Способ отбора эритроцитов для получения эритроцитарного диагностикума

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН ай) А 61 К 35/18 С 01 Н 33/48 Э- : сЕОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Институт биологической ФизикиАН СССР(54) 57) СПОСОБ ОТБОРА ЭРИТРОЦИТОВ, ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ, ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА, заключающийся в том, что эритроциты выделяют иэ донорской. крови, Фиксируют, далее онределяют заряд фиксированных .эритроцитов и в качестве исходного сыръя иэиоль. эуют эритроциты с зарядом 4,12 10 3,3 10КлИзобретение относится к вакцинно-сывороточному делу и может бытьиспользовано. в технологии получе"ния эритроцитарных. диагностикумовмедицинского.и. ветеринарного назначения.В патентной и научно-техническойлитературе не известны способы от"бора эритроцитов для получения эритроцитарного диагностикума,Целью изобретения является создание способа отбора эритроцитовдля получения эритроцитарного диагностикума.Поставленная цель достигается темчто согласно способу отбора эритроцитов для получения эритроцитарного диагностикума, заключающемуся втом, что эритроциты выделяют из донорской крови, фиксируют, далееопределяют заряд фиксированных эритроцитов и в качестве исходного сырья используют эритроциты с зарядом 4,12 10- 3,3 10Кл,Способ осуществляется следующимобразом. После получения цельнойкрови (например, бараньей) из неевыделяют эритроциты, затем их фиксируют формалином и подвергают аналитическому или препаративному кле.точному электрофорезу, определяютзаряд, а в качестве частиц-.носителей антигенов в дальнейшем производстве днагностикумов из всей популяции используют эритроциты с за"рядом 4,1210- 3,3 ф 10Кл.При технической реализации пред".лагаемого способа для отбора эритроцитов предварительно устанавливают граничное значение величинызаряда, при снижении которой у фиксированных эритроцитов ведут выбраковку эритроцитов. Граничные значения можно определить однократнымопределением заряда фиксированныхэритроцитов: при параллельном конт.роле днагностикумов, изготовленныхна этих эритроцитах. Согласно Регламенту производства контроль качества диагностикума осуществляетсяв реакции РНГА с гипериммуннымисыворотками животных и сывороткамиздоровых доноров, т.е. путем градуировки, как проиллюстрировано впримере. Причем по техническим условиям Регламента производства диагностикум считается специфичнымесли титр его с сывороткой здоровыхдоноров в реакции РНГА менее чем1/100.П р н м е р, Отбор фиксированныхэритроцитов 1 мл формализированныхэритроцитов барана, содержащихся вфизиологическом растворе, осаждаютцентрифугированием при= 350 втечение 5 мин с последующей двухкратнойотмывкой и ресуспензированием в измерительной среде с параметрами: ионная сила р =0,021рН 7,3; =25 С. Концентрацию зритроцитов в пробе доводят разбавлениемее измерительной средой до 5 10ь5 10 клеток на 1 мл. Величину поверхностного заряда эритроцита рассчитывают по формуле=3 10 ЗО 5Сб 5 Е10 " М 05 Кл, где измеряемойвеличиной является 0 электрофоретическая подвижность (ЭФП), мкм С В см;1"вязкость (для используемых растворов равна 10п); Ж -величина, обратная толщине двойного электрического слоя, которая для водных растворов одновалентных солей,(концент 15 рации, См) равная:Я),вь 10 см=10 ф см ; Я- площадь поверхности эритроцита, среднее значение которойравно 1,65" 10 6 см.ЭФП измеряют методом микроэлектрофореза на .приборе Пармоквантф(фКарл Цейсс, Иена) в автоматическом режиме. Используемый приборобеспечивает получение средних значений ЭФП и статистическую обработку данных. Сопоставительные данныеполученных ЭФП эритроцитов в сравнении с определением специфичностипрепаратов (изготовленных на этихэритроцитах) по реакции РНГА даны втабл.Из приведенных данных контроляЭФП восьми партий формализированныхэритроцитов (колонка 1) в сопоставлении с титрами РНГА диагностикумов,изготовленных на этих эритроцитах35 (колонки 2 и 3), первые четыре партии и жидких., и сухих препаратовимеют титры больше, чем 1/100, т.е.по техническим условиям Регламентапроизводства их надо забраковать.Щ У всех этих партий эритроцитов ЭФДменьше 2 мкм С В см. Препараты партий,5-8 имеют титр меньше 1/100, т.е.соответствуют ТУ. ЭФП этих партийбольше 2 мкм СВсм. Причем препарат, эритроциты которого имеютЭФП 1,93 мкм СВсм, имеют титр1/150 и 1/300, т.е. являются плохими,а препарат, ЭФП которого 2,02 мкмС В см имеют титр 1/50, т.е.5 являются хорошими. Таким образом,нижняя граница значений ЭФП, прикоторой необходимо проводить отбраковку эритроцитов, равна 2 мкмСВ см или 3,3 10 фКл.55Верхняя граница значений ЭФП фиксированных эритроцитов определяетсяприродой поверхности нативных эритроцнтов барана.Это значение окаэа-лось равным 2,5 мкм С В см или4 12 10Кл.6 Визуальный контроль спонтаннойагглютинации не позволяет выявитьплохие эритроциты и диагностикумыбракуют после их изготовления, аиспользование предлагаемого спосо ба предотвращает выпуск неспецифи1124976 ческого диагностнкума. Кроме того,предлагаемый способ позволяет проводить отбраковку эритроцитов быстро,сразу после их фиксации, т.е. отпадиагностнкума в РНГА с донорской сывороткой идкий,13 Составитель Е.ЖитиТехред Т. Маточка к О.Черниченко орректор В.синицкая К ираж 687 го комит ий и отк Раушская Филиал ППП фПатентф, г.ужгород, ул.Проектная,аказ 8323/5 ВНИИПИ Государственн по делам иэобрете 113035, Москва, Ж, дает необходимость длительного изготовления диагностикумов на этихэритроцнтах и постановки РНГА с донорскими сыворотками. Подписноа СССРтийаб., д.4/5