Способ дифференциации постинфекционных и поствакцинальных антител к вирусу ящура

СООЗ СОВЕТСКИХсоаммупюевикРЕСПУБЛИК СУДДРСТ 8 ЕННЫЙ. КОМ О ДЕЛДМ ИЗОБРЕТЕНИ ТЕТ СССРИ ОТКРЫТИЙ ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ОРСКОМУ СВИ ЬСТВУ(56) 1, Методические указания по выделению и идентификации штаммов вируса ящура. М., Колос, 1974, с, 38-49,2; Собко А. И, и др, Результаты изучения в РДП с ч 1 п-антигеном сывороток кровиинтактных и иммунных к ящуру животных;Ветеринария, 1976,5, с, 48 (прототип).3. Ач 11 а е 1 аП АЬз 1 41 Ь че 1, Рез. М 1 д.,ЕаЬобсаЬо 1, Бгаг 11, 1979, р. 57 - 59. ЯО, 1069817 А зао А 61 К 39 12 б 01 И 33(54) (57) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПОСТИНФЕКЦИОННЫХ И. ПОСТВАКЦИ НАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ЯЩУРА, включающий постановку серологической реакции с испытуемой сывороткой, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности способа, в качестве серологической реакции используют непрямую реакцию иммунофлюоресценции, испытуемую сыворотку берут в разведениях: 1:16 в 20, причем постинфекционные антитела определяют по наличию специфического свечения, а поствакциональные - по его отсутствию.Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано при ускоренной серодиагностике яшура.Специфические противояшурныс ан итела в сыворотке крови животных выявляют с помощью реакций угнетения связывания комплемента, нейтрализации и серозагциты.В последнее время для этой же цели используют тест ингибиции бляшек, реакции радиальной иммунодиффузии, диффузионной преципитации и др 1.Однако указанные способы не позволяют дифференцировать антитела, появившиеся в сыворотке в результате инфекции, от антител, индуцированных инактивированной вакциной против ящура,Известен способ дифференциации постинфекционных и поствакцинальных антител к вирусу ягцура, включающий постановку реакции диффузионной преципитации испытуемой сыворотки с иа-антигеном, По обнаружению антител к ч 1 а-антигейу дифференцируют постинфекционные антитела от поствакцинальных 12.Однако известный способ является недостаточно точным, поскольку антитела к лаантигену могут появляться в сыворотках крови не только при псреболевании животных ящуром, но и при вакцинации и даже при отсутствии контакта их с вирусом 13.Цель изобретения - повышение достоверности способа диффсренциации антител к вирусу ящура, индуцировайных инфекцией, от антител, связанных с вакцинацией.Поставлснная цель достигается тем, что согласно способу дифференциации постинфекционных и поствакцина,альных антител к вирусу ящура, включающему постановку серологической реакции с испытуемой сывороткой, в качестве серологической реакции используют непрямую реакцию иммунофлюоресцснциииспытуемую сыворотку берут в разведениях 1:16 - 2048, причем постинфекционные антитела определяют по наличию специфического свечения, а поствакцинальные - по его отсутствию.Пример. Для приготовления препаратов (антигенов) для непрямой реакции иммунофлюоресценции используют однослойную культуру клеток, выращенную в матрицах РУ или Клинских, Ее инфицируют вирусом ящура (любой штамм) так, чтобы 10 - 30% клеток монослоя было поражено через 8 - 18 ч. Затем клетки диспергируют 0,25/о-ным раствором трипсина или 0,02 О/о-ным раствором версена при 37 С и готовят суспензию с концентрацией 1 - 5 х 10 клеток/мл на растворе Хенкса (без индикатора). По 3-4 капли этой суспензии наносят на предметное стекло и высушивают путем выпаривания жидкости при 37 С. Затем клетки фиксируют аце тоном при 4 С в течение 20-30.мин и. полученные препараты хранят до использова.- ния в сухой банке при 4 С,Каждую партию45 50 55Предлагаемый способ дифференциациипостинфекционных и поствакцийальных антител к вирусу ящура позволяет с высокой 1 О 15 20 25 30 35 40 препаратов проверяют с помо,цью реакции иммунофлюоресценции на наличие в них достаточного количества (т.е. 10 - 30%) антигеносодсржащих клеток, а также на степень яркости специфического свечения. Постийфекционные антитела. в сыворотках обнаруживают в период с 5 - 7 дня болезни до 6 мес после переболсвайия животных ящуром, Перед исследованием сыворотки инактивируют при 56 С в течение 30 мин и разводят физиологическим раствором с рН 7,2 - 7,4 в соотношении 1:16,1:32 - 2048. Постановка реакции заключается в нанесении на препараты (антигены) на 1-м ее этапе последовательных разведений исследуемой сыворотки в количестве 0,05 - О,1 мл на препарат. После 30 мин инкубации при 37 С и двукратного промывания в течение 20 мин в охлажденном до 4 С буферном физиологическом растворе на эти же препараты (на 2-и этапе реакции) наносят аналогичный объем смеси рабочих разведений гомо- логической антивидовой люминесцируюшей сыворотки и бычьего альбумина, меченого родамином. После 30 мин инкубации при 37 С и трехкратного в течение 30 мин промывания в буферном физиологическом растворе, охлажденном до 4 С, препараты высушивают на воздухе и просматривают под микросокопом любой марки при объективе х 40 и окуляре х 4 или х 5.микроскопически о наличии постинфекционных антител в испытуемой сыворотке судят по ее активности в реакции иммунофлюоресценции, т.е. при наличии в этой сыворотке постинфекционных антител они вступают в соединение с известным антигеном, содержащимся в инфицированной культуре клеток, а образуюшийся комплекс антиген-антитело выявляется ан. тивидовой люминесцирующей сывороткой, придающей антигеносодержашим клеткам зелейое свечение, являющееся специфическим. По отсутствии специфического свечения определяют поствакцинальные антитела. В результате проведенной апробации спо. саба установлено, что сыворотки животных, болеющих ящуром в острой стадии, активны в реакции иммунофлюоресценции в разведениях 1:16 - 64, сыворотки животных-реконвалесцентов активны в разведениях 1:16 - 2048 и более, сыворотки же животных, привитых одно- и двукратно ийактивированной моно-, би- и трехвалентной вакциной, в этой реакции оказались неактивными, т.е. они не давали специфической люминесценции с известным антигеном, что свидетельствует об отсутствии в них постинфекционных антител.1069817 3степенью достоверности выявлять болеющихи переболевших ящуром животных средивакцинированной популяции, отличается 4технологичностью, быстротой получения диагностического результата и высокой производительностью, Составитель В. Романова Редактор А. Мотыль Техред И. Верее Корректор М. Шароши Заказ 11265/9 Тираж 691 Годписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий13035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ПГ 1 П Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4