Способ получения эритроцитарного диагностикума

СОЮЗ СОЕЕТСНИХОаавМюмасвРЕСПУБЛИК 01 й 33/4 61 К ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ АВТОИ НОМУ С УДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ДЕЛАМ ИЗОБРЕТШИЙ И ОЧНРЫТИ(71) Институт биологической физикиАН СССР(56) 1.Регламент производства эритроцитарных диагностнкумов В 81-77,утвераденный 16.04.77 начальникомглавного управления по производствубактерийных и вирусных препаратовМинздрава СССР Хлябнчем Г,Н.,с,85. 8 О.А(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ЯИАГНОСТИКУМА путем выде"ления эритроцитов с последующей ихфиксацией и сенсибилиэацией, о т -л и ч а в щ и й с я тем, что, сцелью новыаения специфической актиности продукта, в качестве целевогопродукта используют сенсибилиэированные эритроциты с зарядом3,310 фф - 181-10 щ Кл.Изобретение относится к вакцин- но-сывороточному делу и может быть использовано в технологии получения эритроцитарных диагнастикумов медицинского и ветеринарного назйачения.Известен способ получения эритро. цитарных диагностикумав путем выделения эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией 1)Недостатками известного способа являются низкая специфическая активность целевого продукта вплоть до получения искаженных результатов при обследовании сывороток здоровых и больных людей, а также трудоемкость проверки специфичности диагностнкума, так как для этого необходимо предварительно отобрать 10-12 сывороток больных соответствующим заболеванием н столько же сывороток здоровых даноров,Целью изобретения является повышение специфической активности целевого продукта.Поставленная цель достигается согласно способу получения эритроцитарнога диагностикума путем выделения эритроцитов с последующей их фиксацией и сенсибилизацией, в качестве целевого продукта используют сенсибилнзированные эритроциты с зарядам 3,3 10 " -1,81 10 ц Кл.Способ осуществляется следующим образам.После получения цельной крови (например, бараньей) эритроциты фиксируют формалином, сенсибилиэируют необходимым сенситином, затем жидкий препарат замораживают и после лиофильной .сушки получают сухой диагностикум. у жидкого или сухого препарата определяют заряд эритроцитсв, а в качестве диагнастикума используют эритроциты с зарядом3,3 10К - 1,8110Кл. При технической реализации предлагаемого способа для повышенияв специфичности определенного эритроцитарного диагнастикума предварительно устанавливают граничное зна" чение величины заряда, при снижении которой у целевого продукта ведут выбраковку готового препарата, Граничные значения можно определить однократным определением заряда специфических и неспецифических серий целевого, продукта при параллельном их контроле с гипериммунными сыворотками животных и сыворотками здоровых доноров, т.е. путем градуировки, как проиллюстрировано в примере. Причем па существующим техническим условиям Регламента произ" водства диагностикум считается специфичным если титр ега с сываротКой 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 здоровых доноров в реакции РНГАменьше чем 1/100.П р и м е р. Контроль специфичности жидких и сухих эритроцитарныхдизентерийных диагнастикумов Зонне.1 мл жидкого эритроцитарного диагностикума Зоине ( в случае контролясухого препарата его предварительнов течение 1 сут вымачивают в дистиллированной воде) подвергают центрифугированию при о350 в течение 5ьмин. Полученный осадок, содержащийэритроциты, сенсибилизированные дизентерийным антигеном Зонне, обрабатывают измерительной средой с параметрами: ионная сила р = 0,02;рН = 7,3;= 25 С,Концентрацию эритроцитов в пробедоводят разбавлением ее измерительной средой до 5 10 -5 10 клетокна 1 мл. Величину поверхностногозаряда эритроцита рассчитывают поФормуле310М 05 СбЯ 10 рНБКл,где измеряемой величиной являетсяц " электрофоретическая подвижность(для используемых растворов равна10П); К - величина, обратнаятолщине двойного электрическогослоя, которая для водных растворовадновалентных солей (концентрация,См) равна ЖГсм , 06 108 см = 10 смЯ - площадь поверхности эритроцита,среднее значение которой 1,65-10 смЭФП измеряют методом микроэлектрофореза на приборе Пармоквант( фКарл. Цейсс, Йена) в режимеавтоматическдго анализа подвижности100 эритроцитарных клеток. Используемый измерительный прибор обеспечивает получение средних значений ЭФП.В таблице приведены результатыконтроля производственных серий дизентерийного эритроцитарного диагностикума Зонне по ЭФП и в РИГА сдонорской сывороткой.Из приведенной таблицы следует,что и для жИдких, и для сухих препаратов нижним граничным значениемЭФП, по которому следует браковатьпрепарат, является ЭФП1,10 (или1,81. 10 ф Кл), так как препараты,ЭФП эритроцитов которых равен 1,10и более ( серии 5-8) имеют титр вРНГА с донорской сывороткой ниже,чем 1/100, т.е. соответствуют техническим условиям. Препараты с ЭФП1,04 и ниже (заряд 1,71 10 ф Кл,серии 1-4) не соответствуют тЕх -ническим условиям, так как имеюттитры с донорскими сыворотками1/150 и более.Верхняя граница значений ЭФП используемых препаратов определяется .природой поверхности Фиксированныхнесенсибилизированных зритроцитов "барана. Это значение оказалось (равным 2 мкм С В см или 3,310; ф Кл,;35 Составитель Е.ситниковаРедактор О,Черниченко Техред Т.Маточка Корректор В.Синицкая з 8323/5 Тираа 687 ВНИИПИ Государственного комитета СССР По.делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.одписно филиал ППП Патент, г.уигород,Преимущества предлагаемого способа заключаются в повввюнии специфической .активности диазностикума за счет отработки из готовых диагностикумов, препаратов с низкой специфической активностью, Кроме того, способ прост,так как отпала необходимость в донорских сыворотках, которые ранее было необходимо предварительно получать для постановки реакции РНГА.5