Способ получения пептидов

1191 (11) 6, А 6 1 К 3 7 /02 53)5 С ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИК ПАТЕНТУ 11 -04 -04 4015500/2 3263400/2 28,01.86.09.0381 128953; 1 10.03.80; б н т 827810.06.80 тиво 23.05.90. Дзе Юниве Джеймс Вал потоксчаютН в -СН анг4.4 фрз 547 овые вещес по деист но более ию ср устой х и д н), а(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПЩЦО (57) Изобретение касается пеп в частности получения пептида ф-лы К-А-Б-СН-СН(СНз) - С(0)-К л в,а - бо оза 40 е длительны по ей против 100 мг/к табл. отноаени высокоактивных оксичн ротиво эобретен относится к спосо зводных пептидов - ки активных соедин найти применение в ноопучения пр ых биопогич чивых к гидро орфф уских ине ннимедиредах,астворитепей,логи которые могутцнне.Цель иэобрния новых про польэуев тонком Системымые при хромслое силика то гр афиров анля. тения - способ пол зводных пепти(ов(21) (62) (22) (23) (31) (32) (33) (46) (71) (72) и Аль СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСН ИХРЕСПУБЛИН Бюп, У 19сити оф Майамиьтер Райан(ИБ)07(088,8)Любке К, Пептидь БРЕТЕНИ Н, бензоил, циклопентакарбонкл, утилоксикарбонил, ацетил; А- ил, О-лейцнл, П- и 1.-фенилаланил; -пролил, которые проявляют пропертоническую активность, что быть использовано в медицине. создание новых активных и маичных пептидов, Последние полу- реакцией соединений А-л й СННз) С(0)-К, и К-А-Н,1) гидролизу в б средах (6 ч п использовании карбонил-ал ноил) -1.-прол действию (его ертоническои активности с сная кислота:зтипацетат:водЯМР-спектральные данные полученына приборе 60 МГц,Все соединения получены по методике, аналогичной описанной для И- 10(И-бензоил-Ь-фенилаланилтио)-2-13-метилпропаноил 1-Ь-пролина.К раствору 675 мг И-бензоил.-фе.онилаланина в 5 мл ДМФА при -15 Сдобавляют 406 мг И,М-карбонилдиимидазола в 5 мл ДМФА и результирующийо,раствор перемешивают при -10 С в течение 1 ч, затем добавляют 543 мгИ-(3-меркапто-1)-метилпропаноил)-Ь -пролина и 0,35 мл триэтиламина и перемешивают 1 О мин при той же температуре и еще 50 мин при комнатной температуре.Растворитель отгоняют при понижено,ном давлении при ЗО С и к остатку 25добавляют 20 мл воды и 20 мл бензола,Смесь доводят до рН 2 добавлением4 н, раствора НС 1 при перемешиваниии охлаждении на ледяной ванне,Органический слой дважды промывают насыщенным раствором ИаС 1 и органический растворитель удаляют отгонкой на центробежном испарителе послеосушения над безводным М 8804.Остаток очищают хроматографией вколонке на 810 (2 см х 45 см) и элюируют смесью СНС 1 и МеОН (0,5-2 ХМеОН в СНС 1 э).Пиковые фракции собирают воединои растворитель отгоняют при пониженном давлении с получением 7055 мг.1 о = 3, 4 х 1 ОИ-(И-бензоил-фенилаланилтио)2-11-метилпропаноил -1.-пролин - выход 55,61; (с 0 =-25,1; 1 И (6)=0,56;К 1 (7)=0,74.Проведены биологические испытаниясоединений, полученных в условияхпредлагаемого способа.Определена противогипертоническаяактивность предлагаемых соединенийи известного - каптоприла.Значение Л О - концентрация501-ной ингибиторной активности наангиотензин превращающий фермент.Система анализа: 1 мл инкубационной смеси, состоящей из 0,6 мл боратного буфера, 0,2 мл 17,5 мМ бензоилГли-Гис-Лей боратного буфера, смешивают боратный буфер и раствор фермено,та, инкубируют при 37 С в течение60 мин,Боратный буфер: 0,1 М борная кислота, содержащая 0,8 М ИаС 1 и 0,1 МИаСОз, содержащий 0,8 М ИаС 1, смешивают и рН доводгт до 8,3.АСЕ - сухой ацетоновый экстракткроличьего легкого,Измерение - Уо поглощение при228 нм после экстракции бензоил-Глиэтилацетатом,В табл, 1 приведен средний процентингибирования вызванной гипертонии20 30 35 По меньшей мере одно из предлагаемых соединений а именно Х(11-цик 55 лопентилкарбонил)-аланилтио)-2-0- метилпропаноил -1.-пролин (срс-а 1 а- -БО), показал неуменьшающуюся эффективность в течение от %) до 180 мин гие минуты в кровеносной системекрыс после его введения. Эти данныедля двух соединений приводятся ниже,Внутривенное введение,36 мг 11 в 3-(И - бензоил,-фенилаланилтио)-2-1)-метилпропаноил-Ь-пролина (В -Ь-РЬе-БО) и 11- 3-(11-бензоил 31)-Фенилаланилтио)-2-1)-метилпропаноил-Ь-пролина (В-Рйе-БО) в 0,5 мл0,1 М раствора 11 аНСОз вводят внутривенно двум крысам линии 511. Вес каждой крысы 360 г, перед инъекциейкрыс связывают на 21 ч. С помощьюжидкостной хроматографии определяютконцентрацию в плазме введенного соединения и продуктов его гидролиза:бензоил)-Аенилаланина (В -П-РЬе)и бензоил-Фенилаланина (В -ЬгРПе).Данные приведены в табл. 3.Пероральное введение. Связаннымна ночь крысам весом 350 г вводятперорально 100 мг на 1 кг массы телаИ- ГЗ-(бензоил-Ь-Фенилаланилтио)-2-0 метилпропаноил-Ь-пролина. Испытуемый раствор содержит 20 мг М-(бензоил-Ь-фенилаланилтио)-2-1)-метилпропаноил-Ь-пролина в 1 Е-ном водномрастворе гумиарабика. Концентрацию11- 3-(бензоил-Фенилаланилтио)-2-0 метилпропаноил-Ь-пролина и продуктаего гидролиза (бензоил-Ь-фенилаланина) определяют в плазме крови, отбираемой из воротной вены, и в потокежелчи с помощью жидкостной хроматографии. Данные приведены в табл.4,Известно, что каптоприл напротивбыстро разрушается с образованием дисульфида и других продуктов метаболизма, каждый из которых неактивен 40в качестве ингибитора.Через 60 мин инкубирования с плазмой крови крыс, человека, обезьян исобакБ-каптоприл, оставшийся безизменения, составляет соответственно 45О, 7, 10 и 25 И, а основным продуктомразложения является дисульфид.Продукт центрифугирования при9000 х 1 гомогената печени, почек и кишечника крыс представляет собой через5020 мин продукт почти полного превращения каптоприла в его дисульфид идругие соединенияпосле перорального введения. Данные,подтверждающие это, приведены втабл. 1. Показано, что каптоприл достигает пиковой эфФективности при90 мин, после чего следует падениеэффективности. 11 о истечении 180 минИ- ЬЗ-(М-циклопентилкарбонил-П-аланилтио)-2-0-метилпропаноил-Ь-пролиностается более эффективным ингибитором без всяких признаков того, чтоего действие ослабевает.Сравнительные испытания показали,что действие на нормального человека40 мг (0,096 ммоль) М-(И-циклогексиллкарбонил-аланилтио)-2-Э-метилпропаноил-Ь-пролина более длительнопо сравнению со 100 мг (0,46 ммоль)каптоприла, Эти результаты дают подтверждение тому, что сложные тиозфирные производные каптоприла с ациламинокислотами обладают улучшеннымдействием по сравнению с самим капто.прилом,Предлагаемые соединения обладаютбольшой химической устойчивостью.Кап 1 оприл имеет необычайно короткийсрок хранения, период полураспада егов водных растворах составляет примерно 30 мин. Сухой пороыок разлагаетсяболее чем на 50 Ы при выдерживании3 недели при 85 С.Предлагемые соединения, не имеясвободной меркаптогруппы, сами по себе устойчивы. Их растворы могут храниться в течение длительного периодавремени, так раствор М-(11-бензоилВ-Фенилаланилтио)-2-Б-метилпропаноил -Ь-пролина в смеси метанола с водой (1;1) в концентрации 1 мг/мл непроявляет никаких признаков разложения спустя 6 ч хранения. Кроме того,эти соединения не требуют подмешивания восстановителя к их поронкообразным Формам с целью избежать их димеризации, характерной для каптоприла.формула изобретенияСпособ получения пептидов общейформулыгде К - водород,.бензоил, циклопентакарбонил, трет-бутилоксикарбонил, цетил;Ио 1567125 А - ИИ-аланил, И)-лейцил, Э- и И,- Фенилаланил;К - И.-пролил,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что осуществляют взаимодействие соединений общей Формулы О Таблица Соединени активность при времени действия, минГ Т 3 20 1 ио)5 о)л - 3- ( И-Апет ил илтио)-2-И-метиропаноил -И.-про,-про 28 23 36 58 птоприл л и етод инкуирования оединен Ы- Гз- (ИИ-Цикбо нил-Б-ала И)-метилпроп пролин опентакарилтио)-2 ноилй-и,-Ьутилоксил-И)-аланилтио) -илпропаноилкарбони 2-И)-мет 9-прол 49 цилтиопаноилм-(ии-Ал метилппролин 0нз-он- н-сЯ 1Нз И-(Х-Циклопен карбонил-Б-алани 2-Ии-метилпропано И.-пролинИ(М-трет-Буто карбонил)-алики 2-П-метилпропано И.-пролинИиИ н 7 -Аце т ил-ИИ-ле й- -2-Б метилпро -И,-пролин 105, анилтио-Ииопаноил)-1.- 86 с соединением общей Формулы К-А-Н,где К,К и Л имеют указанные значения. Приоритет по признакам,002 ,054 Желч ил 0,677 0,786 49 30 0,102 0,164 Составитель В,ВолковаРедактор И,Пмакона Техред Л.Сердюкова Корректор О,Кранпона Заказ 1231 Тираж 318 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 11 11роизводстненно-издательский комбинат Патент . г.ужгород, ул, Гагарина,101 М-(БензоилФенилаланилти2-0-метилпропил,-пролинВ -Р-РЬе3 М- (Бензоил.-фенилалатио)-2-11-метилпропаноилпролинБензоил.-енилаланинИ-(Бензоил.-Аенилалатио)-2-0-метиллропаноилпролинБензоил,-Ьенилаланин