Способ получения меченного тритием гуанизин-5-триофосфата

О П И 1-А Н "ИЕ"ИЗОБРЕТЕН Ия Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 13.07.73 (21 383/ М КлС 07 Н 19 оединением заявкиосударстаенный комитеСовета Иинистроа СССпа делам изобретенийи открытий 07 В 23/О(43) Опубликовано 25.10.76.Бюллетень53) УДК 547,857 ,7,07 (088.8) Дата опубликования описан 4. 0. Авторызобретен(71) Заявит СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННОГО ТРИТИЕМ ГУА НОЗИН-ТРИФОСФАТА Для этого 8-бромгуанозин подвергаютобработке тритием при 50-150 С с промеожуточным выделением гуанозин - 8 (Т) ипоследующей радиохимической очисткой последнего, совмещенной с биохимическимфосфорилированием.Достоинством способа также являетсявозможность получения гуанозин - 5 -трифосфата заданной удельной активности регули ровкой концентрации трития в газовой смесиЗамещение атома брома в исходном 8 - бромгуанозине на атом трития происходитв мягких реакционных условиях, что позволяет сушественно уменьшить деструкцию 15 маркируемого соединения,П р и м е р . 40,0 мг 8-бромгуанозинаадсорбируют на 400 мг палладиевого катализатора (10% палладия на активированномугле фНорит"), Обработку 8-бромгуанозина 20 газообразным тритием проводят при температуре 100 оС. Продолжительность реакциив атмосфере 50%-ного трития 2 час, Поокончании реакции продукты десорбируют скатализатора, 80 мл 1 0%-ного водного пи ридина и лабильный тритий замещают на воИзобретение относится к области получе ния меченных тритием препаратов биологического назначения, а именно к новому способу получения меченного по 8-му положению тритием гуанозин-трифосфата.Это соединение находит широкое применение в молекулярной биологии.Ключевой стадией при синтезе меченного тритием гуанозин-трифосфата является получение меченого гуанозина(Т).Известен способ получения гуанозин(Т)-5 -трифосфата обработкой 8 - бромгуанозина газообразным тритием в условиях высокочастотного электрического разряда с последующей радиохимической очисткой гуанозина(Т), совмещенной с биохимическим фосфорилированием.Однако сильная деструкция маркируемого соединения снижает удельную активность и чистоту целевого продукта, Кроме того, известный способ требует применения специаль ной аппаратуры и высокопроцентного трития.Цель изобретения - повысить удельную активность и радиохимическую чистоту целевого продукта,. Михайлов и Н.Ф. Мясоед461622 Составитель И, ОбручниковРедактор О, Сгенина Техред Г. Родак Корректор Н Бабурка Заказ 5442/171 Тираж 575 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР пв делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская набд,4/5филиал ППП "Пагенгф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 дород путем трехкратного изотопного урав - новешивания с водой. Сухой остаток после отгонки последней порции воды растворяют в 15 мл дистиллированной воды и наносят на колонку, содержащую дауэкс 1 х 8 в формиатовой форме (1,0 х 15 см), Колонку промывают 150 мл дистиллированной воды, при этом выходит четкий пик гуанина(Т). Затем при элюции 150 мл 0,25 н, муравьиной кислоты выходит четкий пик гуанозина( Т) . Далее выделяют 8-бромгуанозин-Т ( 6 ), используя для элюции 2,2 н, муравьиную кислоту. Получают 10 тс гуанина(Т) с удельной активностью 3,65 кюри/ммоль, 146 гпс гуанозина(Т) с удельной актив- ц ностью 6,7 кюри/ммоль и 8 тпс 8-бромгуанозина-Т( б ) с удельной активностью 0,3 кюри/ммоль. Полученный препарат гуанозина(Т) концентрируют при помощи активированного угля типа фНорит" и фос- щ форилируют, используя 1,0 мл стандартного ферментного раствора, до гуанозин- -трифосфата( Т). Продукты фосфорилирования разделяют ионообменной хроматографией на колонке (Зх 30 см) с ДЭАЭ- цел- р люлозой Ав бикарбонатной форме (Зх х 30 см). Для элюции применяют линейный градиент гриэтиламмонийбикарбонатного буфера рН 8,6 (ог 0,2 М до 0,6 М). Фракции собирают, обессоливают при помощи се+фадекса КМв Н -форме и концентрируют в вакууме, получают 50 тпс гуанозин-трифосфата(Т) с удельной активностью 4,6 кюри/ммоль, Теоретически по приведенной ниже формуле удельная актив ность препарата должна составить 4,1 кюри/ммоль. ТА уд= 2 Д 2 т н+н+Н,где 4 , - теоретически достижимая ак- р) тивность маркируемого соединения в данных экспериментальных условиях, кюри/ммоль;29,2 - коэффициент пересчета удельной активности, кюри/ммоль;Т - количество трития в исходном газе, ммоль;Я - количество водорода в исходном газе, ммоль;МпН =- количество водорода в лабильных положениях маркируемого соединения, ммоль;М - исходное количество бромгуанозина, ммоль;и = 6 - число атомов водорода в лабильных положениях молекул 8-бромгуанозина;Н=0,21 во -количество водорода, содержащегося в катализаторе, способного к изотопному уравновешиванию с тритием, ммоль;- количество катализатора, мг. Полученный препарат гуанозин-гривфосфат-(Т) хроматографически однородени радиохимически чист. формула изобретения Способ получения меченного тритием гуанозин-трифосфата обработкой адсорбированного на палладиевом катализаторе 8- -бромгуанозина газообразным тритием, выделением меченного тритием гуанозина(Г) с последующей радиохимической очисткой последнего, совмещенной с биохимическим фосфорилированием, о т л и ч а ю ш и й с я тем, что, с целью повышения удельной активности и радиохимической чистоты целевого продукта, обработку 8-бромгуанозина тритием проводят при 50-150 оС.