Способ определения хлорпропамида в сыворотке крови

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРПРОПАМИДА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ путем осаждения белков, обработки супернатантаимическими реагентами с последующим фотометрированием, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью ускоренияи повышения точности способа, обработку химическими реагентами ведут передосаждением белков, при этом к пробедобавляют метиленовую синь и полученный цветной комплекс экстрагируют хлороформом.1107052 определения хлорпропамида в сыворотке крови, включающий высушивание сыворотки крови заморажиганием, экстрагирование раствором соляной кисло" ты и эфиром уксусной кислоты, нагре О вание экстракта, добавление к нему метанола и измерение УФ- абсорбции 11,Известен также способ определения хлорпропамида в сыворотке крови путем Фотометрирования, основанный на 15 появлении окрашенных в желтык цвет дериватов динитроанилина23.Недостатками известного способа являются трудоемкость и длительность хода определения, а также нЕдостаточ ная его точность при исследовании сывороток крови, содержащих гемоглобин.Цель изобретения - ускорение и повышение точности способа.Указанная цель достигается тем, 25 что согласно способу определения хлорпропамида в сыворотке крови путем осаждения белков, обработки супернатанта химическими реагентами с последующим фотометрированием обработку химическими реагентами ведут перед осаждением белков, при этом к пробе добавляют метиленовую синь, и полученный цветной комплекс экстрагируют хлороформом.35Способ осуществляют следующим образом. В контрольной пробе раствор хлорпропамида заменяют 2 мл 0,05 Н раствором едкого натрия, Вычисляют разницу между оптической плотностью контрольной и опытной проб, а затем на графике находят значение концентрации хлорпропамида, соответствующее этой разнице. Разница между величинами оптической плотности контрольной и опытной проб равная 0,1 соответствует концентрации хлорпропамида 2,5 мгЕ. Изобретение относится к клинической биохимии, а именно к способам определения лекарственного препарата хлорпропамида в крови.Известен способ количественного У пациента берут 10 мл венозной крови натощак, После этого больной принимает 1,0 г хлорпропамида внутрь.40 Через 24 ч после приема препарата у него вновь берут 10 мл венозной крови, которой дают свернуться, после чего сгусток удаляют центрифугированием в течение 20 мин при 1000 об/мин.45 К 2 мл сыворотки крови добавляют 1 мл водного раствора метиленового синего (25 х 10 М), быстро перемешивают, добавляют 3 мл хлороформа и энергично встряхивают в течение 1 мин. Пробирку оставляют до разделения слоев, затем осторожно отсасывают водный слой, переносят в чистую, пробирку, отбирают 2 мл и смешивают с 1 мл 107.-ного водного раствора метафосфорной кислоты для осаждения белков. Осадок отделяют центрифугированием в течение 15 мин при 3500 об/мин. Надосадочной жидкостью заполняют Фотометрическуюкювету и измеряют оптическую плотностьна спектрофотометре при длине волны680 нм против воды. В качестве контроля используется сыворотка крови, взятая у того же больного перед приемомхлорпропамида,По разнице между величинами оптической плотности контрольной и опытной проб определяют концентрациюхлорпропамида в сыворотке крови, пользуясь калибровочным графиком.Построение калибровочного графикапроисходит следующим образом.Готовят стандартные растворы хлорпропамида следующих концентраций,мг.7.: 10,0; 7,5; 5,0; 2,5 (на 0,05 Нрастворе едкого натрия)К 2 млобразца раствора хлорпропамица добавляют 1 мл водного раствора метиленового синего (25 х 10 М), перемешивают и экстрагируют комплекс хлороФормом, встряхивая смесь с 3 мл последнего, По завершении сепарацииводный слой переносят в чистую пробирку, отбирают 2 мл, смешивают с 1 млводного раствора метафосфорной кислоты (103) и Фотометрируют, как указано выше.Измерения повторяют на трех заново приготовленных сериях растворовхлорпропамида и по средним величинамоптической плотности, соответствующимкаждой из его концентраций, строяткалибровочный график. Полученноезначение экстракций откладывают наоси ординат, а соответствующие имконцентрации хлорпропамида в стандартных растворах - на оси абсцисс.Из полученных точек на, осях абсцисси ординат восстанавливают перпендикулярные к осям ординат до пересечениядруг с другом. Точки пересеченияэтих перпендикуляров являются точками графика зависимости оптическойплотности стандартных растворовот концентрации в них хлорпропамида./ Редактор А. Козориз Техред Л,Коцюбняк Корректор А. Тяско Заказ 5751/31 Тираж 823 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 1107П р и м е р 1. Больной П, 54 лет, история болезни В 8790, поступил в клинику пропедевтики внутренних заболеваний с диагнозом сахарный диабет, впервые выявленный, портальный цирроз печени. Жалобы при поступлении на сухость во рту, частые мочеиспускания, кожный зуд, общее недомогание, слабость. При поступлении: сахар крови натощак 11,2 ммоль/л; сахар в моче 4%10Больному было начато лечение диетой с ограничением углеводов и хлорпропамидом. Контроль концентрации хлорпропамида в крови после его приема внутрь проводился предлагаемым способом. Параллельно исследовали уровень гликемии. Через 24 ч после однократного приема внутрь хлорпропамида в дозе 1,0 г его концентрация в крови оказалась низкой (0,75 мг%), уровень гликемии существенно не изменился (10,8 ммоль/л) . Дальнейший прием максимальной терапевтической дозы хлорпропамида в течение 20 дн не привел к нормализации уровня сахара крови натощак и к исчезновению глюкозурии. Концентрация хлор- пропамида в сыворотке крови была низкой (2,5 мг%)Отсутствие компенсации сахарного диабета после перо 30 рального лечения в течение 3-х недель заставило отказаться от проводимой терапии и начать лечение инсулином. В стационаре больной провел 46 дн.П р и м е р 2. Больной Б. 70 лет,5 история болезни В 9240, поступил в .клинику пропедевтики внутренних заболеваний с жалобами на головную боль, редкие сжимающие боли за грудиной, сухость во рту, частые мочеис 40 пускания. Диагноз: сахарный диабет впервые выявленный, ишемическая болезнь сердца, атеросклероз коронарных сосудов. При поступлении: сахар45 052 4крови натощак 12,0 ммоль/л; сахар в моче 6%. Больному быпо начато лечение диетой с ограничением углеводов и хлорпропамидом. Контроль концентрации хлорпропамида в крови после его приема внутрь проводился предлагаемым способом. Параллельно исследовали уровень гликемии. Через 24 ч после однократного приема внутрь хлорпропамида в дозе 1,0 г его концентрация в крови оказалась высокой ,(5,0 мг%), уровень гликемии существенно не изменился (11,6 ммоль/л),Дальнейший прием хлорпропамида вдозе 0,75 г в сутки в течение 3-х дн привел к нарастанию концентрации препарата в крови до 7,5 мг%. Уровеньгликемии натощак все еще оставалсявысоким (8,6 ммоль/л), однако самочувствие больного значительно улучшилось (прекратилась головная боль, исчезла сухость во рту, уменьшилась частота мочеиспускания), Больной был выписан из стационара на амбулаторное лечение. Дальнейший прием хлорпропамида происходил под наблюдением эндокринолога поликлиники. На двадцатый день лечения уровеНь хлорпропамида в крови достиг 9,125 мг%, уровень гликемии натощак нормализовался (4,6 ммоль/л), исчезла глюкозурия. В стационаре больной провел 7 дн,Таким образом, предлагаемый способ позволяет своевременно судить о целесообразности назначения хлорпропамида каждому конкретному больному для компенсации сахарного диабета, сокращая тем самым сроки пребывания больных в стационаре.Предлагаемый способ обеспечивает получение данных о концентрации хлорпропамида в крови после его приема внутрь и позволяет определять малые концентрации хлорпропамнда в сыворотке крови.