Способ определения карбоангидразы

союз советскихсоОЯАлистичеснихРЕСПУБЛИК 4 19) ПИ,(51)5 С 1 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 24) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАРБОАНГИДРАЗЫ(57) Изобретение относится к биохимии и касается исследований в знэимологии, Цель - повышение точностии воспроизводимости анализа. Способоснован на реакции дегидратации бикарбоната с удалением образующейсяв результате дегидратации двуокисиуглероца при интенсивном барботировании реакционной среды освобожденньм от СО воздухом и одновременнойрегистрацией скорости изменения рН,Активность карбоангидразы определяют по изменению начального значениярН 8,2 - 8,7. Коэффициент вариацииспособа в серии иэ 5 определенийравен 2,557 2 ил., 1 табл. суде 1, через обратный фильт (диаметр пор 14,4 мкм), под ный через резиновую трубку 3 ком 4 к склянке 5 Дрекслера ром щелочи и к системе сжато ха либо к микрокомпрессору.рН реакционной среды ироды 6,к биохимии энзимолоч с кранис раствого воздуизме рения элект Реакцию залуреакционной средденньм от СО., Агидразы определяючального эначенив реакции дегидметрически измеления гидрок сильзованием чувстви(рН 121) с самоп реакционнуюреакционном со" среду, находящуюся ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТпо изов етекиям и откеытиямПРИ ГКНТ СССР(71) Институт физиологии и биофизикирастений АН ТаджССР(56) С 1 ЬЬопа В.Н., Ейяа 11 Е.Т.,К 1 пег 1 с Бгцй 1 ея о 1 Нпшап СагЬоп 1 сАпЬуйгаяея Вапс 1 е. - 1. Вю 1. СЬещ,.1964, , 239, У 8, р 2539-2544,Пегое Н., К 1 яг 1 аЕоыяКу С.В.ТЬе Епкуш 1 с К 1 пег 1 ся оЕ СагЬоп 1 сАпЬуйгаяе йгош Воч 1 пе апй Нцшап, ЕгугЬгосугея. - .1. Йпег, СЬеш, Бос.,1961, у. 83, У 2, р. 274-280. Изобретение относится и касается исследований в гии.Цель изобретения - повышение точности и воспроизводимости анализа.Способ определения активности карбоангидразы основан на реакции дегидратации бикарбоната: НСО ., ОН +з + СО Фс удалением образующейся в ре 2акции дегидратации двуокиси углерода при интенсивном барботировании реакционной среды освобожденным от СО воздухом и одновременной регистрации скорости изменения рН.На фиг. 1 изображена схема установки для удаления СОиэ реакционной среды.Воздух подается в кают барботированием ы, воздухом, освобожктивность карбоант по изменению ная рН от 8,2 до 8,7 атации СО. Электро" яют скорость накопных ионов с испольтельного рН-метра исцем (КСП) посдвигу рН от 8,2 до 8,7, как Функции от времени на линейном участке.Способ иллюстрируется примером.П р и м е р 1. Контрольное определение.В опытный сосудик помещают 9,5 мл 0,1 М раствора ЯаНСО (рН 8,2) и 0,5 мл среды, которую используют для получения исследуемого препарата Фер мента (без Фермента).Опытное определение осуществляют так же, как и контрольное, но в со. судик помещают 0,5 мл опытного образца (исследуемый препарат Фермента).Перед опытом проверяют значение рН исследуемого образца, чтобы оно было равно начальному значению рН 8,2 раствора УНСО.Расчет активности производят по графику зависимости концентрации гид - роксильных ионов от рН, построенному на основании ионного произведения воды (фиг. 2).В присутствии ферментного препара та накапливается 0,035 мкмоль ОН /мин, а без фермента (контроль) - О, 019 мкмопь ОН /мин. По разности опытного и контрольного вариантов (0,035 - 0,019 = 0,016) находят .количество мкмоль ОН /мин, образовавшееся в про цессе ферментативной реакции, В реак - ционную среду было внесено 1 00 мкг белка. В пересчете на 1 мг белка активность фермента составляет 0,16 мкмоль ОН мг -мин435Анализ точности и воспроизводимости результатов при определении активности карбоангидразы по реакциидегидратации НСО по величине довериЭтельного интервала (8 с о,6 (4)О, 004) и коэффициенте вариации(Ч = 2,553) следующий.Пример Активность карбоангидразыпо дегидратации НСОмкмоль ОН мг мин -10,1550,1500,1580,153О, 160Формула изобретения. Способ определения карбоангидразы, включающий смешивание раствора субстрата, в качестве которого используют бикарбонат натрия, с анализируемым образцом фермента и инструментальную регистрацию изменений рН реакционной смеси, вызываемых катализируемой ферментом реакции дегидратации бикарбоната до углекислого газа, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения .точности и воспроизводимости анализа, изменения рН реакционной смеси регистрируют электрохимическим способом, причем в процессе регистрациичерез реакционную смесь барбстируют воздух, очищенный от углекислого газа.585334 Щ ФКРФАЮ Составитель А. СеменовТекред Л.Сердюкова Корректор М, Шарони Редактор Н. Киштулинец 4 Тираж 486сударственного комитета по иэобрете113035, Москва, Ж, Раушск ельский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 10 оизводственно Заказ 230 ВНИИПИ Го Подписноеиям и открытиям при ГКНТ ССС я наб., д. 4/5