Способ получения антибиотика а204

н; аФО П :А Н И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ 296323 Союз Соеетских Социалистических РеспубликК П АТЕ Н ТУ Зависимый от патентаМПК С 126 9/О Заявлено 21.11,1969 ( 1312342/30-15)Приоритет 23.П.1968,707841 и 06.Х 11.196801215, СШАОпубликовано 12.11.1971, Бюллетень8 Комитет по бретеннй и ела рыти УДК 615.779.9(088.8) сете МСССР истро 972 та опубликования описани Авторызобретения ИностранцыЛ. Хэмилл и Мэрвин Мартин ХоенСоединенные Штаты Америки)Иностранная фирмаЭли Лилли Энд КомпаниСоединенные Штаты Америки) Роберт 3 аявител СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА А 204 имеет кислотный характер; содержит Одну тит.руемую группу с рК=6,1, имеет молекулярный вес около 900 при определении по данным титрования. Примерный состав этого вещест ва, %: С 61,74, Н 9,37, О 28,38; удельное яращение плоскости поляризации (а) п 25=+- +68,12 (С=1 вес. %/объем в метаноле). Раствор в хлороформе дает полосы инфракрасного спектра поглощения в интервале от 2,0 10 до 15,0 мкм, 2,95; 3,43; 5,95; 6,87; 7,26; 7,80;8,52; 8,95; 9,17; 9,34; 9,59; 9,82; 10,07; 10,24;10,51; 10,77; 11,40; и 11,80 мкм и не имеет характерного ультрафиолетового спектра поглощения. Инфракрасный спектр поглощения ан тибиотика А 204 в хлороформе показан на выращив среде, глерода,бразцов США),в стенесениясреды.есколь- В кон- рганизы спона ко Изобретение относится к биологическиМ способам получения и очистки физиологически активных веществ, в особенности к способам получения антибиотиков на основе культуры гриба-продуцента.Известны способы получения антибиотиков, при которых гриб-продуцент выращивают ча питательной среде, содержащей источники усвояемого углерода, азота и минеральных солей, в аэробных условиях в глубинной культуре при температуре 25 - 37 С до тех пор, пока в,культуральной среде не образуется достаточное количество антибиотика, а в качестве гриба-продуцента берут представителя Ыгер 1 огпусез, Антибиотик выделяют путем перевода его в соль с последующей адсорбцией этой соли на ионообменной смоле и элюированием ее из последней.Предлагается аналогичный способ получения антибиотика А 204, при котором в качесгве гриба-продуцента используют Ягер 1 оппусеэ а 1 Ьцз ХКК 1. 3384,Соединение А 204 представляет собой кристаллическое вещество белого цвета, которое, будучи перекрисгаллизовано из этилового эфира, плавится при 96 - 98 С, растворимо в сложных эфирах, бензоле, галоидированных углеводородах, диметилсульфоксиде, эфире и кетонах. Оно слабо растворимо в спиртах и очень слабо растворимо в воде. Это вещество фиг. 1,Антибиотик А 204 получают путем вания 5. а 1 Ьцз в аэробных условиях содержащей усвояемый источник у О азота и минеральных солей. Впервые 5, а 1 Ьцз был выделен оиз о почвы, взятых в Перри (шт. Флорида,путем суспендирования образцов почвь рильной дистиллированной воде и на 5 суспензии на пластинки питательной Последние выдерживали в течение н ких дней при температуре около 30 С. це инкубационного периода колонии о мов, образующих А 204, были перенесен О мощью стерильной платиновой петли29 о 32 э 4 3сой агар. Инокулированный косой агар затем выдерживали с целью образования больших количеств инокулиума для получения антибиотика А 204.Этот организм, способный образовывать 5 антибиотик Л 204, был депонирован в коллекции Северного научно-исследовательского отдела Сельскохозяйственного департамента США в Пеория, Иллинойс и известен под номером МКК). 3384. 10 Агар Эмерсона Агар БеннетаПитательный агар Действие на молоко 15 ВосстановлениенитратаОбразование меланина Нитраты восстанавливает,Образует. Морфология Роста нет. Пептон + железо +20 агар Три птон-дрожжевой экстракт Сжижение желати- ны Роста нет. Характеристики культуры на различных средахМалат кальция 25 Температурные тре- бования 30Влияние изменения.рН на мицелий осно- вания Томатная паста совсяной мукой 35 1 СР 2 (дрожже.солодовыйагар) Растворимый пигмент отсутствует. Влияние изменениярН на растворимый пигмент 1 СР 3Агар Чапека Как видно из приведенного, описанный 60 штамм может использовать различные источники энергии, и следовательно могут быть применены различные среды. Однако с целью экономии, получения максимального выхода целевого продукта и более легкого выделения 65 последнего, предпочтительно применять некОТирозиновый агар Глюкоза + аспарагин,Ниже дана подробная характеристикаштамма ХКК). 3384. Полученная спиральная плацента содержит от 3 до 50 спор в цепи, обычно от 10 до 50; споры удлиненные, яйцевидные 1,9;,х,1,3; под электронным микроскопом поверхность спор гладкая. Образования обильные, обратная сторона бледная, желто-зеленая, обильное спорообразование, воздушный мицелик бледно-желтый; растворимый пигмент отсутствует; среда слегка осветленная,Обильный рост; обратнаясторона серовато-желтая;обильное спорообразование,воздушный мицелий белый;растворимый пигмент отсутствует.Обильный рост; обратнаясторона серовато-желтая;обильное спорообразование,мицелий светло-желтый; растворимый пигмент отсутствует.Рост значительный; обратнаясторона белая; значительноеспорообразование, воздушныймицелий белого цвета; растворимый пигмент отсутствует,Рост обильный; обратнаясторона серовато-желтая;обильное спорообразование,воздушный мицелий бледпожелтого цвета; растворимыйпигмент отсутствует,Рост обильный; обратнаясторона бледного желто-зеленого цвета; обильное спорообразование, воздушный мицелий белого цвета; растворимый пигмент отсутствует.Рост хороший; обратная сторона белая; хорошее спорообразовапие, воздушный мицелийбелого цвета; растворимыйпигмент отсутствует.Рост очень незначительный,окраска не обнаружена.Рост значительный; обрат.ная сторона желтая; значительное спорообразоваиие, воздушный мицелий бледно-жел.того цвета; растворимый пигмент отсутствует,Рост обильный; обратная сторона серовато-желтая; обильное спорообразование, воздушный мицелий желтовато-серого цвета; растворимый пигмент отсутствует.Рост очень незначительный, окраска не обнаружена.Рост значительный, обрат. ная сторона серовато-желтая; значительное спорообразова. ние, воздушный мицелий белого цвета; растворимый пигмент отсутствует.Через 14 дней изменений нет. В течение 14 дней не происходит.Рост и спорообразование значительные при 26"С, хорошие при 30 С; вегетативный рост при 37 С; следы образо. вания только вегетативного роста при 43 - 49 С При 55 С роста нет.Для всех сред, кроме 1 СР4, влияние отсутствует. В случае 1 СР4 при обработке 0,05 н. НС 1 или 0,5 н. МаОН происходит изменение цвета от коричневого до белого или обесцвечивание. Усвоение различных источников1-арабинозасахарозад-ксилозад-фруктозаглюкозарамнозарафиноза1-инозитд-маннитсреда без углерода(контроль)Условные обозначения:усваиваетусвоение возможноусвоение мало вероятноне усваивает.торые относительно. простые среды. Например, к числу сред, пригодных для получения антибиотика, относятся усвояемые источники углерода, такие, как глюкоза, фруктоза, крахмал, глицерин, меля сса, декстрин, сахар-сырец и т. д, Лучшим источником углерода является глюкоза, Кроме того, применяемые среды включают источники усвояемого азота, напрлмер соевую муку, замоченную кукурузу, дрожжи, размолотые семена хлопчатника, мясной экстракт, пептоны (мяса или сои), казеин, смеси аминокислот и т. п. Лучшими источниками азота являются пептоны, соевая мука, смеси аминокислот и т. п. Из неорганических питательных солей, которые могут быть включены в среду, ооычно применяются соли, способные образовывать ионы натрия, калия, аммония, кальция, фосфат-ион, сульфат-ион, хлорид-ион, карбонат-ион и т. д.Для оптимального роста и развития штамма в среду необходимо также включать микроэлементы, Такие элементы ооычно присутствуют в малых количествах в других компонентах среды, причем количество их достаточно для роста используемого штамма,Первоначально значение рН среды может быть различным. Однако наиболее предпочтительно от 6,5 до 7,5. При изучении других актиномицетов наблюдалось постепенное повышение рН среды в процессе роста организма по мере образования антибиотика до 7,0 - 7,6 и выше, причем конечное значение рН, хотя и частично, зависит от первоначального значения рН среды, присутствующих в среде буферных компонентов и продолжительности роста организма.Для получения антибиотика А 204 выбраны аэробные условия выращивания в глубинной культуре, При получении сравнительно небольших количеств можно применять встряхивание колбы и поверхностное выращивание в бутылях. Но для получения большлх количеств лучше применять аэробное выращивание в глубинной культуре в стерильных условиях. Среда в стерильной емкости может быть инокулирована спорообразующей суспензией. Но ввиду замедления роста, наблюдаемого при применении спорообразующей суспензии, предпочтительной является вегетативный инокулиум, при этом оборудование для ферментации используется более эффективно,Желательно сначала получить вегетативный инокулиум путем инокуляции сравнительно небольшого количества среды спорами организма, а после того, как будет получен молодой активный вегетативный инокулиум, перенести его в асептических условиях в большую емкость. Среда, в которой получается вегетативный инокулиум, может быть либо той же, какая применяется для промышленного производства антибиотика А 204, либо другой,Рост организма, дающего антибиотик А 204, происходит в широком интервале температур от 25 до 37 С. Оптимальной является температура 25 - 30 С, Обычно максимальное обра 5 10 15 го 25 30 35 40 45 50 55 бО бб зование антибиотика происходит в течение 48 - 72 час после инокуляции среды.Ввиду того, что процесс выращивания проводят в глубинной культуре в аэробных условиях, через среду продувают стерильный воздух. Для эффективного роста организма и производства антибиотика А 204 расход воздуха, подаваемого в емкости, составляет от 0,2 до 0,4 объема в 1 лшн на 1 объем культуры. Предпочтительно применять 0,35 объема воздуха в 1 лик на 1 объем среды.Концентрацию антибиотика в среде в процессе ферментации можно легко проверять путем анализа образцов среды на активность замедления роста тест-организмов. Установлено, что для этой цели можно применять ЯарЬу 1 ососсцз ацгецз, 5 агс 1 па 1 ц 1 еа, МусоЬас 1 ег 1 цгп ал.1 гп и Вас 111 цз зцЫ 1 Из. Испытание образцов можно проводить хорошо известными методами нефелометрии или методом колпачка и пластинки.Как правило, максимальное образование А 204 происходит в течение двух-трех дней после инокуляции среды в,процессе глубинного аэробного выращивания или во встряхиваемой колбе.Активный антибиотик, получаемый в процессе ферментации, может находиться в бульоне или в мицелии, либо 1 и там и там. Соответственно, методика выделения, применяемая при получении А 204, рассчитана на максимальное извлечение антибиотика из люоого или обоих источников, Так, например, полученный бульон можно профильтровать, и фильтр ат экстр агировать соответствующим растворителем с целью извлечения антибиотика, не задержавшегося в лепешке мицелия. Кроме того, антибиотик, находящийся в лепешке мицелия, извлекается путем тщательной экстракции соответствующим растворителем. Во всех случаях антибиотик можно выделить из экстрагирующего растворителя известными методами,Химический и физический анализ кристаллического А 204 свидетельствует о присутствии четырех-пяти метоксигрупп.Хроматография антибиотика А 204 на бумаге Ватман М 1 дает следующие значения: %=0,14 при применении в качестве растворителя воды, метанола, ацетона и бензола при объемном соотношении 72:24,5:3:0,5; И= =0,87 при применении в качестве растворителя 10%-ного водного раствора и-пропанола И=О,ЗЗ в растворителе, содержащем воду, метанол и уксусную кислоту в соотношении 12:3:1 (раствор был доведен до рН 10,4 добавлением ИН 4 ОН, а затем до рН 7,3 добавлением Н,РО.). При определении указанных вь:ше данных антибиотик наносили на бумагу в виде метанольного раствора. Биоавтографы получали, помещая бумажные хроматограммы на пластинки агара с посевом Вас 111 цз зцЫ 111 з в качестве тест-организма.Если А 204 подвергнуть хроматографии в тонком слое на пластинках силикагеля в. ра5 10 15 20 Была приготовленастава, г/л:Соевая мукаКазеинКаКОзСироп глюкозыСаСОзВодопроводная среда следующего со 50 55 15,0 1,0 3,0 20,0 2,5 до 1 лвода 60 б 5 створителе этилацетате с применением вани- лина или серной кислоты в качестве индикатора, то значения Ю составят около 0,8. Натриевая соль антибиотика А 204 представляет собой кристаллическое твердое вещество белого цвета с т. пл, 144 - 145 С и имеет молекулярный вес около 960 при определении с помощью рентгеновского анализа.Натриевая соль растворима в сложных эфирах, бензоле, галоидированных углеводородах, диметилформамиде, диметильсульфоксиде, простом эфире и кетонах; слабо растворима в спиртах. Установлено, что удельное вращение плоскости поляризации (а)п 25 кристаллической натриевой соли антибиотика А 204, высушенной при комнатной температуре в вакууме над безводным хлористым кальцием в течение 15 час, составляет+54,95 (С=2 вес, о/о объем в метаноле).Инфракрасный спектр поглощения натриевой соли антибиотика А 204 в хлороформе показан на фиг. 2, Ниже приводятся различимые полосы инфракрасного спектра в интервале от 2,0 до 15,0 мкм 3,1 - 3,2 (расплывчатые);3,44; 6,26; 6,87; 7,29; 7,67; 7,79; 8,45; 8,96; 9,11;9,18; 9,36; 9,56; 9,82; 10,05; 10,26; 10,54; 10,95; и 11,77 мкм.Молекулярный вес кристаллогидрата серебряной соли антибиотика А 204, определенныц по данным рентгенографии, составляет 1099. Кристаллы серебряной соли бесцветны, но чувствительны к действию света и рентгеновых лучей и становятся темно-коричневыми после двух дней облучения на воздухе. Плотность серебряной соли, определенная флотацией в водном УпС 1, равна 1,293 г/см.Единственным правилом затухания является И 1: Й+А=Еп, что указывает на нецентральную моноклинную пространственную группу Сз. Имеется четыре асимметричных моноклинных единицы и одна молекула на асимметричную единицу в ячейке, имеющей размеры, А: а 25,977; 6 14,517; С 14,418;В 91,94.Как и многие антибиотики, А 204 иногдавключает несколько тесно связанных компонентов. Второй компонент не найден во всехпроцессах ферментации, а если он присутствует, то количество его обычно составляетменьше 5% от общего выхода. Этот второй,редко обнаруживаемый микрокомпонент, былусловно обозначен как А 20411. До сих пор онбыл получен только в виде смешанной натриево-калиевой соли. Установлено, что смешанная натриево-калиевая соль А 20411 обладает активностью, сопоставимой с антибиотиком А 204.Средний из нескольких элементарных анализов кристаллической смешанной натриевокалиевой соли А 204, высушенной в вакуумепри 80 С над пятиокисью фосфора, дал следующие результаты, %: С 60,66, Н 8,76 иО 27,09,25 30 35 40 45 Несколько анализов на атомарную абсорбцию показали, что соединение является смешанной натриево-калиевой солью с различны. ми соотношениями, содержащей 1 моль смешанного катиона на 1 моль А 204.Смешаннная натриево-калиевая соль А 20411 не имеет характерного ультрафиолетового спектра поглощения. Хроматография этой соли (П фактора) в тонком слое на силикагелевых пластинках дает К=0,75 в этилацетате с применением серной кислоты в качестве индикатора,Антибиотик А 204 проявляет инсектицидную, анадиицидную, микробицидную и фунгицидную активность, в том числе против организмов, вредных для сельскохозяйственных животных и растений.Ниже даны примеры, иллюстрирующие изобретение. П р и м е р 1. Получение антибиотика А 204 во встряхиваемой колбе.Споры Ь. а 1 Ьцз ККК 1. 3384 наносили на пластинки питательного агара, изготовленного из 10 г декстрина, 2 г ферментационного переваренного казеина, 1 г мясного экстракта, 1 г дрожжевого экстракта, 20 г агара и воды, в количестве, достаточном для доведения объема до 1 л, и выдерживали их в течение 4 - 5 дней при 30 С, Пластинки были залиты стерильной дистиллированной водой, и их слегка поскоблили с целью удаления организмов и создания их водной суспензии, Для инокуляции 100 мл вегетативной смеси брали 1 мл суспензии спор.Вегетативную культуральную среду готовили путем смешения 15 г глюкозы, 15 г соевой муки, 5 г твердых частиц замоченной кукурузы, 5 г хлористого натрия, 2 г карбоната кальция в водопроводной воде из расчета доведения объема до 1 л. Вегетативный инокулиум встряхивали на поршневой качалке, имеющей ход 2 дюйма (4,8 см) при 108 об/мин. Полученный таким образом инокулиум затем применяли для получения антибиотика А 204 следующим образом. Порции по 100 лл этой среды поместили в колбы Эрленмейера на 500 мл и стерилизовали при 120 С в течение 30 мин. После охлаждения каждую колбу инокулировали 5/О-ным вегетативным инокулиумом, полученным, как описано выше.Колбы встряхивали в течение 48 час при 30 С на ротационной качалке, работающей со скоростью 250 об/мин. рН инокулированнойКС 1КН 2 РО 4Соевая мукаВодопроводная вода 10 15 20 среды был в пределах от 6,5 до 7,5. К концу ферментационного цикла значение рН повысилось до 7,0 - 7,6. Активный антибиотик был обнаружен и в бульоне и в мицелии. Его активность определяли путем проверки действия бульона и мицелия на В. вцЫ 111 з с применением известного дискового метода или метода колпачка и пластинки.Весь бульон (25 л), полученный описанным выше способом, профильтровали в вакууме через диатомовую землю. Лепешку мицелия три раза подвергали экстракции половиной объема 50%-ного водного метанола. Три полученных экстракта соединили и концентрировали в вакууме с целью удаления метанола. Профильтрованный бульон и водный концентрат растворов экстрактов мицелия соединили, рН смеси довели до 3 добавлением соляной кислоты и экстрагировали раствор два раза половиной объема этилацетата, Этилацетатные экстракты объединили и концентрировали до сухого состояния; затем растворили в хлороформе (10 мл на 1 г твердого вещества). Раствор в хлороформе пропустили через колонку размером 12(40 дюймов (29 К 96 см), наполненную Питтсбургским углем, содержащим 2 г углерода на 1 г твердого вещества. Затем колонку промыли пяти - десятикратным объемом хлороформа (по отношению к первоначальному объему),Промывочные фракции хлороформа соединили, концентрировали в вакууме до сухого состояния, растворили в небольшом количестве теплого метанола, охладили и полученные кристаллы отфильтровали, После перекристаллизации было получено 8,9 г кристаллов антибиотика А 204, содержащих от 1200 до 1400 микробиологических единиц на 1 мг. Кристаллы были идентифицированы как антибиотик А 204 с помощью ХЧК, инфракрасного спектра, хроматографии в тонком слое и хроматографии на бумаге; т. пл, кристаллов 96 - 98 С. П р и м е р 2, Получение антибиотика А 204.Антибиотик А 204 получили по методике, описанной в примере 1, но применяли среду следующего состава, г:Глюкоза 15Соевая мука 15 Замоченная кукуруза 5 МаС 1 5 СаСОз 2 Водопроводная вода до 1 л Полученный антибиотик был идентифициюван, как А 204 и имел т. пл. 96 - 98 С. Пример 3. Получение антибиотика А 204.Антибиотик А 204 получали способом, опианным в примере 1, но применяли середу следующего состава, г:Глюкоза 20 (ХН 4) 250 5 СаСОз 8 25 30 35 40 45 50 55 60 65 Полученный антибиотик был идентифицирован, как А 204 и имел т. пл. 96 - 98 С. Пример 4. Получение антибиотика А 204.Антибиотик А 204 получили способом, описанным в примере 1, но применяли среду следующего состава, г:Глюкоза 10 Усвояемая мелясса 20 Пеп тон 5 СаСОз 2 Водопроводная вода до 1 л Полученный антибиотик был идентифицирован, как А 204 и имел т. пл. 96 - 98 С. Пр и м е р 5. Получение антибиотика А 204 на пилотной установке.В колбу на 250 мл поместили 50 мл вегетативной среды, включающей 10 г/л декстрозы, 25 г/л растворимого крахмала, 15 г/л обрушенных соевых бобов, 10 г/л жидкости после замочки кукурузы и 2 г/л СаСОз в водопроводной воде; рН довели до 6,5 (ХаОН). Содержимое колбы инокулировали 5%-ной суспензией, полученной способом, описанным в примере 1, из питательной среды, содержащей 10 г глюкозы, 10 г дрожжевого экстракта, 5 г ЫаС 1, 0,01 г Ге 504 7 НзО, 0,25 г МдЬОХ 7 Н О и 20 г агара Меера (промытого три раза) в 1 л деионизированной воды.Инокулированную вегетативную среду выдерживали при 30 С в течение 48 час н ротационной качалке сдугой диаметром 2 дюйма (4,8 см), работающей со скоростью 250 об/мин. Порция полученной таким образом вегетативной культуры в 16 мл применялась для ннокуляции колбы емкостью 1 л, содержащей 200 мл вегетативной среды. Инокулированную вегетативную среду выдерживали при 30 С в течение 30 час на ротационной качалке, имеющей дугу, диаметром 2 дюйма и работающей со скоростью 250 об/мин, Порцию 200 мл полученной вегетативной культуры применяли для инокуляции бродильного чана на 40 л, содержащего 25 л стерилизованной ферментационной среды, включающей 0,2 г/л пеногаси. теля, 25 г/л декстрозы, 15 г/л обрушенных соевых бобов, 3 г/л темной меляссы, 1 г/л казеина и 2,5 г/л СаСОз в водопроводной воде. Ферментацию проводили при температуре 80 С в течение 30 час после инокуляции.В процессе ферментации проводили перемешивание со скоростью 420 об/мин. Аэрацию во время ферментации производили со скоростью 0,4 куб. фута воздуха на 1 куб. фут среды в 1 мин. Выделение антибиотика осугцествляли способом, описанным в примере 1. Полученный антибиотик был идентифицирован, как А 204, и имел т, пл. 96 - 98 С.5 б 7 б У О2 3 аДлина палны (мкм) фиг. 11П р и м е р 6, Получение солей антибиотика А 204 из бульона и мицелия.Соли, образованные антибиотиком А 204 и щелочным металлом, аммонием и амином, получали из бульона и мицелия способом, описанным в примере 1, путем доведения рН смеси профильтрованного бульона с водными концентратами экстракта мицелия по меньшей мере до 8,5 путем добавления соответствующей гидроокиси шелочного металла, аммония или амина, двухкратного экстрагирования половины объема этилацетата и дальнейшей обработки по описанной выше методике. Кислоты и ее соли могут быть перекристаллизованы также из различных кетонов, слож ных эфиров, спиртов и бензол-углеводородных смесей, или могут быть очищены другими известными методами, например в хроматографической колонке и др. П р и м е р 7. Получение натриевой соли антибиотика А 204.К 100 мг антибиотика А 204, полученного в примере 1, растворенного в 1 мл ацетона, добавили одну каплю 5 н, ХаОН и 1 мл воды. Смесь осветлили путем легкого нагревания и оставили стоять при 15 С до тех пор, пока не произошла кристаллизация. Кристаллы были отфильтрованы и перекристаллизованы из водного раствора спирта. Было получено 72 мг натриевой соли антибиотика А 204 с т, пл.144 в 1 С. П р и м е р 8. Получение калиевой соли антибиотика А 204.Для получения калиевой соли в описанном выше способе каплю 5 н, МаОН заменили одной каплей 5 н. КОН. П р и м е р 9. Получение серебряной солиантибиотика А 204.670 мг натриевой соли антибиотика А 204растворили в 40 мл метанола, смешали с ра 5 створом 270 мл нитрата серебра и 2 мл водыи оставили стоять при комнатной температур в темноте в течение 3 час. Раствор выпарили насухо и промыли водой с целью удаления избытка нитрата серебра. Остаток растворили 10 в 10 мл метанола при нагревании, профильтровали в нагретом состоянии через воронку из пористого стекла и оставили стоять на 16 час при 50 С. Были получены крупные белые прямоугольные кристаллы серебряной со ли антибиотика А 204. После перекристаллизации из водного ацетона получили 450 мл серебряной соли антибиотика А 204. Молекулярный вес по данным рентгеновского анализа составил около 1099.20 1. Способ получения антибиотика А 204,включающий выращивание гриба-продуцента25 из группы Ягер 1 огпусез на питательной среде,содержащей источники усвояемого углерода,азота и минеральных солей, при температурепредпочтительно 25 - 37 С в глубинной культуре в аэробных условиях до тех пор, пока в30 культуральной среде не образуется достаточное количество антибиотика, а также включающий выделение последнего, отличающийсятем, что в качестве гриба-продуцента берут51 гер 1 огпусез аЬцз ЯКК 1. 3384,35 2, Способ по п. 1, отличающийся тем, чтовыделение антибиотика А 204 проводят путемего перевода в соль с последующей адсорбцией этой соли на смоле и элюированием ееиз смолы.17 астпта (см-)15 ПП та 1 т ИП ИЮ 1 ППП 950 9 ПП Б 5 П БПП 75 П 7 ПП 650 ЬБП на Япны 1 мкм) Фиг.гСоставитель М. ДранишниковРедактор Е. П. Хорина Техред 3, Н, Тараненко Корректор О. Б. Тюри 3 Подписное овете Министров СССР аказ 3827/19 Изд.1416 ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и Москва, Ж, Раушпография, и р. Сапунова юпп авлюгю люпо (, га