Способ идентификации альдостерона
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Текст
Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик ОП И САНИ ЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВе ОеаСКОМу СВИдВТВЛЬС 78 у(45) Дата опубликования описания 10.11.78 с 1 1 631818 ф ъ 1г 51) М, Кл.601 Й 33/ сударственный квинтетавета Мнннстреа СССРаа делам нзебретеннйн еткрытнй(72) Авторы изобретения Московский ордена Ленина Государственныйдицинский институт им, Н, И. Пирогова(71) Заявител В ИДЕНТИФИКАБИИ АЛ ЕРОНА 54 б 15 кууочи иден Изобретение относится к медицине иожет 4 рть использовано в клинико-лаораторной практике.Известен способ идентификации альдостерона путем выделения его из биологической жидкости с помощью хроматографии на селикагеле с последующим добавлением реактива 11.Однако известный способ является трудоемким, требует много времени и не обеспечивает высокой специфичности и чувствительности,Белью изобретения является повышение специфичности, чувствительности и ускорение способа.Эта цель достигается тем, что в качестве реактива используют 50-60%-ную фосфорную кислоту, полученный флюоресцирующий комплекс альдостерон + фосфорная кислота" алюируют с хроматограм мы, измеряют интенсивность флюоресценци алюата при возбуждающей длине волны 46012 ммк и по максимуму спектра флюоресцении в области 515 Ф 5 ммк тифицируют альдостерон. Способ осуществляю У разом.300,0-400,0 мл мочи подкисляют до рН 1,0-1,2 концентрированной НС 6оставляют в темнэм месте на 18-24 ч при комнатной температуре.Затем проводят экстракцию и первичную очистку, для атого в моче растворяют 60,0 гйсССи проводят акстракцию 100,0 мл хлороформа, трехкратно, в течение 10 мин каждый раз. Объединенный акстракт промывают 50 мл 5%-ного раствора Мсек С 0 а в 0,1 н растворе ЙООН и 50,0 мл дистиллированной воды, Экстракт обезвоживают ЙОЬОи выпаривают в ваме при 40 С. После атого проводятостку на колонке,В нижнюю часть стеклянной колонки помешают кусочек стекловаты и сверху заливают взвесь силикагеля 1,65 г в хлороформе, После прохождения хлороформа, на колонку переносят экстракт, растворенный в хлороформе (1,0 мл 3 раза). Затем колонку последовательно промывают 20,0 мл 307 о раствора атилацетата18 4бирки со щлифом с 2,5 мл концентрированной серной кислоты (выдерживают пробу Саваля), их встряхивают .и помещают в кипящую водяную баню нв 60 мин. Затем пробирки охлаждают в воде со льдом и через 60 мин измеряют интенсивность флюоресценции на спектрофлюориметре, первичный фильтр - 460 ммк, вторичный - 520 ммк. Перед измерением пробирки ценгрифугируют 5 мин при 3000 об/мин. Из флюоресценции пробы вычитают флюоресценцию контроля и по стандартной кривой находят количество альдостерона. Для построения стандартной кривой, определенные количества вльдостерона, от 2 до 8 мкг вносят в 300,0 мл дистиллированной воды и проводят все операции, как описано выше, начиная с экстракции.Предлагаемый способ обеспечивает высокую специфичность и чувствительность и позволяет определять альдосгерон в небольших обьемах биологической жидкости, сокращает продолжительность анализа, уменьшает расход реактивов. Способ идентификации альдостеронапутем выделения его из биологическойжидкости с помощью хроматогрфии насиликагеле с последующим добавлениемреактива, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения специфичности,чувствительности и ускорения способа,в качестве реактива используют 5060%-ную фосфорную кислоту, полученныйфлюоресцирующий комплекс "альдостерон+фосфорная кислота" алюируют с хроматограммы измеряют интенсивность флюоресцении алюата при возбуждающей длиневолны 460+2 ммк и по максимуму спектра флюоресцении в области 515 ф 5 ммкидентифицируют вльдостерон.Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе;1. Материалы симпозиума "Альдостерон и водносолевой гемеоствз , Новосибирск, 1968, с. 190.С. Малюгинандрейко Корректор Д. Мельниченко Заказ 6332/42 Тираж 1070 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушсквя наб д. 4/53 6318 в бензоле, 12,0 мл 3% ного раствора атанолв в хлороформе и 9,0 мл 2% расч вора атвнола в хлороформе, Альдосчерон алюируют 35,0 мл 2% раствора атанола в хлороформе, Элюет сббирают и выпари вают в вакууме при 40 С.Затем очистку и выделение проводят на тонком слое силикагеля, для этого алюат с колонки переносят в правый нижний угол пластинки с тонким слоем силика геля пятном до 1,0 см в диаметре на расстоянии 1,5 см от краев. Слева, на расстоянии 9,0 см от правого края пластинки, наносят 3-4 мкг стандарта альдостерона. Пластинку нижним краем опускают в систему хлороформ-метанол(1:1) и хроматогрвфируют до тех пор, пока подвижная фаза не достигнет верхнего края нанесенного элюата. После атого пластинку высушивают феном и хроматографируют дважды в системе ацетон- бензолдиатиловый эфир (20:30:50) до верхнего края пластинки, Затем пластинку переворачивают так, чтобы повторное разделение проводилось в перпендикулярном направлении и на расстоянии 9,0 см вправо ог нанесения пробы наносят 5- 6 мкг альдостерона. Повторяют хроматографирование в системе хлороформ - метанол ( 1:1) в результате этого аль- ф достерон пробы концентрируется, Пластинку высушивают и проводят хроматографироввние дважды в системе циклогексанизопропиловый спирт (7:3) также до верхнего конца.ЛВысушенную хроматограмму опрыскивают раствором фосфорной кислоты в дистиллированной воде (1:1) до увлажнения всей поверхности и прогревают 10 мин в термостате при 125 оС, Альдостерон пробы обнаруживают при помощи ультрвхемископа в точке пересечения линий, проведенных через пятна стандартов альдостеронв. Все три пятна должны флюоресцировать одинаковым зеленым45 цветом,Эвгем проводят количественное определениеЗону альдостерона пробы и одинаковый участок хроматограммы (конт 50 роль) соскабливают и переносят в проСоставительЪРедактор Н, СвмедоваТехред О. А Формула изобретения
СмотретьЗаявка
2115406, 01.04.1975
ВТОРОЙ МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ИМЕНИ Н. И. ПИРОГОВА
БОТВИНЬЕВ ОЛЕГ КОНСТАНТИНОВИЧ, АТАМАНОВА ТАТЬЯНА МИХАЙЛОВНА
МПК / Метки
МПК: G01N 33/16
Метки: альдостерона, идентификации
Опубликовано: 05.11.1978
Код ссылки
<a href="https://patents.su/2-631818-sposob-identifikacii-aldosterona.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ идентификации альдостерона</a>
Предыдущий патент: Способ очистки крови
Следующий патент: Способ устранения неспецифической агглютинации
Случайный патент: Стенд для испытания монтажныхпоясов ha прочность