Способ выделения бактериофагов
Формула | Описание | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 1412302
Авторы: Афанасьева, Байгузина, Боговазова, Борщов, Ворошилова, Горбаткова, Казакова, Перепечкин, Федотова
Формула
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ путем фильтрации фаголизатов через фильтры с последующей очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и степени его очистки, фильтрацию проводят последовательно через фильтр-картон и каскад целлюлозных мембран с размером пор 0,5 0,7 и 0,2 мкм, а очистку проводят ультрафильтрацией и диафильтрацией на полых ультрафильтрационных волокнах с порогом задержания веществ с мол.м. 100000 дальтон.
Описание
Цель изобретения повышение выхода целевого продукта и степени его очиcтки.
П р и м е р 1. Фаголизат бактериофага клебсиелл пневмонии К-555, содержащий 7
109 лизированных бактериальных клеток в 1 мл, 2,4 1010 фаг. част. /мл, фильтруют через фильтр-картон (префильтр). Через 1 м2 площади префильтра пропускают 10 л фаголизата. При этом удаляют 97,99% бактериальных клеток. Затем фаголизат последовательно стерильно фильтруют через каскад целлюлозных мембран с размером пор соответственно 0,7 и 0,2 мкм. Через 1 м2 площади каждого фильтра можно пропустить в среднем 63 л фаголизата. Профильтрованный фаголизат не содержит бактериальных клеток, концентрация фага составляет 1,9 1010 фаг. част. /мл, выход 80% Концентрация белка в профильтрованном фаголизате 10000 мкг/мл, в расчете на единицу активности (фаговую частицу) 5347,6 10-10 мкг/фаг. част. Объем фаголизата 10 л.Профильтрованный фаголизат концентрируют в 100 раз по объему путем ультрафильтрации через полые ультрафильт- рационные волокна с порогом задержания веществ с мол. м. 100 тыс. дальтон в режиме ламинарного потока в полости волокон со скоростью 130-150 л/ч при давлении 0,4 ати. Затем в тех же условиях проводят диафильтрацию в постоянном объеме 10-кратным объемом стериального диафильтрующего раствора, содержащего 0,14 М NaCl, 0,001 MgCl2, 0,003 M KH2PO4, 0,007 M Na2HPO4, рН 7,0-7,2. Диафильтрат разводят до исходного объема (10 л) диафильтрующим раствором и консервируют добавлением 5% хлороформа.
Полученный диафильтрат содержит 1,9
1010 фаг. част./мл, выход фага 100% абсолютное содержание белка в диафильтрате 150 мкг/мл, концентрация белка на фаговую частицу 78,9 10-10 мкг/фаг. част. степень очистки 98,5%П р и м е р 2. Фаголизат дизентерийного бактериофага Зонне S1, фильтруют через фильтр-картон. Затем фаголизат последовательно фильтруют через целлюлозные мембраны с размером пор 0,5 и 0,2 мкм. Профильтрованный фаголизат не содержит бактериальных клеток, концентрация фага 6
1010 фаг. част./мл, концентрация белка 2000 мкг/мл, в расчете на фаговую частицу 333,3 10-10 мкг/фаг. част. Выход фага 71%Затем проводят ультрафильтрацию в соответствии с примером 1. Диафильтрат содержит 6
1010 фаг. част. /мл (выход 100%), 10 мкг/мл белка (1,66 10-10 мкг/фаг. част. ), степень очистки 99,51% По известному способу титр фага 5,9 104 фаг. част./мл, выход 0,0007%Использование способа позволяет повысить выход фага, степень его очистки, а также упростить технологию.
Изобретение относится к медицинской промышленности и может быть использовано при производстве лечебно-профилактических бактериофагов. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и степени его очистки. Фаголизат бактериофага фильтруют через фильтр-картон (префильтр) для удаления бактериальных клеток. Затем фаголизат пропускают через каскад целлюлозных мембран с размером пор 0,5 - 0,7 мкм и 0,2 мкм. Профильтрованный фаголизат концентрируют и очищают последовательной ультрафильтрацией и диафильтрацией на полых ультрафильтрационных волокнах с порогом задержания веществ с мол.м. 100 тыс. дальтон в режиме ламинарного потока в полости волокон. Диафильтрат разводят диафильтрующим фосфатно-солевым раствором и консервируют хлороформом. Выход 100%, степень очистки 98,5 - 99,85%.
Заявка
4195032/13, 16.12.1986
Уфимский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова
Ворошилова Н. Н, Горбаткова Г. А, Казакова Т. Б, Байгузина Ф. А, Боговазова Г. Г, Перепечкин Л. П, Борщов А. П, Афанасьева О. Н, Федотова Е. Е
МПК / Метки
МПК: C12N 7/00
Метки: бактериофагов, выделения
Опубликовано: 09.06.1995
Код ссылки
<a href="https://patents.su/1-1412302-sposob-vydeleniya-bakteriofagov.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ выделения бактериофагов</a>
Штамм бактерий еsснеriснiа coli rfl продуцент рестриктазы е со 105i
Номер патента: 1631081
Опубликовано: 28.02.1991
Авторы: Буткус, Кюдулене, Манелене, Пятрушите, Степонавичене, Янулайтис
Метки: бактерий, еsснеriснiа, продуцент, рестриктазы, штамм
...мМ КаС 1 5 мМ МяС 1., 10 мМ 2-меркаптоэтанол, 100 мкг/мл альбуминабычьей сыворотки, 2 мкг ДНК фага 9в 40 мкл смеси и 1 мкл фермента, Реакцию проводят при 37 С 10 мин, Электорофорез проводят в 0,1 М натрийборатном буфере (рН 8,2) 2 мМ трилон Б,в течение 1,5 ч при напряжении 100 Ви силе тока 100 мА. Окрашенные этидийбромидом (1 мкг/мл) гели просматривают в УФ-свете,За условную единицу принимаетсято количество фермента, которое воптимальных условиях за 1 ч полностьюрасщепляют 1 мкг ДНК фага Я Все операции по выделению и очистке фермента проводят при +4 С.10 г влажной биомассы суспендируют в 20 мл буфера А (10 мМ трис-НС 1-буфер, рН 7,8, содержащий 10 мМ 2-меркаптоэтанола), озвучивают на дезинтеграторе, В полученный бесклеточный...
Способ подготовки пробы культуры растительной ткани к цитометрическому анализу
Номер патента: 999595
Опубликовано: 07.07.1986
Авторы: Александрова, Данилина, Данилов
МПК: C12N 5/00
Метки: анализу, культуры, подготовки, пробы, растительной, ткани, цитометрическому
...Фукса-Розенталя и одновременно подсчитывают жизнеспособность кЛеток, их число (плотностьсуспензии) и размеры.Описываемый способ опробован накультурах тканей корня женьшеня,листа родиолы розовой и листа лукарепчатого.П р и м е р 1. Цитометрический 20анализ культуры ткани по известномуспособу.Цитометрический анализ культурыткани включает ряд отдельных анализов. 25Мацерация ткани для подсчета числа клеток (определение плотности суспенэии).Готовят раствор хромовой кислотыв концентрации 203, 30В пробирку помещают 100 мг кал-лусной ткани и добавляют 207-нуюхромовую кислоту в объеме 1:3.Мацерат помещают в термостат притемпературе 60 С на 15-20 мин.35Вынув пробирку из термостата, еенесколько раз энергично встряхиваюти содержимое...
Способ выделения реснитчатых клеток животных
Номер патента: 1684336
Опубликовано: 15.10.1991
Автор: Сизов
МПК: C12N 5/00
Метки: выделения, животных, клеток, реснитчатых
...активностью не способны увеличить частоту биений ресничек. Поэтому эти мэлоактивные клетки не развивают достаточных сил для того, чтобы отделиться от клеточного слоя. Следовательно, отделяются от тка ни и переходят в клеточную суспензию толькО физиологически активные реснитчатые клетки; Выделенные реснитчатые клетки сохраняют свою нативностьпоскольку имеют на своей поверхности бьющиеся ре снички.Эксперименты, проведенные с реснитчатыми клетками двустворчатых моллюсков, свидетельствуют, что частота биений ресницек лэтерэльных жаберных клеток в 25 покое составляет 10 Гц, а при обработке жабр серотонином частота биений повышалась до 27 Гц, допамином - до 19 Гц. Перфузия жабр двустворчатых моллюсков раствором серотонина с концентрацией от...
Способ получения меченного тритием гуанизин-5-триофосфата
Номер патента: 461622
Опубликовано: 25.10.1976
Авторы: Лавров, Марченков, Михайлов, Мясоедов
МПК: C07H 19/20
Метки: гуанизин-5-триофосфата, меченного, тритием
...целевого продукта,. Михайлов и Н.Ф. Мясоед461622 Составитель И, ОбручниковРедактор О, Сгенина Техред Г. Родак Корректор Н Бабурка Заказ 5442/171 Тираж 575 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР пв делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская набд,4/5филиал ППП "Пагенгф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 дород путем трехкратного изотопного урав - новешивания с водой. Сухой остаток после отгонки последней порции воды растворяют в 15 мл дистиллированной воды и наносят на колонку, содержащую дауэкс 1 х 8 в формиатовой форме (1,0 х 15 см), Колонку промывают 150 мл дистиллированной воды, при этом выходит четкий пик гуанина(Т). Затем при элюции 150 мл 0,25 н, муравьиной кислоты выходит четкий пик гуанозина( Т) ....
Способ получения производных дитиино (1, 4) (2, 3-с) пиррола или их солей
Номер патента: 576942
Опубликовано: 15.10.1977
МПК: C07D 495/04
Метки: 3-с, дитиино, пиррола, производных, солей
...- ( 7 хлорхинолил) - 5,7. диоксо - 2,3,6,7 - тетрагидродитиинопри теытературе около 25 С Пример 12. Суспензию 1,11 г гидрида натрия в 120 мл безводного тетрагидрофурана обрабатывают в течение 20 мин при 10 - 15 мин при 10 - 15 С 11,6 г 6 - (5 - хлорпиридил - 2) - 5 - ок;и - 7 - оксо-2,3,6,7 - тетрагидродитиино 1,4 2,3 - с пиррола, затем добавляют при 5 С раствор 20,4 г 1 - хлоркарбонил 4 - этилпиперазина в 160 мл безводного тетрагидрофурана. Реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч при 5 С. После выпаривания раств ори теля при пониженном давлении (20 мм рт. ст.) остаток растворяют в 400 мл эфира.Эфирный раствор промывают два раза по 150 мл охлажденной 1 н. содой, три раза по 100 мл дистил. лированной водой, обрабатывают 0,2 г...