Штамм вируса иммунодефицита человека 1-типа для приготовления диагностических препаратов

. Д. И. Иванов- но-исследовалогиищинова, М, Н, Денисова, А. Ю. . Юрин, В, В.и Д. К. ЛьвовН. О., Веад Е., о 1. 224, р, 4971 с Сопзецы Яегоо 91, 2 пд ОО ( Ы амма ВИЧ/СССРвлена рядом неэави ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Институт вирусологии имского и Центральный научтельский институт эпидемио(56) Ророч 1 с М., Яагп 9 асйагапОаИо В. С., Яеепсе, 1984, ч500.Я.есоп д Ятатеа Ь о га 1 оСоцтегепсе оп НТЮШ/1 АЧРгосид 1 пяэ, А 1 апта, 1987. Изобретение относится к области вирусологии и биотехнологии,Известны штаммы ВИЧ/11 В (США), ВИЧ/СВ 1-4/85 (Великобритания), депонированные в Государственную коллекцию вирусов СССР. В связи с их коммерческим использованием в странах выделения вируса они недоступны для применения, Подобные отечественные штаммы вирусов в литературе не описаны (1, 2).Проблема диагностики СПИД чрезвычайно актуальна для советского здравоохранения. Для проведения массового обследования населения требуется значительное количество диагностических тест- систем различных типов. Главным компонентом большинства используемых тест-систем является вирусный антиген. Именно поэтому от свойств штамма вируса во многом зависит чувствительность и специфичность выпускаемых диагностикумов. В связи с этим особую важность приобретает применение в отечествен(54) ШТАММ ВИРУСА. ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА 1-ТИПА ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (57) Использование: биотехнология, вирусология. Сущность изобретения: новый оригинальный штамм вируса иммунодефицита человека ВИЧ/СССР, ИВ/ИВ/89, предназначенный для приготовления диагностических препаратов при выявлении ВИЧинфекции среди населения. Штамм депонирован в ГКВ под номером 4022, Репликация штамма вируса сопровождается образованием характерных синцитиев в чувствительных клеточных культурах. Инфекционный титр 5-6,0 19 ТЦД 50, 3 табл,ных тест-системах штаммов вирусов, эндемичных для территории СССР.Предлагается новый оригинальный штамм вируса иммунодефицита человека ВИЧ/СССР, ИВ/ИВ/89, изолированный на территории СССР и предназначенюапй ный для приготовления диагностических препаратов для выявления ВИЧ-инфекции О среди населения.Штамм вируса хранится.в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д, И. Ивановского АМН СССР,Целью настоящего изобретения является оригинальный штамм. вируса иммунодефицита человека, обладающий высокой 4 ф инфекционной и антигенной активностью, - ф позволяющей испольэовать его для приготовления диагностических препаратов с целью выявления ВИЧ-инфицированных лиц среди населенияИдентификация шт И В/ИВ/89 осущестсимых методов.1768637 Таблица 1 Исследование инфекционной активности штаммов ВИЧ на модели клеток 3 цг 1 а 1 та 1 3 Штаммы ВИЧТитр,д ТЦД 50СВ 1:4 111 В 6,0 6,5 Штамм вируса выделен из лимфоцитов периферической крови больной СПИД, При получении штамма использованы методы сокультивации лимфоцитов больной с лимфоцитами крови здорового донора, стимулированных митогеном, а также счеловеческими перевиваемыми клеточнымилиниями.Репродукция. Штамм вируса реплицируется в лимфоцитах периферической крови, лимфобластоидных клеточных культурах МТ, СЕМ, акогкат 1 а 3, ч. Репродукция вируса сопровождалась характерныи цитопатическим действием и синцитиеобразованием. Инфекционйый титр вируса определяли по 50 тканевой цитопатической дозе вируса на модели вышеуказанных клеточных культур (табл. 1).Морфология, Методом электронной Микроскопии выявлены вирионы размером 100-120 нм с типичной для вирусов иммунодефицита человека 1 типа морфологией.Анализ антигенов,Иммунофлюоресценция. Исследование методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием сыворотки больного СПИД, содержащей антитела к ВИЧ, показало наличие антигенов ВИЧв 50-60; инфицированных клеток,Злектрофорез, иммуноблот, ЭлектроФоретический профиль белков штамма соответствует белковому спектру ВИЧ,Исследование в иммуноблоте позволило заключить, что вирус обладает антигенными детерминантами, характерными для ВИЧ: 120-160, 53/55, 41, 31, 24, 17 кД.Идентификация штамма осуществлена также методами точечной гибридизации и Определения обратнотранскриптазной активности.П р и м е р 1. Диагностика антител в ВИЧметодом иммуноферментного анализаМатериал для исследования: Сыворотки ВИЧ-инфицированных лиц, больных СПИД и фракции иммуноглобулинов из сывороток ВИЧ-инфицированных лиц. В качестве антигена использовали три штамма.ВИЧ: эталонные штаммы ИВ, СВ 1:4 и штамм ВИЧ- /ИВ/17. Реакцию иммуноферментного анализа проводили по стандартной методике (1).,Результаты иммуноферментного анализа представлены в табл. 2,5 Полученные результаты показывают,что препарат антигена, приготовленный изпредлагаемого штамма ВИЧ/СССР,ИВ/ИВ, обладает необходимыми антигенными детерминантами для выявления,10 вирусспецифических антител из сывороткиВИЧ-инфицированных лиц.Сравнительный анализ данного штаммас двумя эталонными в иммуноферментнойанализе свидетельствует о его сходной ак 15 тивности.Предлагаемый оригинальный штаммвируса ВИЧКССР, ИВИВи приготовленные на его основе диагностические препараты должны найти применение в20 вирусологической практике для детекцииантител в сыворотках ВИЧ-инфицированных лиц.П р и м е р 2. Диагностика антител кВИЧметодом иммуноблота.25 Материал для исследования антител кВИЧпредставлен 4 сыворотками, содержащими данные антитела и предварительноохарактеризованные в, коммерческих тестсистемах фирм "Дюпон" и "Биорад". В каче 30 стве антигена использован штаммВИЧИВи эталонный штамм ВИЧ 1(ВВ, очищенные по стандартной методике. Полосы иммуноблота готовили также постандартной методике (2).35 Результаты исследований представлены в таблице 3,В результате проведенных исследований установлено, что антиген штамма ВИЧ 1/ИВпозволяет выявлять антитела ко40 всем полипептидам ВИЧи может быть, следовательно, использован для изучения сероконверсии лиц,инфицированных ВИЧ,Формула изобретенияШтамм вируса иммунодефицита человека 1-типа ГКВ ЬЬ 4022 для приготовления45 диагностических препаратов.1768637 Таблица 2 Анализ антигенов ВИЧметодом иммуноферментногоанализа- Обратная величина титра антит Ча сследование антител к ВИЧметодом иммуноблота явленные антител 53 41 О 120 И Ч/111 В 1 2 3 0 120 ИЧ/И Ворректор В. Петраш Реда кто Заказ 3622 ВНИИПИ Госуда роизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Вирусныйантиген Составитель Л. КалнинаТехред М. Моргентал Тираж Подписноевенного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5