Способ внутригрупповой дифференциации есно-вирусов

СОЮЗ СОВЕТСКИХсОциАлистическихРЕСПУБЛИК БО 18244 12 й 7/)5 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ МУ СВИДЕТЕЛЬС К АВТО тического эффекта ЕСНО 2. 3, 6, 8, 9, при отсутствии его инкубируют в пришеуказэннойконии цитопэтического группе ЕСНО 1,5,При наличии цитопа вирусы относят к группе 11,12, 13, 19,20 и 25, а культуру дополнительно сутствии трипсина в вы центрации и при появлен эффекта вирусы относят к ОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССРГОСПАТЕНТ СССР)(57) Использование: вирусология, медицина. Сущность изобретения: предложенный Изобретение относится к )ледицинской вирусологии и может быть использовано для внутригруппооой дифференциации вирусов ЕСНО.Цель изобретения - изыскание нового способа, позволяющего проводить предоарительную онутригрупповую дифференциацию вирусов ЕСНО на отдельные серогипы.Для реализации поставленной цели штаммы, принадлежащие к вирусам ЕСНО, культивируют в перевиваемой культуре клеток амниона человека Н. в отсутствии и при наличии трипсина в концентрации 50,04.6,6 мкг/мл в питательной среде клеток, с последующим выявлением цитопатического эффекта. способ позооляет произвести предварительнуо онутригруппооую дифференциацию вирусов ЕСНО. Добавление трипсина в концентрации 50,0 мкг/мл о питательную среду переоиоэел 1 ой культуры ГЕ позооляет дифференцировать ЕСНО-вирусы на ЕСНО 2,3,6,8,9,11,1213,19,20,25 и ЕС НО 1.5,7,16,21,22,24,27, Остальные сдротипы, не оызыоэ ощие цитопатический эффект в присутствии и отсутствии трипсина (при их репродукции о фибробластах эмбриона челооека) относят к вирусам ЕСНО 4,14,15,17,18,23,26,29,30,31 и 32. 7, 16, 21, 22, 24 и 27, а прн отсутствии его - к группе ГСНО 4, 14, 15, 17, 18, 23, 26, 29.30,31, 32,П р и м е р. Исследованию подвергали стандартные штэммы ЕСНО-оирусоо(ЕСНО 1,2, 3,4,5, 6,7,8,9, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 10, 19,20,21,22,23,24,25,26,27,29,30,31, 32), э также 47 штамллоо энтеровирусов группы ГСНО, выделенных от детей, больных серозным менингитом, э также из водных обьектоо (сточных вод, воды открытых водоемоо, систе)лы питьеоого водоснабжения) окружающей среды, Индикацию вирусов хиллическим соединением проводили в культуре клеток амниона человека (ГЕ),Клетки аллниона человека выращивают в среде Игла (рН 7,2) с глутамином, с добавлением 7,0 телячьей сыворотки или сыворотки крупного рогатого скота. За 3 часа до внесения вируса клетки отмывают средой 199, затем проводят смену на среду того же состава без сыворотки, но с добавлением аморфного трипсина, о конечной концент1824242 Составитель К.Спыну Техред М.Моргентал сКорректор А.Мотыль Редактор Заказ 2216 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 рации 50,0 мкг/мл. Вируссодержащий материал вносят на монослой после удаления среды из расчета 0,1 мл х 10 ЦПД 5 о/мл наэ250 тыс. клеток и после часового контакта культуру заливают средой, содержащей трипсин в такой же концентрации (50,0.ф.б,б мкг/мл), и инкубируют при 37,0 Ю,1 С. Аналогичным образом инфицируют культуру Г 1, в питательную среду которой не добавляют трипсин, Инфицированные пробирки инкубируют при 37 С в течение 48-72 часов. Результат оценивают по ЦПДзо вируса, в случае его развития в РЕбез добавления к питательной среде трипсина исследуемые штаммы относят к вирусам ЕСНО 2, 3, б, 8, 9, 11, 11, 12, 13, 19, 20, 25, а при развитии цитопатического эффекта в культуре клеток, куда предварительно был внесен трипсин, штаммы относят к ЕСНО 1, 5, 7, 16, 21, 24 и 27.В случае отсутствия цитопатического эффекта в культуре клеток ЕЬ,неподвергнутых протеолитической обработке, а также содержащих в питательной среде трипсин, их относят к серотипам ЕСНО 2, 12, 15, 17, 18, 23, 26, 29, 30, 31, 32. Аналогичным образом проводили предварительную дифференциацию 46 штаммов ЕСНО-вирусов, выделенных от больных детей серозным менингитом, а также из водных объектов окружающей среды. Это позволило выделить их в 3 подгруппы ( подгруппа: ЕСН О 2 - 1 штамм, ЕСНО б - 10 штаммов, ЕСНО 12 - 1 штамм, ЕСНО 13 - 1 штамм: И подгруппа: ЕСНО 1 - 6 штаммов, ЕСНО 7 - 12 штаммов, ЕСНО 21 - 1 штамм;И подгруппа: ЕСНО 4 - 1 штамм, ЕСНО 17 - 9 штаммов, ЕСНО 29 5 - 2 штамма. ЕСНО 32 - 2 штамма). что впоследующем было подтверждено в реакции нейтрализации, выполненной в культуре клеток фибробластов эмбриона человека.Таким образом, предлагаемый способ в 10 отличие от известного позволяет провестипредварительную внутригрупповую дифференциацию ЕСНО-вирусов, Технология предложенного способа несложна по выполнению, экономически выгодна. т.к, не 15 связана с дополнительными материальными затратами, доступна для любой вирусологической лаборатории,Формула изобретения Способ внутригрупповой дифференциа ции ЕСНО-вирусов, включающий выращивание клеток Е, их заражение с последующим определением цитопатического эффекта, и вынесением на основании этого сужения, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что 25 при наличии цитопатического эффекта вирусы относят к группе ЕСНО 2, 3, 6; 8, 9, 11, 12, 13, 19, 20, 25, а при отсутствии его культуру дополнительно инкубируют в присутствии трипсина в концентрации 50 6,6 мкг/мл и 30 при появлении цитопатического эффектавирусы относят к группе ЕСНО 1,5,7, 16,21, 22, 24, 27, а при отсутствии его к группе ЕСНО 4, 12, 15, 17, 18, 23, 26, 29, 30, 31, 32,