Способ определения противосудорожных препаратов в биологических жидкостях

СОЮЗ СОВЕТСКИСОЦИАЛИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИК А 1 1 ( ИЗЗ 15 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ Г ч Ы омоносова .Г. Ляшенко Лисичкин 1985, ч. 57, У 8,ОСУДОКИХ носится к ме ся к биохиминию противометодом жидпри умеренноми может быть Изобретение относи .в частности к определ судорожных препаратов костной хроматографии (до 50 бар) давлении использовано для анал за плазмы промывают на стеклянн 350 мл диоксана, суша 0,1 М карбонатным буф ром с рН 8,5 0,6 г г на растворяют в 10 мл ного раствора и добав и промывают рным раство- ицин-Ь-лейцитого же буфер. и ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К д ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОЖНЫХ ПРЕПАРАТОВ В БИОЛОЖИДКОСТЯХ(57) Изобретение от ови, спинно-мозгового ликвора ил слюны пациентов.Цель изобретения - увеличение чув ствительности определения противосудорожных препаратов за счет исполь зования кремнезема с размером частиц 11 -15 мкм, содержащего привитые к внутренней поверхности пептидные группы формулы глицин - Ь-лейцин,а в качестве элюента - водный буферный раствор с рН 7,1 -7,4,П р и м е р. 10 г силикагеля Силасорб Бс диаметром пор( нм и частицами 15 мкм обрабатывают гамцикемЬжет быть использовано дляопределения противосудорожных препаратов в биологических жидкостях.Цель изобретения - увеличение чувствительности способа определения. Плазму крови пациента наносят на колонкудля жидкостной хроматографии и элю, -ируют буфером с рН 7,1 -7,4 в гра-диенте концентраций трис-гидроксиметиламинометана от 0 до 0,015 М.В качестве носителя используют кремнезем с размером частиц 11 -15 мкм,содержащий привитый к внутреннейповерхности пептид формулы глицин-Ь-лейцин. 1 ия. ма-глицидоксипропилтриэтоксисиланом в натрий-ацетатном буферном растворе (рН 5,65) при нагревании на водяной бане и перемешивании. Продукт отмывают водой и кипятят 1 ч в 0,01 М НС 1 для образования диольных групп . Далее сорбент отмывают водой, ацетоном и 200 мл абсолютированного диоксана для обработки раствором паратолуолсульфохлорида в абсолютированном диоксане, которую осуществляют при комнатной температуре в присутствии пиридина или триэтиламина.Полученную активированную гликофазуом фильтре1476377 7 Ч б 8 Время,. ююоставитель Л. Сабу Техред Л.Олийнык Редактор М. Петрова Корректо жо Тираж 79 Заказ 2150/45ВНИИПИ Государственно11303 одписно о изобретен 35, Раушска ггиям при ГКНТ СССР4/5 о комитет Москва,и от изводственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород,агарина, 1 вированную гликофазу, которую выдерживают при комнатной температуре 2 ч, отмывают в стеклянном фильтре и обрабатывают 0,5 М трис-НС 1 буферным раствором с рН 0,9, Сорбент5 , с привитым пептидом помещают в 10 мл раствора, содержащего 0,5 г цистеина и 0,1 г папаинаи выдерживают 2 ч для удаления пептида с доступных для фермента мест. Сорбент промывают водой, ацетонитрилом и высушивают.П р и м е р 2. 80 мкл крови па" циента смешивают в эппендорфе с 20 мкл цитратного буферного раствора и центрифугируют 2 мин.при 5000 об/мин. Образовавшийся слой плазмы отбирают шприцем и 25 мкл пробы наносят на колонку для жидкостной хроматографии, после чего 20 элюируют 0,2 М фосфатным буферным раствором в градиенте концентрации трис-(гидроксиметил)аминометана от 0 до 0,015 М. Продолжительность анализа 10 мин, рН 7,4. 25На чертеже представлен профиль хроматографического разделения противосудорожных препаратов в плазмекрови. Формула изобретения Способ определения противосудорожных препаратов в биологических жидкостях, включающий центрифугирование анализируемой жидкости, пропускание полученного супернатанта в потоке элюента через колонку, заполненную сорбентом с диаметром пор 6-10 нм, с гидрофильной внешней поверхностью и внутренней поверхностью, модифицированной гидрофобным пептидом, с последующим детектированием белковых и низкомолекулярных фракций, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве сорбента используют кремнезем с размером частиц 11-15 мкм, содержащий привитый к внутренней поверхности пеп - тид формулы глицин-Е-лейцин, а в качестве элюента - водный буферный раствор с рН 7,1-7,4,