Способ диагностики микробной аллергии

.Г. Коляденко 4-5. ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(56) Адо А.Д Кипервассер Е.И.Алексеева Т.А., Лукманова Ф.Г. Макро фагальный тест в диагностике аллерги ческих состояний,-В кн.: Клиническая и лабораторная диагностика аллергических состояний. Киев в Ужгор, 1974(54 (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МИКРОБНОЙ АЛЛЕРГИИ, включающий добавлениек суспензии сенсибилизированных макрофагов микробного аллергена врабочем разведении и инкубацию с последующим учетом результатов, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения точности способа после инкубации исследуемую пробу помещаютв эталонный радиолюминесцентный индикатор и учет результатов осуществляют путем измерения интенсивностихемилюминесценции, продолжительности и количества пиков свечениясуспенэии макрофагов до и после контакта с аллергеном и при увеличенииодного из параметров измерения в дваи более раз диагностируют микробнуюаллергию, 1210836разом,Изобретение относится к медицине, а именно к применению в иммунологии, и может быть использовано для диагностики микробной аллергии,Целью изобретения является повышение точности способа. Способ поясняется следующим обПрямой тест. Интактные морские свинки подвергаются сенсибилизации четырехкратным введением аллергена ,на протяжении 10-14 сут. Трижды аллерген вводят подкожно в обьеме 0,5 мл и однократно - в подушечки задних лап свинки в объеме 0,1 мл. Через 30 сут после начала сенсибилизации получают первтонеальный экссу 6дат, содержащий 3-4 10 микрофагов в мл. К 1,25 мл перитонеального экссудата (суспензии макрофагов) приливают 0,5 мл аллергена. Регистрируют свечение кюветы, затем суспензии макрофагов и кинетику свечения после приливания аллергена, Параллельно ставят пробы с различными аллергенами - специфическими (к которым свинка была предварительно сенсиби" лизирована), близкими к нему и далекими по своей природе микробными аллергенами. Непрямой тест, К 1,25 мл перитонеального экссудата свинок добавляют 1,0 мл сыворотки крови исследуемого больного и 0,25 мл аллергена. После довательно регистрируют интенсивность хемилюминесценции кюветы, экссудата, затем его смеси с сывороткой крови и кинетику СХЛ этой смеси после добавления аллергена. Пробы также ставят параллельно с несколькими аллергенами с целью выявления состояния сенсибилизации к одному из них. Измерения СХЛ биологических проб производят на оригинальной установке, собранной из стандартных блоков отечественного производства. В качестве детекторов светового излучения используют ФЗУа и ФЭУ, Регистрацию сигналов ФЭУ производят прибором "Пульт-А" с выводом получаемой информации на световое табло, цифропечать и на перфоленту, Предварительную калибровку прибора производят 25 ЗО 35 4 О 45 5 О 55 с помощью эталонного радиолюминесцентного индикатора ЭЯи световодом с ослабляющим светофильтром.Биопробу в объеме 1,5-2,5 мл помещают в кювету из нелюминесцирующего стекла с дном из оптического кварца, которую располагают непосредственно над фотокатодом ФЭУ. Кюовету термостатируют при 38 С. После эталонных измерений определяют величину свечения кюветы (фон) и кюветы с биопробой сигнал+фон), Пробу перитонеального экссудата помещают в кювету и через 2-3 мин необходимые для достижения биопробой расчетной температуры 38 С, регисторируют величину ее свечения в импульсах за 10 с (для чего вычисляют среднее из 10 последовательных 10-секундных измерений), Затем непосредственно в кювету вносят аллерген и в течение 40-60 мин регистрируют кинетику СХЛ. Наиболее часто производят измерения с интервалом по 5 мин, Исследования были проведены на 62 морских свинках ( в том числе на 20 неиммунизированных), а также на 26 больных с дерма. тоаллергозами (главным образом с микробной экземой ) и на 5 здоровых донорах. Установлено, что реакция сенсибилизированных морских свинок на неспецифический аллерген по показателю кинетики СХЛ суспензии перитонеальных макрофагов практически не отличается ни по высоте, ни по продолжительности, ни по количеству пиков от реакции несенсибилизированных свинок на различные аллергены, Максимальная высота пика, измеряемая количеством импульсов свечения за 10 с, колеблется для разных аллергенов от 42+16 до 121+24 и лишь протейный аллерген вызывает у интактных свинок существенно более сильную реакцию (25821 имп.), однако это следует отнести за счет свойств и концентрации самого аллергена.У сенсибилизированных свинок реакция на неспецифический аллерген колеблется пс существу в тех же пределах: от 14 9 до 1201.18 имп, за 10 с,Продолжительность этой реакции порядка 5 мин и во всех случаях наблюдают только один пик свечения.Эту реакцию мы рассматривали в дальнейшем как нулевую, т.е. характеризующую отсутствие с.енсибилизации121 Составитель Т. КозловаРедактор М. Келемеш Техред О.Ващишина Корректор А. Тяско Заказ 571/8 Тираж 659 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 макрофагов к данному конкретному аллергену.При контакте сенсибилизированных макрофагов со специфическим аллергеном реакция носит принципиально иной характер. Во-первых, высота пика превышает "нулевую" реакцию в 2-3 раза. Во-вторых, продолжительность реакции достигает 30-40 мин, а в отдельных случаях и более. Наконец, в-третьих, и это особенно характерно, реакция носит много 0836 4кратный характер, на кривой свечения регистрируется два-три пика.Причем все эти три показателя (высота, продолжительность и кратностьреакции) количественно характеризуют выраженность реакции, степень сенсибилиэации организма в каждом конкретном случае.Таким образом, предлагаемое техническое решение позволяет повыситьточность диагностики микробной аллергии в 2 раза (91,0 Х против 41,4 Х) .