Способ получения индуктора защитных реакций картофеля к болезням

/ ИДЕТЕЛЬСТВУ ВТОР СКОМ ая, гаГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Ордена Ленина институт биохимии им. А. Н. Баха(56) 1. Воз 1 ос 1 с К., Кис,. А 11 рорЬ 111 с 1 гас 6 оп 1 гот РЬу 1 орЬ 1 Ьога 1 п 1 езтапз е 1 с 11 з 1 Ье ассцгпца 11 оп з 1 гезз гпетаЬо 11 тез 1 п ро 1 а 1 о 1 пЬег. - РЬу 1 орайоодр, ч. 70,7, 1980, р. 688.2. Чалова Л. И., Барамидзе В. Г., Юрга- нова Л. А., Дьяков Ю. Т., Озерецковская О. Л., Метлицкий Л, В. Изолирование и характеристика индуктора защитных реакций картофеля из цитоплазматического содержимого возбудителя фитофтороза.Докл. АН СССР, т. 235, 1977,5, с. 1215- 1218 (прототип)..(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУК ТОРА ЗАЩИТНЫХ РЕАКЦИЙ КАРТОФЕЛЯ К БОЛЕЗНЯМ, включающий экстрак цию мицелия возбудителя фитофтороза картофеля, концентрирование экстракта и отде. ление индуктора из экстракта от антииндукторов, отличающийся тем, что, с целью его ускорения и упрощения, выделение индуктора из экстракта проводят путем двухкратного препаративного центрифугирования.1119647 Известный (гель-Фильтрация через сеФадекс) 48,2 0,95 Предлагаемый (центриФугирование) 0,97 Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности, к защите картофеляот болезней.Известен способ получения липидныхфракций из мицелия возбудителя фитофтороза РЬ 1 орййога 1 п 1 ейапз (Моп 1.) с 1 Ву,индуцирующих в картофеле образованиеантибиотических веществ - фитоалексинов (ФА) 1.Недостатком этого способа являетсянеобходимость механического разрушениямицелия и ультразвуковой обработки доэкстракции органическими растворителями.Известен способ получения активногоиндуктора защитных реакций картофеляиз фитофторы - липогликопротеинового 15комплекса (ЛГП-комплекса) по следующей схеме: экстракция неразрушенного мицелия гриба 70%-ным этиловым спиртомпри нагревании на кипящей водяной банев течение 20 мин (2 раза); концентрирование объединенного водно-спиртового экстракта в вакуумном испарителе при 40 Сдо удаления спирта; диализ полученного водного экстракта через целлофан против дистиллированной воды в течение 18 ч; хроматография недиализуемой части экстракта 25на колонках с сефадексом б12,К недостаткам известного способа относится то, что он основан на использованиидорогостоящих импортных реактивов (сефадекс 6-50),Кроме того, многократное разделениена колонках для получения достаточногоколичества индуктора является трудоемким и малопроизводительным процессом.Следовательно, известный способ выделения индуктора не может быть использо- З35ван для получения индуктора в количествах, достаточных для индуцирования защитных реакций с целью предупреждения развития болезней картофеля в условиях современного сельскохозяйственного производства.Целью изобретения является ускорение, упрощение и удешевление процесса получения активного индуктора защитнйх реакций картофеля к болезням (ЛГП-комплекса) из мицелия возбудителя фитофтороза.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу для получения целевого продукта ЛГП-комплекса водный экстракт мицелия после удаления спирта подвергается двухкратному препаративному центрифугированию.Существенным отличием предлагаемого способа является замена двух стадий получения 18-часового диализа и разделения на колонках с сефадексом на двухкратное центрифугирование, что позволяет ускорить и удешевить процесс получения целевого продукта. Пример 1. ЛГП-комплекс получают по следующей схеме; двухкратная экстракция мицелия фитофторы 70%-ным этиловым спиртом при нагревании на кипящей водяной бане в течение 20 мин; концентрирование объединенного водно-спиртового экстракта в вакуумном испарителе при 40 С до удаления спирта; центрифугирование водного экстракта при 15000 д в течение 30 мин; перераспределение получившегося осадка в дистиллированной воде и повторное центрифугирование; лиофильное высушив ание осадка, представляющего собой ЛГП-комплекс.Пример 2. Данные, характеризующие количественный выход индуктора и его биологическую активность в зависимости от метода выделения из мицелия фитофторы, приведены в таблице.119647 Составитель В. Агафонов Редактор И. Дербак Техред И,. Верес Корректор В. Синицкая Заказ 7499/2 Тираж 721. Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений. и от крытый 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП сПатентэ, г, Ужгород, ул. Проектная, 4О биологической активности выделенного индуктора судят по образованию в картофеле антибиотических веществ - фито:Глексинов и снижению развития фитофтороза на клубнях по сравнению с контролем (обработка водой). Оказалось, что при использовании центрифугирования экстракта выход ЛГП-комплекса был такой же, как и при гель-фильтрации. При этом способность вызывать защитные реакции в картофеле оставалась неизменной.10 При центрифугировании происходит не только концентрирование ЛГП-комплекса, но и отделение его от сопутствующих веществ - супрессоров. Эти вещества, представляющие водорастворимые глюканы, препятствуют проявлению индуцнрующей способности ЛГП-комплекса.Пруер 3, Для выделения индуктора из 10 г мицелия фитофторы необходимо провести двухкратное центрифугирование в течение 2 ч или 18-часовой диализ и 1 б разделений на колонке с сефадексом размером 40 х 2,5 см, что занимает 34 ч, Таким образом, процесс выделения ускоряется в 17 раз.Упрощение и ускорение способа выделения индуктора защитных реакций у картофеля делает его доступным для применения в сельском хозяйстве с целью борьбы с болезнями картофеля,