Способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикума

чян 5 ческМОтфка Д 1 ЦОПИСАНЙИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советскнх Сацналнстическнх Республик(23) Г 1 риоритет 1 осударствеииьй комитет ССС Р ио делам изобретений и открытий,3(088,8) Дата опубликоваиня описания 07.1280(72) Авторы изобретения Н.П,Иванов и В.Б.Бельченко Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт Восточное отделение Всесоюзной академии сельскохозяйственных 1 наук им. В.И,Ленина и Карагандинская научно-исследовательская ветеринарная станция(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОС 1 ИКУМАИзобретение относится к областимикробиологии, а именно к получениюбиологических препаратов.Известен способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикумапутем дезинтеграции бруцелл ультразвуком с последующим выделением антигена и сенсибилизаций формалини-,зированных эритроцитов 1.Однако известный способ не позволяет получить диагностикум с высокойстабильной активностью,Целью изобретения является повышение активности диагностикума,Эта цель достигается тем, что дезинтеграцию ведут в дистиллированнойводе при рН 8,0-9,0 и сенсибилизациюэритроцитов проводят при 70-72 С втечение 5-10 мин,П р и м е р, Бруцеллы шт .19, выра Ощенные на мясопептонном печеночномглюкозо-глицериновом агаре смывают спитательной среды стерильным физиологическим раствором поваренной соли,дважды отмывают им же от остатков 25питательной среды, Затем доводят доконцентрации 100 млрд. микробных телв 1 мл (по бруцеллезному стандартумутности) дистилированной водой срН 8,0-9,0, Полученную взвесь подвер-ЗО гают воздействию ультразвуковых волндо просветленйя (10-16 мин), По окончании озвучивания микробной дезинтеграт центрифугируют 30 млн, при 5-бтыс,об/мин с целью осаждения неразрушенных клеток,Надсадочная жидкость в рабочемразведении на обычном физиологическомрастворе служит антигеном для сенсибилизации формалинизированных и таннизированных эритроцитов.Формалинизацию эритроцитов проводятпо методу Фили при рН 7,2-7,4 . Сэтой целью донорскую дефибринированную кровь разводят 1:1 буферно-физио.логическим раствором: хлористого натрия 0,137 М, двузамещенного фосфорнокислого натрия 0,01 М, однозамещенного фосфорнокислого калия 0,003 М(при рН 7,2-7,4),К 100 мл разведенной крови быстродобавляют смесь, состоящую из 200 млбуферного раствора. 1 щательно перемешивают и инкубируют, перемешиваякаждый 15 мин на водяной бане при37 оС в течение 2 ч.В процессе обработки эритроцитыпостепенно приобретают темно-коричневый цвет. Смесь центрифугируют при900-1000 об/мин, четырехкратно отмы784879 вают и готовят 2,5-ную взвесь (примерный выход со 100 мм крови 500 мл эри роцитарной взвеси) .Таннизацию эритроцитов проводят раствором таннина в разведении 1:20000, При этом смешивают равные объемы 2, 5-ной взвеси эритроцитов и раствора таннина, Перед смешиванием обе части смеси нагревают в термостате при водяной бане при 370 С и после смешивания выдерживают при 37 С в течение 15 мин. Затем эритроциты трижды отмывают от таннина обычным физиологическим раствором хлористого натрия и разбавляют буфернофиэиологическим раствором с рН 6,0- 6,2 до 2,5-ной концентрации, После 3 этого взвесь таннизированных эритроцитов соединяют с равным объемом раствора антигена (1 г 100) и выдерживают в водяной бане при 70 С.в течениео5 -10 мин.За 2-3 мин до окончачия сен- Я сибилизации добавляют 0,5 Формалина( 3 8-39Формальдегида), 3 атем эритроциты дважды отмывают от избытка антигена нормальной кроличьей сывороткой,разведенной Физиологическим раст- вором до 1:100 и доводят ею же или 0,4-ным глицерином до 2,5-ной концент ации,госле этого к эритроцвтлрной взвеси добавляют 0,5 формалина (в качестве консерванта) и используют для постановки реакции.Результатами испытания специфичности диагностикумов в реакции нейтрализации на культурах различных возбудителей, патматериале от здоровых и зараженных бруцеллезом животных установлено, что данный диагностикум не уступает по специфичности аналогичным диагностикумам, выпускаемыми ДагНИВИ и ВИЭВ.Результаты испытания эритроцитарных диагностикумов на активность в РИГА представлены в таблице. диагностикумов на активность в РНГА Результаты испытания эритроцитарных Видживотныхколичествопроб ИЗ 26 17 16 б Крупныйрогатыйскот54 пробы но реагирующи ложительно ре Положит Процент гирующи Средний Сомните Процентгирующи 29,6 18 ;538 1: 9 8 48,21:9112 тр реакцийо реагирующиемнительно реа 22 6,6 14 Мел рог ско Положительно реаг Процент положител гирующихСредний титр реак Сомнительно реаги Процент сомнитель гирующих ующиео реаы 20 10 20 б1 й 125 1 й 50 1:100 12 - 1 20 501:504 1 о щие реа 0 9 виньи 0 проб 3 10 1 90 100 30 50200 1 з 700 1315 1:21 4 100 . 100:425 1:125 0 74 про- Всего побы , ПроцентгирующихСреднийСомнителПроцентгирующих 14 3318,9 44,6 1:264 1:44 9 11 ложитель положите ыхьно реа 47,31:734 7,8 :59 11 4,8 37,8 13381 1:14125 титр реа ьно" реаг сомнител ующие 1о реа-23 2 14,8 9,5 33,7 формулаСпособ получени эритроцитарного ди дезинтеграции бруц зобретениябруцеллезногогностикума путелл ультразвуком Положительно реагирующи Процент положительно ре гирующихСредний титр реакций Сомнительно реагирующиеПроцент сомнительно реагирующих Предлагаемый способ позволяет получить Ьруцеллезный эритроцитарный диагностикум, обладающий высокой активностью и специфичностью. наименование антигенов784879 Составитель С.МалютинаТехред М.Петко Корректор М. Вигула Редактор П.Горькова Заказ 8700/4 Тираж 673 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д.4/5Подписное филиал ППП ПатЕнт, г.ужгород, ул.Проектная,4 последующим выделением антигена й сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов,о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения активности диагностикума,дезинтеграцию ведут.в дистиллированной воде при рН 8,0"9,0 и сенсибилизацию эритроцитов проводят при температуре 70-72 С в течение 5-10 мин.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1, Иванов А.Б., Бельченко В.Б.РНГР для диагностики Бруцеллеза телят;. фВетеринариями, 1, 1975.