Способ количественного определения гидразида изоникотиновой кислоты

Союз Советскик Социалистических РеспубликОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ 1 ц 857810 61) Д лнительное к авт, сеид-ву 22) Заявлено 05.12.79 (2 47486 23 1 й 21/7 с присо нением ки Мо -рствениый номнтеСССРлам изобретенийи открытий(23) Приоритет -од юллетень Мо 31ания 230881 но 230 ублик 53) У 43. 43288,8) та опубликования опи 2) Авторыизобретени.Х.Лайпанов бухо урский государственный медицинский институт 1) Заявит СОВ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯДРАЗИДА ИЗОНИКОТИНОВОЙ КИСЛОТЫ(требуется 8 опера бирательность (опр присутствие различ мала),Цель изобретени ности, чувствитель ности и сокращени ния и и ощение сп и плохая изнию мешаетахаров и кра ь- етем, ого з ющей хлорофорак ен о Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способамколичественного определения гидразидаизоникотиновой кислоты (ГИНК).Известен способ количественногоопределения ГИНК, путем обработкианализируемой пробы п-диметиламинобензальдегидом в кислой среде споследующим фотометрированием полученного раствора 11 ).Недостатком способа является низкая избирательность. Определению мешают метазид, фтивазид, ларусан,салюзид и т.д,Наиболее близким к предлагаемому 15по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения ГИНК путемобработки анализируемой пробы хлоридомв 2.,3,5-трифенилтетразолия при рН 20среды 2,5-2,75 с последующей обработкой сульфатом железа в присутствиибромной воды и добавления этиловогоспирта и фотометрирования полученногопри этом раствора 21,е 5Недостатками способа являются невысокая точность - ошибка определения0,83, низкая чувствительность 1,0 мкгдлительность, время определения 4550 мин, спожность проведения анализа 30 я - повышение тности, избиратея времени опредеу р особа.Поставленная цель достигаетсячто согласно способу количественнопределения ГИНК в качестве солитетразоля используют 0,0990,010-ный водный раствор китротетрлиевого синего и проводят обработпри рН среды 11,0-12,1 с последуобработкой полученного раствораформом и фотометрированием хлороменного слоя.Реакция между ГИНК и нитротетрзолиевым синим протекает в молярнсоотношении 1:1, спектральные хартеристики продукта реакции, получные с помощью спектрофотометраСФ, свидетельствуют о том, чтомаксимум светопоглощения окрашеннраствора находится при длине волн).= 530 нм.Количественное определение ГИНпроводят фотометрическим способомпредварительно построенному калибвочному графику, Оптическую плотность раствора измеряют на Фотоэлектроколориметре ФЭК 56-М в кювете столщиной рабочего слоя 20 мм, светофильтр Р б ( Л= 540 т 10 нм). В качестве раствора сравнения применяют хлороформ (слепой опыт),Построейие калибровочного графикадля ГИНК.В делительные воронки помещалиО( 1 02 0,31 04) 0,5 е О,бф Ок 7 млстандартного раствора (концентрацияГИНК в стандартном растворе 0,5 мг/мл)в каждую воронку добавляют соответственно О 9 у О 8; О 7 р 0 б; О 5 р О 4 у0,3 мм дистиллированной воды, по 1 мл0,1-ного водного раствора нитротетразолиевого синего, 0,4-05 мл 0,1 н,раствора едкого натра для созданиярН 11,0-12,10, Крашенные продуктыизвлекают дважды хлороформом по20 мл. Хлороформенные извлечения переносят в мерные колбы емкостью 50 мли доводят объем экстракта до меткихлороформом, В качестве растворасравнения используют хлороформ (слепой опыт), Оптическую плотность окрашенных растворов измеряют с помощьюФотозлектроколориметра ФЭК 56-М вкювете с толщиной рабочего слоя 20 мм,светофильтр Р 6 (Л = 540110 нм), Порезультатам измерения оптическойплотности строят калибровочный граФикКоличественное определение ГИНКпри рН = 11,0.П р и м е р 1. Определение ГИНКв нижней области графика. Содержание ГИНК 0,05 мг в пробе,Точную навеску, около 0,05 г изониазида, переносят в мерную колбу.емкостью 100 мл, растворяют в дистиллированной воде и доводят объемраствора водой до метки, 0,1 млприготовленного раствора (содержаниеГИНК в пробе 0,05 мг) переносят вделительную воронку, куда добавляютпоследовательно, "0,9 мл дистиллированной воды, 1 мл 0,099%-ного водного раствора нитротетразолиевогосинего, 0,4 мл 0,1 нраствора едкого натра, В результате мгновеннообразуется Фиолетовое окрашивание,Окрашенный продукт извлекают дваждыхлороформом по 20 мл. Хлороформенные цзвлечения переносят в мернуюколбу емкостью 50 мл и доводят объемэкстракта до метки хлороформом. Вкачестве раствора для сравнения используют хлороформ (слепой опыт),Оптическую плотность окрашенногораствора измеряют с помощью Фотоэлектроколориметра ФЭК 56-М, кювета 20 ммпри Л = 54010 нм.Результаты количественного определения и статической обработки 10определений ГИНК в нижней областиграфика представлены в табл,1,П р и м е р 2. Определение ГИНКв оптимальной области графика. Содержание ГИНК 0,20 мг в пробе.Точную навеску, около 0,05 гизониазида, переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора водой до метки, 0,4 мл приготовленного раствора (содержание ГИНК в пробе 0,20 мг) переносят в делительную воронку, куда добавляют последовательно: 0,6 мл дистиллированной воды, 1 мл 0,1-ного водного раствора нитротетразолиевого синего, 0,4 мп 0,1 н.раствора едкого натра, В результате образуется мгновенно фиолетовое окрашивание. Окрашенный продукт извлекают дважды хлороформом по 20 мп. Хлороформенные извлечения переносят в мерную колбу емкостью 50 мл и доводят объем экстракта до метки хлороформом. В качестве раствора сравнения используют хлороформ слепой опыт). Оптическую плотность окрашенного раствора измеряют с помощью фотоэлектроколориметра ФЭК 56-М, кювета 20 мм при Л= 540+10 нм,Результаты количественного определения и статической обработки 10 определений ГИНК в оптимальной области графика представлены в табл, 2,П р и м е р 3, Определение ГИНКв верхней области графика, Содержание ГИНК 0,35 мг в пробе.Точную навеску,около 0,05 г изониазида, переносят в мерную когбу емкостью 100 мл, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора водой до метки. 0,7 мл приготовленного раствора (содержание ГИНК в пробе 0,35 мг) переносят в делительную воронку, куда добавляют последовательно: 0,3 мл воды дистиллированной, 1, мл 0,1-ного водного раствора нитротетразолиевого синего, 0,4 мл 0,1 н.раствора едкого натра, В результате мгновенно образуется Фиоле 4 товое окрашивание. Окрашенный продукт извлекают дважды хлороформом по 20 мл. Хлороформенные извлечения переносятв мерную колбу емкостью 50 мл и доводят объем экстракта до метки хлороФормом (слепой опыт), Оптическуюплотность окрашенного раствора измеряют с помощью фотоэлектроколориметра ФЭК 56-М, кювета 20 мм при Л ==540+10 нм,Результаты количественного определения и статической обработки 10определений ГИНК в верхней областиграфика представлены в табл, 3,Количественное определение ГИНКпри рН = 12,1,П р и м е р 4. Определение ГИНКв нижней области графика. СодержаниеГИНК 0,05 мг в пробе,Точную навеску,около 0,05 г изониазида, переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора водой до метки, 0,1 мл приготовленного раствора (содержание ГИНКн пробе 0,05 мг) переносят в делительную норонКу, куда добавляют последовательно: 0,9 мл дистиллированной воды,1 мл 0,1 Ъ-ного водного раствора нитротетразолиевого синего, 0,5 мл0,1 н.раствора едкого натра, В реэультате мгновенно образуется фиолетовоеокрашивание. Окрашенный продукт из- цвлекают дважды хлороформом по 20 мл,Хлороформенные извлечения переносятв мерную колбу емкостью 50 мл и доводятобъем экстракта до метки хлороформом. Вкачестве раствора сравнения используют хлороформ (слепой опыт), Оптическую плотность окрашенного раствора измеряют с помощью Фотоэлектроколориметра ФЭК 56-М, кювета 20 ммпри Л = 54010 нм.Результаты количественного определения и статической обработки 10определений ГИНК н-нижней областиграфика представлены в табл, 4,П р и м е р .5. Определение ГИНКв оптимальной области графика,.Содержанне ГИНК 0,20 мг в пробе,Точную навеску, около 0,05 г изониазида, переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раство- ЗОра водой до метки.0,4 мл приготовленного раствора (содержание ГИНК в пробе0,20 мг) переносят в делительную воронку, куда добавляют последовательно: 0,6 мл дистиллированной .воды, р1 мл 0,1-ного водного раствора нитротетраэолиеного синего, 0,5 мп 0,1 н.раствора едкого натра. В результатеобразуется мгновенно Фиолетовое окрашивание, Окрашенный продукт извлекают дважды хлороформом по 20 мл, ХлороФорменные извлечения переносят нмерную колбу емкостью 50 мл и доводятобъем экстракта до метки хлороформом. В качестне раствора сравненияиспользуют хлороформ (слепой опыт), 45Оптическую плотность окрашенногораствора измеряют с помощью фотоэлектроколорнметра ФЭК 56-М, кювета20 мм при Л= 54010 км.Результаты количественного определения и статической обработки 10определений ГИНК н оптимальной области графика представлены в табл.5.П р и м е р б. Определение ГИНК в верхней области графика. Содержание ГИНК 0,35 мг в пробе.Точную навеску, около 0,05 г изониазида, переносят н мерную колбу емкостью 100 мл, растворяют в дистил лированной воде и доводят объем раст вора водой до метки. 0,7 ил приготовленного раствора (содержание ГИНК в пробе 0,35 мг) переносят в делительную воронку, куда добавляют последовательно: 0,3 мл дистиллированной 65 воды, 1 мл 0,099-ного водного раствора нитротетраэолиевого синего,0,5 мл 0,1 н.раствора едкого натра,В результате мгновенно образуетсяфиолетовое окрашиваниеОкрашенныйпродукт извлекают дважды хлороформомпо 20 мл. Хлороформенные извлеченияпереносят в мерную колбу емкостью50 мл и доводят объем экстракта дометки хлороформом (слепой опыт).Оптическую плотность окрашенного раствораизмеряют с помощью фотоэлектроколориметра ФЭК 56-М, кювета 20 мм при3. = 540110 нм.Результаты количественного определения и статической обработки 10определений ГИНЕ в верхней областиграфика представлены в табл. б,П р и м е р 7. Количественноеопределение ГИНК в таблетках с содержанием действующего вещества 0,3 г.Точную навеску, около 0,05 г порошка растертых таблеток, взбалтываютс 30 мл дистиллированной воды, раствор Фильтруют в мерную колбу емкостью)100 мл, промывая осадок на фильтре20-30 мл воды. Полученный объем растнора доводят водой до метки, 0,4 млприготовленного раствора переносятв делительную воронку, добавляют0,6 мл дистиллированной воды,1 мл0,1"ного водного раствора нитротетразолиевого синего и 0,4-0,5 мл 0,1 и.раствора едкого натра для созданиярН среды 11,0-12,1. Образовавшийсяокрашенный в Фиолетовый цвет растворизвлекают дважды хлороформом по 20 мл,собирая экстракт в мерную колбу емкостью 50 мл, Объем экстракта доводят до метки хлороформом. Оптическуюплотность окрашенного раствора измеряют с помощью фотоэлектроколори,иетра ФЭК 56-М н кювете с толщинойрабочего слоя 20 мм, при А. = 540110 нм. В качестве раствора сравнения используют хлороформ (слепойопыт).Результаты количественного определения и статической обработки 10определений ГИНК в таблетках представлены в табл. 7,Как видно иэ данных, приведенных в таблицах 1-6, относительная ошибка метода количественного определения ГИНК в оптимальной области не превышает +0,67, а в случае таблеток (табл. 7) Ф 1,69, что полностью удовлетворяет требованиям фармацевтического анализа,Сравнительная характеристика методов количественного определения гидраэида изоникотиновой кислоты по следующим параметрам точность, чувствительность, время выполнения внутри- групповая специфичность представлена в табл, 8.Предлагаеьнй способ точен, прост в выполнении, высокочувствителен( чувствительность реакции составляет10 7 г/ип) и специфичен. Подобнуюреакцию не дает ни один из препаратов произвОдных изоникОтинОВОЙ кис -лоты (метазид, фтивазид, ларусан,салюзид, салюзид растворимый и др.),а также исходные продукты синтезаГИНК,и для определения примеси ПИНК впротивотуберкулезных препаратах производных изоникотиновой кислоты приконтроле качества препарата в заводских условиях и контрольно-аналитических лабораториях. Количество аналитических операций сокращают с 8 до5, что упрощает анализ исокращаетвремя его проведения на 20-25 мин,полностью исключает расходы этиловогоспирта. В связи с этим метод экстракционной фотсметрии может использоваться Таблица Найдено вещества Метрологическиеданные Содержание вещества в пробе,взятой на анализ, мг Навескавещества,г В пересчете на навеску,г В пробе, мг 0,209 О, 0521 101, 36 Х=99,62 0)0514 0,0514 б =1,16 =0,37 0,0480 0,0488 0,0513 0,192 0,195 0,0490 0,0493 0,0511 0,0490 0,0493 0,0511 Д =0,85 М=99,62+0,205 0,202 0,0504 0,208 0,193 0,201 98,36100,00 99,41 0,203 0 ю 197 99, 39 0,0496 Таблица 2 Содержание вещества в пробе взятой на анализ, мг Найдено вещества Навескавещества,Метрологическивданные В пересчете на навеску,г В пробе,мг10 857810 Т а блица 3 Навескавещества,г Найдено вещества Содержание вещества в пробе, взятой на анализ, мг В пересчете на навеску,г В пробмг 98,77 100,78 99,59 100 т 41 99,80 98,42 100,9 7 99,40 98,04 99,19 Х=99,54=0,30Зр=О, 6 9М=99,54+0,69 А =+0,69 Таблица 4 Метрологическиеданные Найдено вещества Содержание вещества в пробе,взятой на анализ мг Навескавещества,г В пробе, В пересчемг те на на- Ъвеску, г б,0514 0,0514 Х=99,70 0 =0,95 100,39 98,45 98,98 . 98,99 99,40 100,98 0,206 0,203 0,0512 0,0515 0,0512 0,0507 0,0487 0,0507 0,0487 0,0515 0,0492 0,0497 0,0503 0,0510 5=0, 303=0,69М=99,7+857810 Продолжение табл 5 Навескавещества,г Содержание вещества в пробе,взятой на анализ, мг Найдено вещества Метрологическиеданные В пробе, В пересчемг те на %навеску, г 0,1992 0,2032 0,2056 0,2016 0,1967 0,2056 0,2048 0,2008 0,0492 0,0514 0,0512 0,0502 0,630 0,658 0,655 0,643 0,0498 0,0508 0,0514 0,0504 99,61 99,60 Найденовещества,г Содержание вещества в пробе,взя- О той на анализ мг Найдено вещества Метрологические дан- ные В пробе, В пересчемг те на на- %веску, г 100,39 100,58 99,80 98,59 %9,60 100,78 99,80 0,3598 Х=99,78 0,3626 0,3437 0,3430 0,3507 0=О, 95 О=0,30К Р+0,69А=+0,69 0,3598 0,3479 0 0508 0,0514 0,0504 О, 3556 О, 3598 0,3528 1,090 1,074 1,084 О, 3563 0,3514 0,3542 0,0509 0,0502 0,0506 100,20 97,66100,40 Таблиц Метрологи.ческиеданные Найдено ГИНК Средний вестаблетки, г Навеска порошка растертых таблеток,В навес- В пересче- В В к ке, г те на сред номинальний вес,г ной Х=100 )09 99,01 99,70 97,63 98,70 99,50 100,70 103,03 101,43 100,10 101,10 0,3237 О, 3237 0,3237 0,3237 Оф 3237 4 Э =2, 39 6=0, 76 3 =1,69 р Р М=100,09 О, 3237 0,3237 0,3237 0,3237 0620 А=+169 0,630 0,620 0,610 0,3237 0,0512 0,05150,0492 0,0497 0,0503 0,0510 0,0498 0,0490 О 0487 0,0483 0,0492 0,0488 0,0495 0,05100,0518 0,0512 0,0507 0,3500 0,3605 0,3444 0,3479 0,3521 О, 357.0 0,3486 1,100 1,109 1,051 1,050 1,071 1,100 1,064 0,582 0,578 0,566 0,584 0,578 0,586 0,0450 0,0450 0,0437 0,0450 0,0450 0,0462 0,0487 0,0487 0,0475 0,0475 0,0514 0,0518 0,0491 0,0490 0,0501 0,0514 0,0497 0,2973 0,29910,2929 0,2961 0,2985 О, 3021 О, 3091 0,3043 0,3003 0,3033 98, 79 А=0,62101,18. Таблица 6ь 5 7810 14 Таблица 8 Навескавеще ст эа,г Чувствительностьмкг Количество аналитическойоперации Точность.анализав оптимальнойточке Найдено ГИНК Времяанализа,мин Специфичность Способ Известный Неспеци 1 45 50 8 фнчный+0,67 0,2 Формула изобретения Способ количественного определения гидразида изоникотиновой кислоты путем обработки анализируемой пробы солью тетразолия с использованием фотометрирования, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью упроще" ния и сокращения времени определе,ния, в качестве соли тетразолия используют 0,099-0,10-ный водный раствор нитротетразолиевого синего и обработку ведут при рН среды 11,0- 12,1 с последующей обработкой полуСоставитель Л. Соломенцева Техред Т. Маточка Корректор Г. Решетник Редактор Н. Рогулич Заказ 7230/70 Тираж 907 Подписное. ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5ченного раствора хлороформом и фотометрированием хлороформенного слоя. 45Источники инФормации,принятые во внимание при экспертизе1. Коренман И.М. Фотометрическийанализ. Методы определения органических соединений, И., фХимия",0 1970, с, 234.2. Иаайв И.й., Иаафд АЬоцг,Агав Рагоод. ЬрессгорЬойовефгсдейегв 1 пас 1 оп о хоп 1 сой 1 п 1 с ас 1 дЬудгааде. " "И 1 МгосЬ 1 в асса",1966,5, р. 513-517 (прототип).