1-(2-оксиэтоксиметил)-1, 2, 4-триазол-5-карбоксамид, обладающий активностью противвируса герпеса

(54) в (2-ОКСИЭТОКСИМ ТРИАЗОЛ-КАРВОКСАМИД АКТИВНОСТЬЮ ПРОТИВ ВИ (57) 1-(2-оксиэтоксим триаэол-карбоксамид ТИЛ)-1,2,4 ОБЛАДАЮЩИЙ фУСА ГЕРПЕСАтил/-1,2,4 формулы С СНОСН СН 2 ОН ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ(71) Институт молекулярной биологииАН СССР и Институт вирусологииим.Д.И.Ивановского(56) ЯЫче 11 КНцггщап Л.Н,КЬаге С.Р., 1,.В.А 11 еп Ртояресггцщапг 1 ч 1 та 1 асг 1 ч 1 гц оГ ч 1 гаяо 1Яс 1 епсе, 177, 705 (1972).Нцггвап .1.Н, ЯЫие 11. К.У.,КЬаге С.Р., А 11 еп 1 В. КоЬЫпв К.К.,Иг 1 соювсу 1.Т. 1 п ч 1 гго еГЕесг ой1-Я-П-г 1 Ьойцгапоя 11-1,2,4-гг 1 аяо 1 е 3-сат 1 охавЫе (ч 1 гаяо 1 АСЯ 1229)оп йЬе т 1 Ьапцс 1 е 1 с апс 1 оеаху-г 1 Ьопцс 1 е 1 с чхтцяея А 8 епсв апй СЬевогЬегару. ч. 3, 235 (1973) .Нагг 1 я Я РтоЪ 1 пя К.К.,К 1 Ьаг 1 п. А.Вгоад Яресггца Апг 1 ч 1 га 1Адепт, Ей. К,А.ЯппгЬ Асад.Ргезз,Я 3. 1980.Вацег Р.,1 Со 111 пв Р. 9-(2-Ну 8 гохуегЬохувегЬу 1) Вцап 1 пе асг 1 ч 1 гу аяаеа 1 пя ч 1 гцяев от гЬе Ьеярев ятоцр.Яагцте, 272,583-585 (1978). НагаепЬег 8 Л., 11 аЬгеп В., ОЬегя В.1 пй 1 цепсе оЕ се 11 ч 1 тцв шц 1 гр 1 еййу оп гЬе 1 п 81 Ьдгюп ой Ьегрез чдгцз ы 1 гЬ асус 1 о 8 цапоз 1 пе. Тпгегч 1 го 1 оу 14, 239 (1980).Лопев К.С., А 1 пяиоггЬ С.1,2,4- Тг 1 аво 1 еа 1 апже Л.Ащег.СЬеш.Яос 77, Н 6, 15.38-1540 (1955).Л.Ю.Тычинская и В.Л.Флорентьев. Синтез 9-(-окси-этоксиметил ) адемина и 1-(-оксиэтоксиметил ) цитоэина"Биоорганическая химия", 4, У 11, 1461-1463 (1978)., обладающий активностью против вируса герпеса,1124559 ТаблицаИзучение влияния препаратов на морфологиюклеток СЧЦитотоксическое действие ( ЦТД) Концентрация Препарат мкг/мл 24 ч48 ч 72 ч 96 ч 2+ 250 Рибавирин 125 60 1+ 250 Соединение 1 125 2+ 60 очистку препарата осуществляют двумяспособами.Способ А.Остаток растворяют в50 мл этанола, добавляют 40 см силизкагеля Л 40/100 мкм (СЬепаро 1,Чехословакия), (взятого по объему)и упаривают досуха, Обработанный таким образом силикагель наносят наколонку (4 х 15 см ) с силикагелем тойже степени дисперсности (суммарныйобъем силикагеля не более 220 см ).3Элюцию проводят смесью хлороформэтанол (линейный градиент от 0 до30% этанола, общий объем 2 л ), Фракции, содержащие соединение 1 ( элюирующая концентрация этанола 10%),упаривают.досуха. Вещество 1 перекристаллизовывают из этанола выход.3,35 г, 45 %,Способ Б. Остаток растворяют принагревании в этаноле, оставляют наночь при комнатной температуре,осадок отделяют, маточный спиртовыйраствор упаривают досуха, остатокперекристаллизовывают из этанола.Выход вещества 1 3,19 г, 43%. Оба способа выделения дают возможность количественного отделенияот побочных продуктов,Физико-химические характеристикиосоединения 1: т:пл.111-112 С3:205 (8600), 215,5 1 8600)(Б); хлороформ - спирт (7:3)(В).10 П р и м е р 2. Определение цитотаксического действия и противовируснойактивности 1-2-оксиэтоксиметил)-1,2,4-триазол-карбоксамида.Учитывая, что заявляемое вещество15 содержит в качестве гетероцикла азотистое основание рибавирина, биоло"гическую активность нового веществаизучали.в сравнении с рибавирином("ТСН",СЩА),20 Изучение цитотоксического действия проводили на перевиваемой линииклеток СО(клетки почек африканскихзеленых мартышек), В качестве средыподдержки использовали питательную25 среду У .199, содержащую 10% эмбрио"нальной телячьей сыворотки ("ОхЬсо",ЯсоЕ 1 ап 1) .Показано, что соединениеобла". дает значительно меньшим цитотоксическим действием, чем рибавирин. Так,в концентрации 250 мкг/мл он практи"чески не изменяет морфологии клетокв течение 96 ч контакта, в то времякак рибавирин в аналогичной концентрации вызывает 50% токсический эффект.Данные о влиянии заявленного пре"парата на морфологию клеток представлены в табл.).Таблица 2Синтез ДНК в культуре клеток СЧ 1в присутствии препаратов Время после введения препаратов, ч Вариант нмоль на % подав5 х 10 клето ления нмоль на % подав 5 х 10 кле- ления .5ток 6,14+0,3 4,7+0,3 хКонтроль 59% 0,87+0,3 86 Рибавирин1 х 10 М(250 мкг/мл)Соединение1,32 х 10 М(250 мкг/мл) 1,96+0,3 2)40+ОеЗ 44% Зю 17+Ою.З .49 П р и м е ч а н и я: - контроль-клетки, необработанные препаратом;.контакт с Н-тимидином продолжался 1 ч при 37 С,3Изучение противовирусной активнос ЗО по цитопатическому действию и выти соединения проводиЛи в той же кле- ражали в 19 ТЦДу/мл. точной системе, В качестве инфекционного материала использовали вирус. Изучение влияния испытуемого простого герпеса 1 типа; штамм1 . соединения на развитие инфекционно- Множественность инфицирования .0,001 35 го процесса в клетках СЙ показаИДьо на клетку. Препараты вводили ло, что во всех используемых концентв состав среды поддержки непосредст- . рациях соединение 1 задерживает развенно после адсорбции вируса, Ин- витие вирусной инфекции. фекционный титр вируса определяли , Данные представлены в табл, 3.Т а.б л и ц а 3Влияние соединения 1 на развитие цитопатическогодействия, вызываемого вирусом простого герпесав клетках СЧ 1 Цитопатическое действие Концентрация, мкг/мл Препарат Время после заражения, ч 48 72 96 инфицированные клетки 4+ 1+ 3+ 1+ 250 Инфицированныеклетки, обрабо"танные соединением Г 1+ 125 1+ 60 30 3 11Эти данные полностью согласуются,с результатами по изучению влияния препарата на синтез клеточной ДНК. Определение синтеза ДНК прово- дили по включению Н-тнмидина ( СССР,5Ленинград, уд,активность 22 кюри/ /ммоль)вкислотонерастворимую фракцию.Введение соединения 1 в концентрации 250 мкг/мл вызывало лишь частич 24559Ьное угнетение синтеза клеточной ДНК(44 и 49% ) через 24 и 48 ч инкубациисоответственно; в аналогичных условиях рибавирин ингибировал этот процесс на 86% ( табл.2); концентрация125 мкг/мл соединения 1 вызываланедостоверное снижение синтезаклеточной ДНК , не превыйающее15%.1124559 Таблица 4Влияние препаратов на репродукцию вируса герпесав культуре клеток С Концентрация, Титр вируса, Подавление титра мкг/ми ТБд / вируса,уцц / Препарат Инфицированныеклетки 6,0 2,5 3,5 Инфицированныеклетки, обработанные рибавирином 125 1,5 4,5 60 4,0 2,0 125 Инфицированныеклетки, обработанные соединением 1 3,5 2,5 60 3,0 3,0 30 2,0 4,0 4,5 7,5 П р и м е ч а н и е: Множественность инфицирования 0,001 ИД,О наклетку.Соединения вводили в среду поддержкинепосредственно после адсорбции вируса. Т а б л и ц а 5Изучение, вирулицидного действиясоединения 1 . ходныи вирус рус 14 ч, 37 С),5 5 ием соедин аб Вирус, о соединен 6,5 Изучение влияния соединения 1 на накопление инфекционного вируса представлено в табл.4. Очевидно, что испытуемое соединение обладает значительно большей антигерпетическойОбработка вируса герпеса соединением 1 в рабочих концентрациях практически не снижает его инфекционнос-. нныи 4 ч, 37 оС нный 4 ч, 37 С активностью, чем рибавирин; концентрация 125 мкг/мл снижает титр вируса на 4 1 р ДЦДзв/ц и даже концентрация 7 р 5 мкг/млвызывает достоверноеподавление инфекционноготитра вируса.ти (табл.5); таким образом, испытуемое соединение не обладает вирулицидным действием.1124559 Редактор П.Горькова 1 ехред М.Иоргентал Корректор М.Демчик Заказ 3725/ = Тираж 379 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул. Проектная, 6 9Таким образом, проведенные испытания показывают, что новое соединение обладает выраженной противо 1 Овирусной активностью и избирательно подавляет репродукцию вируса простого герпеса.