Способ определения виснадина

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 601 М 21 с ИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ СВИДЕТЕЛЬСТВУ И К АВТОРСКОМ СПОСОБ ОГ РЕДЕЛ Е НИ Я ИНА путем обработки анализируы химическим реагентом с после- измерением интенсивности флуоотличающийся тем, что, с цешения чувствительности и селекопределения и сокращения времееления, в качестве химического используют водный насыщенный рома и измеряют интенсивность нции полученного раствора. й медицин с де(еггп 1 паоп 11 ягощ) в.1970, ч. 22,ский В. П идентификасс-пирона, -вып. 3,ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Курский государственныский институт(1 оп о 1 дгцдз соп 1 ап 1 пд сагЬО/5 Рйапп рЬаггпасо РАЯ,5, п. 337 - 343.Федорин Г. Ф., ГеоргиевПрименение хроматографии дляции некоторых производных Э" - иРастительные ресурсы, 1973т. 1 Х, с. 467 - 472.(54)(57)ВИСНАДемой пробдующимресценциилью повытивностини опредреагентараствор бфлуоресце 1191789 АИзобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения виснадина, и может быть применено для качественного и количественного анализа этого соединения в различном материале для фармацевтических исследований,Виснадин представляет собой производное фуранохромона и содержится в плодах растения аммизубная,Целью изобретения является повышение чувствительности и селективности определения и сокращения времени определения.Пример . Качественное определение виснадина.К 1 - 2 мг виснадина прибавляют 8 - 10 мл дистиллированной воды, 2 капли водного насыщенного раствора брома и встряхивают. В ультрафиолетовом свете со светофильтром УФС - 3 или УФС - 6 наблюдают яркую фиолетовую флуоресценцию.Пример 2. Качественное определение виснадина в растительном сырье.1 - 2 г измельченного сырья экстрагируют 100 мл смеси этилового спирта и хлороформа (3:7). Для выделения виснадина применяют хроматографию на тонком закрепленном слое силикагеля марки 1.Я 5/40 р+1 ЗЯ гипса. Пластинки активируют при 110 С в течение 30 мин, 0,1 мЛ экстракта наносят на пластину и хроматографируют в системе растворителей гексан этиловый эфир - этилацетат (12:12: ). После этого пластину высушивают и опрыскивают водным насыщенным раствором брома. В УФ-свете наблюдают флуоресцирующее ярко-фиолетовое пятно, что свидетельствует о присутствии виснадина,Пример 3. Количественное определение виснадина в препарате Ависан.Таблетки Ависан содержат по 0,05 г суммы фурокумари нов и хр омонов, выделенных из аммизубной. Точную навеску (0,350 г) мелкоизмельченных таблеток Ависана переносят в мерную колбу на 100 мл, прибавляют 20 мл 96 О,"-ного этилового спирта, встряхивают в течение 5 мин и добавляют дистиллированную воду до метки. Энергично встряхивают, растворяя препарат, 5 - 10 мин. Данный раствор Ависана переносят в делительную воронку и экстрагируют 100 мл хлороформа, приливая его порциями по 10 мл. Аликвотную часть хлороформной вытяжки (10 мл) упаривают досуха на водяной бане и остаток растворяют в 1 мл этилового спирта (96 Я) и 8,9 мл воды. К полученному раствору добавляют 0,1 мл водного насьпценного раствора брома и измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора по отношению к стандартному с содержанием виснадина 10 мкг/мл.Содержание виснадина определяют по калибровочному графику. Результаты опре деления виснадина в Ависане представлены в табл. 1. Таблица 1 Найдено виснадина, гА - 3,5 о а = 40610 + + 1410 а 20 1 таблетка препарата содержит 0,00041 гвиснадина, т.е около 8 Я. При данной методике определения другие соединения в растворе с бромом не флуоресцируют, что проверялось опытным путем, Полнота экстрагирования (93 - 95 Я) проверялась. хроматографированием оставшегося послеэкстрагирования хлороформом раствора препарата.30 Пример 4. Количественное определениевиснадина в препарате Фловерин.Таблетки Фловерин содержат по 0,05 гвиснадина и дигидросамидина.Точную навеску (0,350 г) мелкоизмельченных таблеток Фловерина переносят в 35 мерную колбу на 100 мл, прибавляют20 мл 96 О;-ного этилового спирта, встряхивают в течение 5 мин, добавляют дистилл ированной воды до метки, Энергично встряхивают 5 - 10 мин, растворяя препарат., 40Данный раствор препарата переносят в делительную воронку и экстрагируют 100 мл хлороформа, приливая его порциями по 10 мл, Аликвотную часть хлороформной вытяжки (25 мл) упаривают досуха на водя-.ной бане и остаток растворяют в 0,2 мл 45 гексана. Это количество наносят микропипеткой на хроматографическую пластину с тонким закрепленным слоем силикагеля 1.Ь 5/40,ц + 1 ЗЯ гипса. Хроматографируют в системе растворителей гексан - изоамиловый спирт (2:1) Кг виснадина рав но 0,58, Зону виснадина, выявленную повеличине И или по стандартному образцу виснадина, количественно переносят в пробирку и элюируют 9,9 мл дистиллированной воды. Полнота десербции составляет 98 - 99 Я. К раствору, отделенному от осадка после элюирования, добавляют 0,1 мл водного насыщенного раствора брома.Флуориметрируют исследуемый раствор по отношению к стандартному с содержанием1191789 310 мкг/мл виснадина. Содержание виснадина н образце определяют по калибровочному графику. Таблетки Фловерина содержат около 48% виснадина. Пример 5. Количественное определение виснадина в аммизубной.5 г мел коизмельченных плодов растения экстрагируют 100 мл смеси 96%-ного этилового спирта и хлороформа (3:7) .0,1 мл этого раствора наносят на хроматограмму из силикагеля марки 1.5 5/40 ц+ +13% гипса, активированную 30 мин при 11 ОС. Пластину с нанесенной пробой высушивают и помещают в камеру с системой растворителей гексан - диэтиловый эфир - этилацетат (12:12:1) и хроматографируют 15 восходящим методом. После высушивания Таблица Цвет флуоресценции после обработки раствором брома Название кумарина На хроматограмме в тонком слое силикагеля В растворе марин незаме- ный 6-Метилкумарин Бледно-голубой ллиферон 6 едно-голубои елли Виснадин рко-фиолетовый Ярко -фиолетовый Императо Бледно-синий едно-синий, быстро нидин атухающии елицин Бергапте Изопимпинелин Ксантотоксин сантотоксол ы данные о флудостоверных обаемые при испольсоба.ценции виснадина го с бромом неПрямолинейная нсивностью флуоресценции и кжит в пределахАнализ возмточно широкомРальной, так и Чувствител составляет 30 В табл. 2 представлен оресценции виснадина и разцов кумаринов, наблюд зовании описываемого спо Интенсивность флуорес после взаимодействия е изменяется в течение 2 зависимость между интехроматограммы в течение 5 мин на воздухе в ультрафиолетовом свете уста на влива ют локализацию зоны виснадина и эту зону с К 1=0,38, отмеченную по стандарту виснадина, количественно переносят в пробирку, прибавляют 9,9 мл дистиллированной воды, элюируют 5 - 1 О мин и, отделив раствор от осадка силикагеля, добавляют 0,1 мл водного насыщенного раствора брома. Флуориметрируют полученный раствор по отношению к стандартному с содержанием виснадина 1 О мкг/мл. Содержание виснадина определяют по калибровочному графику. Плоды растения содержат 0,008 г виснадина, т е. около О 2 %. Подобной реакции не дают близкие по структуре соединения: кумарин, ангелицин, псорален, ксантотоксол, изопимпинелин, ксантотоксин и другие. онцентрациеи виснадина ле,5 - 10 мкг/мл.ожно проводить при достадиапазоне РН как в нейткислой среде. ость известного способамкг/мл, описываемого1191789 Продолжение табл. 3 Время, мин, по способу Операции известному (про го тип) предлагаемому Таблица 3 Наблюдениефлуоресценции Время, мин, по способу Операции Итого Подготовкараствора Хроматографирование 60 Обработкахроматограммы 5 Добавление реактивов Составитель В. Шкилькова,Техред И. Верес Корректор И. Муска Тираж 896 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и .открытий 1 3035, Москва, Ж - 35, Раущская наб д. 4(5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Редактор Н. ШвыдкаяЗаказ 7150/40 0,5 мкг/мл, что в 60 раз выше известного. Использование описываемого способа экономично и требует меньших затрат времени (см. табл. 3). известному предлагаемому(прототип) Из приведенных данных видно, что описываемый способ обладает более высокой чувствительностью, селективностью и экспрессностью, чем известный и позволяет качественно и количественно определять виснадин в субстанции, лекарственнь 1 х препаратах и растительном сырье. Обладая простотой и экономичностью, предлагаемый способ применим в контрольно- аналитических лабораториях и заводских лабораториях фармацевтических предприятий для контроля качества препарата и производства его, а также в фармакогностичЕских исследованиях для анализа лекарственных растений, содержаших висна- - дин, и поиска новых растений - источников этого соединения,