Способ количественного определения меланина

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 091 01)С 01 И 33/48 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ ИЭОБРЕТЕНИ ОПИСАНИ К АВТОРСКОМУ ТЕЛЬСТВУ/283 4. Бюл. Ф 29пина, А.Е. Донц институ ской хими га воп,1976,ототип) о госдеп 5-699 ( руре(21) 358212 (22) 16.04. (46) 07.08. (72) В.А. Л и М,А. Остр (71) Ордена фиэики АН С (53) 616.07 (56) 1, К,8 К. Кагвап" у. 26, Ф 4,вскииЛенинСР088.8Рая,оЕ(54) (57) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕЛАНИНА, включающий инкубацию меланина с химическим реагентомс последующим спектрофотометрированием, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью сокращения времени определения, меланин инкубируют с 5 10 ф 10М раствором нитросинего тетразолия в диметилформамиде, а спектрофотометрию проводят при 520 нм.1107053 1 ид Меланин черного меш 13,0 18,0 0,080,115 ка каль 0,0 0,12 ДОФА-мелани И Заказ 5751/3 записное ППП Патент, г.Ужгород, ул,проектна Изобретение относится к аналитической биохимии, а именно к способам определения концентрации пигментов меланинов, и может быть использовано в научно-исследовательской работе, а также в медицине для количественного определе-. ния синтетических и природных меланинов.:Известен способ количественногоопределения меланина, включающий еговыделение из биологического материала,10инкубацию суспензии или раствора меланина с боргидридом натрия с последующим спектрофотометрированием при длине вопны 290 нм. Содержание меланина определяют по калибровочной кривой 15в координатах: изменение оптической плотности - концентрация меланина в мкг сухого веса на 1 мл1 3.Недостаток известного способа - длительность определения, 20Это связано с тем, что при обработке пробы боргидридом натрия образуются газовые пузырьки, которые удаляют нагреванием пробы в водяной бане при 40 С в течение 2,5-3,5 ч и лишь затем проводят 5 спектрофотометрические изменения.Цель изобретения - сокращение времени определения.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу количест венного определения меланина, включающему инкубацию меланина с химическим реагентом с последующим спектрофотометрированием, меланин инкубируют с 5 .10 -10М раствором нитросинего тетраэолия в диметилформамиде, а спектрофотометрию проводят при 520 нм.Способ осуществляют следующим образом.Пробу содержащую меланиновый пиг 40 мент, добавляют к 5 10 ф -10- М раствору нитросинего тетразолия в диметилформамиде и инкубируют в течение 10- 15 мин, Затем добавляют дистиллированную воду для прекращения Реакции 45 Полученный раствор может стоять в течение нескольких часов беэ изменения интенсивности окраски. Количество образовавшегося формаэана измеряют спектрофотометрически при длине волны 520 нм, Концентрацию меланина рассчитывают по калибровочной кривой зависимости изменения оптической плотности образца от концентрации в нем меланина в мкг сухого веса на 1 мл.55 Контролем служит проба, не содержащая меланина. Время определения меланина предложенным способом составляет 15-20 мин. Рабочий раствор нитросинего тетразолия в диметилформамиде готовят непосредственно в день опыта и хранят в темной посуде, так как он светочувствителен.П р и м е р 1. Определение концентрации меланина чернильного мешка кальмара. Исследуемый образец меланина (4 мкг/мл) суспендируют в дистиллированной воде, 0,3 мл полученной суспензии добавляют в 1,5 мл 5 10-4 М нитросинего тетразолия в диметилформамиде и инкубируют при периодическом встряхивании 15 мин. Затем добавляют 1,0 мл дистиллированной воды для прекращения реакции. Контроль - проба, содержащая 0,3 мл дистиллированной воды и 1,5 мл нитросинего тетразолия в диметилформамиде.Результаты нескольких определений концентрации меланина кальмара приве-дены в таблице.П р и м е р 2.Определение концентрации синтетического ДОФА-меланина.2 мкг/мл синтезированного ДОФА- меланина суспендируют в дистиллированной воде, 0,3 мл полученной суспензии добавляют к 1,5 мл 10М нитросинего тетразолия в диметилформамиде и все последующие операции проводят как в примере 1.Результаты определений приведены в таблице.Предлагаемый способ позволяет ускорить определение меланина более чем в 1 О" раз по сравнению с известным.