтровывают и 40 л нативного раствора подкисляют 10%-ной соляной кислотой до рН 2 - 2,5 (по потенциометру).Экстракцию ведут трижды этилацетатом (15, 10 и 7 л). Объединенные этилацетатные экстракты промывают водой от избытка кислоты (рН водной промывки -5) и упаривают в вакууме до 0,1 первоначального объема.Концентрат экстрагируют трижды 5%-ным водным раствором бикарбоната натрия (1, 0,5 и 0,3 л), Объединенный содовый раствор подкисляют 10%-ной соляной кислотой до рН 2 - 2,5 (потенциометрически), после чего экстрагируют трижды этилацетатом (0,4 л и 2 Х 0,2 л).Объединенный этилацетатный экстракт про мывают водой, сушат над Ха 250.;, упариваюти осаждают антибиотик десятикратным по объему количеством гексана. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают гексаном и сушат.15 0,5 г неочищенного вариамицина, растворенного в смеси хлороформ-метанол (9: 1), вносят в колонку (15 Х 700), заполненную 30 г силикагеля, не содержащего ионов железа, Проявление и элюцию ведут той жс смесью.20 Анализ полученных фракций проводят методом тонкослойной хроматографии в той же системе растворителей.Фракции, содержащие вариамицин, объединяют, упаривают в вакууме досуха, растворя ют в небольшом объеме этилацетата и наносятна пластинки с силикагелем, После высушивания хроматографируют в описанной выше системе растворителей.Из зоны с К 1 0,55 - 0,6 элюцией метанолом 30 с последующим концентрированием в вакууме309601 Составитель Л. КушнирРедактор Т. Пилипенко Техред 3. Тараненко Корректор О. Волкова Заказ 1689/1 Изд. Ме 731 Тираж 448 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж.35, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 и переосаждением из этилацетата гексаном получают хроматографически чистый вариамицин. Антибиотик имеет брутто-формулу С 52 Нт 6024 и выделен в виде желтого аморфного порошка, легко растворимого в спиртах (МеОН, ЕЮН) и сложных эфирах (ЕЮАС), но плохо растворимого в воде, с т. пл. 162 - 165 С (с разл,).Найдено, %: С 57,90; Н 7,02.С 52 Н 76024,Вычислено, ,(,: С 57,56; Н 7,02. Эквивалентный вес, определенный титрованием 0,1 н, раствором ИаОН в среде метанолбензол, 1073, выч. для СззНт 6024 1084, ап 49.+2 С (с 0,5 ЕЮН) Хмеон 230 280 317 330 (плечо), 412 ммк, Е," см 1740, 3800, 595, 800 (Уф-спектр снят на спектрофотометре СФА). ч-вазелинового масла 3400 - 3450, 1720, 1635, 1580, 1520, 1180, 1070, 1010, 910, 840 см- (ИК-спектр снят на спектрофотометре 11 К, 1.е 1 зз) .П р и мер 2, Вариамицин получают до стадии хроматографической очистки по примеру 1. Далее 0,5 г неочищенного антибиотика, растворенного в смеси бензол-ацетон (1: 1), вносят в колонку (15 р,700), заполненную 30 г силикагеля марки водная кремневая кисло та, Проявление и элюацию ведут той жесмесью. Затем антибиотик очищают, как описано в примере 1. Предмет изобретения10 Способ получения антибиотика - гликозидавариамицина, изомера митрамицина, состава С 52 Нт 60 з 4, состоящего из агликона хромомицинона и остатков трех дезоксисахаров, два из которых идентичны олиозе и оливозе, отличаю и(ийся тем, что, культуру Ас 1 погпусез о 1 кочаг 1 Ы 11 з зр. поч, выращивают на среде, содержащей основные источники углерода, азота и минеральные соли, продукт экстрагируют при рН 2 - 4 органическим растворителем, напри мер этилацетатом, осаждают его органическим растворителем, например гексаном, очищают методом хроматографии на силикагеле, и целевой продукт выделяют обычным способом.