Способ выделения иерсиний

СОЮЗ СОНЕТСНИКСОЯИАЛИСТИЧЕСНИРЕСПУБ ЛИК 85 19) (1(51 ЕТЕН ТЕЛЬСТВ ож ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТПРИ ГННТ СССЕ ОПИСАНИЕ И Н АВТОРСКОМУ СВИДЕ(46) 15.08.90. Еюл. У 30 (71) Владивостокский на вательский институт эпид и.микробиологии СО АМН(53) 57.б.8,093.1(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР У 1213070, кл. С 12 Я 1(04, 1984.Этнология, эпидемиология, клиника и лабораторная диагностика . иерсиниоза человека. Методические рекомендации, М. 1985. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ИЕРСИНИЙ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к диагностике иерсиний. Цель изобИзобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к диагностике иерсиний.Цель изобретения - повышение чувствительности способа, а также его ускорение.Способ осуществляется следующим образом.Для получения твердофеэной бентонитовой среды накопления 200 мг бентонита растирают в ступке с небольщии количеством (10 мл) фосфатнобуферного раствора (рН 7,2 - 7,4), затем суспендируют в 90 мл этого же раствора. Полученную суспензию сте"о рилизуют в течение 1 ч при 120 С под давлением 1 - 1,5 атм. Исследуемый материал вносят в пробирки с етения - повышение чувствительноси способа, а также его ускорение. сследуемый материал засевают в идкую среду накопления - фосфатн уферный раствор рН 7,2-7,4, соде ащий 0,27 бентонита, при объемном оотношении исследуемого материала полученной среды 1;1, Посевы выерживают 18-20 ч при 25-29 С, Пеед посевом на твердые питательые среды первичный посев встряхиают. Иерсинии растут на среде прак ически в чистой культуре, Изолироанные культуры идентифицируют по иохимическим и серологическим тесам. Способ позволяет ускорить врем 7,5-14,5 раз, чувствительность овышается в 3,7 раз, 1 з,п. ф-лы,табл. приготовленной средой накопления всоотношении 1:1 (объеме 3 - 5 мл),и помещают в термостат на 18 - 20 чпри 25 - 29 С. По истечении этоговремени осадок в пробирках интенсивно взбалтывают, Бактериологическойпетлей забирают для исследования материал, содержащий взвешенные частицы бентонита, С целью подавленияроста сопутствующей микрофлоры, ос-.новываясь на относительной резистентности иерсиний к слабьи растворам щелочей, исследуемый материал обраба- .тывают 0,5 Х-ньи раствором КОН в лунках полистироловых пластин (в объемном соотношении 1:5) в течение 12 мин, затем производят посев штрихом с двумя-тремя отрывами петли надифференциально-диагностическую среду Серова. Чашки с посевами инкубируют в термостате при 25 - 29 С в течение )8 - 20 ч. Изоляция иерсиний с чашек упрощена благодаря тому, что растут они на среде практически в чистой культуре. Изолированные культуры иерсиний идентифицируют по биохимическим и серологическим тестам.П р и м е р, . Исследуемый материал от человека (кал, моча, желчь и т.д.) или смывы с объектов внешней среды вносят в пробирки со средой в объемном соотношении 1:1 и помещают в термостат при 25 - 29 С. Черезо 18 - 20 ч инкубирования содержимое пробирок интенсивно встряхивают, бактериологической петлей забирают суспензию, содержащую взвешенные час тицы бентонита, переносят ее в лунки полистироловых пластин, где обрабатывают 0,5%-ным раствором КОН (в соотношении 1:5) в течение 1 - 2 мин, Затем производят посев штрихом с дву мя - тремя отрывами на дифференциально-диагностическую среду Серова. Чашки с посевами инкубируют в термостате при 25 - 29 ОС в течение 18 - 20 ч. Изолированные культуры иерсиний идентифицируют.общепринятьий биохимическими и серологическими тестами.Среду накопления готовят предварительно следующим образом. 200 мл бентонита (оптимальная величина) растирают в ступке с небольшим количеством фосфатно-буферного раствора (рН 1,2 - - 7,4), затем объем раствора доводят до 100 мл. Полученную суспензию стерилизуют в течение 1 ч при 120 С под даво лением 1 - 1,5 атм .Среднее количество клеток иерсиний в 1 мл среды накопления после подращивания в течение 18 - 20 ч 530,по прототипу 1 б.Результаты испытаний способа представлены в таблице,Результаты исследОвания показывают, что способ в 3,7 раза чувствительнее прототипа,. так как его использование позволяет выделить 146штаммов иерсиний, в то время как поспособу-прототипу изолировано только 39 штаммов в этом же материале.Таким образом, эффективность предлагаемого способа в сравнении со способом-прототипом состоит в повышении его чувствительности в 3,7 раза и уменьшении. длительности исследования за счет сокращения времени накопления бактерий в 7-28 раз.формула изобретения1. Способ выделения иерсинийпутем первичного посева исследуемогоматериала в фосфатно-буферный раствор рН 7,.2-7,4, инкубирования посевов с последующим пересевом на плотные питательные среды и идентификацией выделенных культур, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения чувствительности способа,первичный посев осуществляют в фосфатно-буферный раствор, содержащийбентонит в количестве 0,2% на объемраствора, при объемном соотношенииисследуемого материала и полученнойсреды 1:1,2. Способ по и. 1, о т л и ч а -ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения способа, инкубирование посевовпроводят при 25-29 С в течение 1820 ч.1585335 Исследуемыйматериал Выделено культур В том числе способами Всего предлагаемьм известпредлагаемьм и из вестньм Материал от людей (305) 46 37 абс, число 80,43 0,86% 100 8,69 22 абс. число 81,82 100 13,63 4,54 130 абс. число 70,00 6,15 23,84 100 Всего (1738) 13 39 146 198 абс. число 73,14 6,57 19,69 100 Редактор Н. Киштулинец Заказ 2304 Тираж 486 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и,открытиям при ГКНТ СССР3035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г,ужгород, ул. Гагарина,10 Материал отживотных грызунов (78) Смывы с объектов окружающей среды